黄芩苷改善肿瘤缺氧微环境抑制乳腺癌移植瘤的生长＊

目的 通过观察黄芩苷对乳腺癌组织毛细血管通透性（Capillary Vessel Permeability，CVP）、赖氨酰氧化酶（Lysyl Oxidase，LOX）及血清丙二醛（Malondialdehyde，MDA）等相关指标的影响，探讨黄芩苷可能的抗乳腺癌作用机制。方法 通过在裸鼠皮下接种MDA-MB-231乳腺癌细胞株建立乳腺癌移植瘤模型；实验分为模型组、黄芩苷组、阿霉素组、黄芩苷+阿霉素组。于接种第7日开始：黄芩苷组每天灌胃黄芩苷水溶液（100 mg·kg^-1），连续14天；阿霉素组每3天腹腔注射一次阿霉素（5mg·kg^-1），共用药5次；模型组每天灌胃生理盐水（10 mL·kg^-1），连续14天；黄芩苷+阿霉素组每天灌胃黄芩苷水溶液（100 mg·kg^-1），连续14天，并每3天腹腔注射一次阿霉素5 mg·kg^-1，共5次。给药期间监测移植瘤体积；紫外可见分光光度计620 nm下测OD值来反映黄芩苷对肿瘤毛细血管通透性的影响；硫代巴比妥酸（Thiobarbituric acid，TBA）比色法检测黄芩苷对裸鼠血清中丙二醛（MDA）的影响；免疫组化染色法检测乳腺癌组织中赖氨酰氧化酶（LOX）的表达情况。结果 ①与模型组比较，黄芩苷组、阿霉素组、黄芩苷+阿霉素组瘤体重量均明显减轻（P<0.05）；黄芩苷+阿霉素组瘤体重量较阿霉素组明显减轻（P<0.05）。②与模型组比较，黄芩苷组降低乳腺癌组织毛细血管的通透性，而阿霉素组则增加肿瘤组织中毛细血管的通透性，差异均具有统计学意义（P<0.05）。③黄芩苷组能够明显抑制荷瘤裸鼠血清MDA的表达，与模型组比较差异有显著统计学意义（P<0.01）；阿霉素组促进MDA的表达，与模型组比较差异有统计学意义；黄芩苷+阿霉素组促进MDA的表达，与模型组比较差异无统计学意义。④与模型组比较，黄芩苷组裸鼠乳腺癌组织LOX的表达显著下调（P<0.01），阿霉素组肿瘤组织中LOX表达增加（P<0.05）；黄芩苷+阿霉素组能下调裸鼠乳腺癌组织LOX的表达，与模型组比较差异无统计学意义。结论 黄芩苷能够明显抑制乳腺癌移植瘤的生长，其机制可能与黄芩苷降低肿瘤组织毛细血管的通透性，抑制裸鼠血清中丙二醛、乳腺癌组织中赖氨酰氧化酶的表达，从而改变肿瘤缺氧微环境有关。     

健脾消癌方通过PI3K/Akt信号通路抑制结肠癌血管生成的研究＊

目的 观察结肠癌HCT116细胞健脾消癌方的条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响，从PI3K/Akt生物轴调控角度探讨其作用机制。方法 培养HCT116细胞，细胞设3组：对照组，健脾消癌方组（加入15%健脾消癌方含药血清）及人参皂苷Rg3组；制备HCT116细胞健脾消癌方条件培养液（分组及制备方法见实验方法），用条件培养液干预HUVEC（脐静脉内皮细胞，Human Umbilical Vein Endothelial Cells），Matrigel基质胶法检测HCT116细胞健脾消癌方条件培养液对HUVEC小管形成的影响。随后采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组HCT116细胞磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、p-Akt、VEGF（血管内皮生长因子，Vascular endothelial growth factor）蛋白表达。最后在结肠癌HCT116荷瘤小鼠中验证健脾消癌方对肿瘤生长速度的影响，并经瘤组织VEGF蛋白表达、CD31免疫组化染色检测肿瘤内血管生成情况。结果 模型组HUVEC细胞管腔形成较空白血清组显著增加（P<0.05）；健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组较模型组HUVEC细胞管腔形成显著减少（P<0.01）。p-Akt和VEGF蛋白表达水平模型组高于空白血清组（P<0.05），健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组显著低于模型组（P<0.01）；PI3K、Akt蛋白表达量组间差异无统计学意义。与对照组比较，模型组荷瘤小鼠肿瘤体积显著性增大，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积显著性增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，健脾消癌方组及人参皂苷Rg3组荷瘤小鼠肿瘤体积显著减小，瘤组织内VEGF表达、CD31阳性面积降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 健脾消癌方可抑制肿瘤的血管生成和生长，其作用机制可能与PI3K/Akt生物轴调控VEGF表达有关。     

谭新华从肝肾论治男科疾病临证经验

谭新华教授采用温肾补肝、益肾疏肝、填精消癥、养肾柔肝、补肾泻肝之法治疗男性不育症、勃起功能障碍、前列腺增生症、精索静脉曲张、慢性前列腺炎等男科疾病临床疗效显著。本文结合典型案例对谭教授从肝肾论治男科疾病经验进行总结。     

雄蚕益肾方联合小剂量他达拉非治疗男性迟发性性腺功能减退症伴男性勃起功能障碍的临床研究

目的观察雄蚕益肾方联合小剂量他达拉非治疗男性迟发性性腺功能减退症(LOH)伴男性勃起功能障碍(ED)患者的临床疗效。方法选取2015年10月至2016年12月湖南中医药大学第一附属医院诊治的106例符合LOH伴ED诊断的男性患者作为研究对象。按随机数字表法分为对照组和试验组各53例。对照组服用正常剂量他达拉非,试验组服用雄蚕益肾方联合小剂量他达拉非,疗程均为1个月。比较组内和组间治疗前后的老年男子症状(AMS)量表评分、国际勃起功能指数(IIEF-5)、血清总睾酮(TT)、游离睾酮(FT)水平以及治疗期间不良反应的发生情况。结果①试验组治疗后与对照组治疗后比较,AMS评分显著下降,IIEF-5评分、血清TT及FT水平显著提高,两组比较具有差异具有统计学意义(P0.05)。②试验组治疗期间不良反应的发生率明显小于对照组。结论雄蚕益肾方联合小剂量他达拉非治疗LOH伴ED疗效显著且安全。     

麝香配伍乳香促虎杖提取物治疗慢性非细菌性前列腺炎的动物实验研究

目的:观察麝香、乳香配伍组合对虎杖提取物治疗慢性非细菌性前列腺炎模型大鼠前列腺组织病理及炎症因子表达的影响。方法:53只健康雄性Wistar大鼠,5只用于大鼠前列腺蛋白提纯液的制备,48只随机分为麝香配伍乳香+虎杖提取物组、虎杖提取物、模型组、正常对照组共4组。除正常对照组外,应用大鼠前列腺蛋白提纯液辅以免疫佐剂制备实验性慢性非细菌性前列腺炎大鼠模型,造模60 d时正常对照组、模型组予生理盐水,虎杖提取物、麝香配伍乳香+虎杖提取物组分别予生药量虎杖1.575 g/(kg.d)、麝香0.021 g/(kg.d)、乳香1.05 g/(kg.d)按组别选用连续灌胃,各组给药14 d时处死,检测指标包括病理学,ELISA法检测前列腺组织匀浆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8水平,RT-PCR及Western印迹方法检测炎症因子MCP-1(CCL2)、CCR2 mRNA及蛋白表达。结果:麝香配伍乳香+虎杖提取物组前列腺组织结构改善,无明显炎性细胞浸润,虎杖提取物组可见炎性细胞浸润。麝香配伍乳香+虎杖提取物组明显降低前列腺组织炎症因子(TNF-α:11.04±4.07、IL-1β:16.94±4.26、IL-6:110.08±28.42、IL-8:26.28±7.36,pg/ml),优于单纯虎杖提取物组(TNF-α:63.21±21.37、IL-1β:41.32±14.62、IL-6:177.64±42.65、IL-8:96.37±37.61,pg/ml),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。麝香配伍乳香+虎杖提取物组大鼠前列腺组织炎症趋化因子MCP-1(CCL2)及其受体CCR2的mRNA(MCP-1:0.32±0.17;CCR2:0.28±0.11)及蛋白(MCP-1:0.28±0.15;CCR2:0.11±0.04)表达水平与模型组(MCP-1 mRNA:1.15±0.39;MCP-1蛋白:0.93±0.34;CCR2 mRNA:0.83±0.26;CCR2蛋白:0.93±0.34)比较显著降低(P<0.01),显著优于虎杖提取物组(MCP-1 mRNA:0.65±0.27;MCP-1蛋白:0.56±0.22;CCR2 mRNA:0.78±0.24;CCR2蛋白:0.25±0.09),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:麝香乳香配伍组合的应用具有促进虎杖提取物对慢性前列腺炎的治疗,降低炎症反应程度,从而促进前列腺组织结构修复的作用。     

黄龙喷剂对小鼠乳腺癌移植瘤创面愈合的影响

目的探讨黄龙喷剂对小鼠乳腺癌移植瘤创面愈合的作用。方法采用细胞悬浮液法建立小鼠乳腺癌移植瘤模型,待移植瘤成功后,通过经典的全层皮肤切割伤模型,在无菌条件下,建立小鼠乳腺癌移植瘤全层皮肤缺损开放性创面模型。采用随机分组方法,将小鼠随机分为黄龙喷剂组、康复新组、空白对照组,每组10只小鼠,连续给药后观察各组小鼠移植瘤创面的一般情况及愈合情况,记录各组小鼠创面愈合的时间及愈合率。于第10天取创面组织进行病理学检查。结果黄龙喷剂组小鼠创面愈合时间早于康复新组及空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。黄龙喷剂组创面愈合率高于康复新组及空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。病理检查提示黄龙喷剂组成纤维细胞数量较多,体积较大,创面肉芽组织血管丰富,可见散在炎性细胞浸润。康复新组可见肿瘤边缘片状坏死及出血,较多炎性细胞浸润,成纤维细胞较黄龙喷剂组少,毛细血管数目及大小不及黄龙喷剂组,空白对照组创面周边可见较少肉芽组织,较多炎性细胞浸润,成纤维细胞较少,可见少量新生血管。结论黄龙喷剂可以促进小鼠乳腺癌移植瘤创面的愈合,减少创面愈合时间,提高创面愈合率,可能与其减轻炎症反应,增加毛细血管的增生,增加成纤维细胞的增生,改善创面血液循环有关。     

二仙汤及其拆方对肾阳虚证小鼠附睾P34H、Prdx6的影响

目的探讨补肾中药复方二仙汤及其拆方对肾阳虚证小鼠附睾精子成熟微环境的影响。方法 60只成熟雄性ICR小鼠随机挑选10只作为正常对照组,其余50只小鼠腹腔注射地塞米松磷酸钠25mg/(kg·d),连续2周,造模肾阳虚证。造模成功后,随机分成5组:模型组、二仙汤全方组、温肾益精组、滋阴降火组、调理冲任组,每组10只,模型组、正常组予蒸馏水,其余各组予相应中药汤药灌胃,按体质量给予相应剂量,每天2次,连续21d。停药24h后处死动物,免疫组化法检测各组附睾抗人精子表面蛋白34H(P34H)表达,Western Blot法检测过氧化物酶6(Prdx6)的表达。结果肾阳虚证小鼠附睾P34H、Prdx6表达量明显低于正常对照组,组间差异有统计学意义(P<0.05),二仙汤全方组、温肾益精组表达量明显高于模型组,组间差异有统计学意义(P<0.05),调理冲任组、滋阴降火组与模型组表达组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论二仙汤及其拆方可影响肾阳虚证小鼠附睾P34H、Prdx6表达,进而影响精子成熟,其中以二仙汤全方及温肾益精组作用最为明显。     

六神丸对食管癌移植瘤细胞凋亡指数及B淋巴细胞瘤-2基因的影响

目的探讨六神丸对食管癌移植瘤组织细胞凋亡与B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)表达的影响及相关机制。方法通过皮下注射细胞悬液建立食管癌移植瘤模型,将48只裸鼠随机分为空白组、模型组、顺铂组(DDP)、六神丸高剂量组、六神丸中剂量组、六神丸低剂量组,按照给药方案用药,用药20 d后处死动物,剥取瘤组织,TUNEL(原位末端标记法)检测瘤体组织细胞凋亡指数,免疫组化法检测瘤体组织Bcl-2的表达。结果六神丸高、中、低剂量各组细胞凋亡指数均高于模型组,给药各组瘤体组织内Bcl-2的表达活性均明显下降。结论六神丸通过下调肿瘤组织Bcl-2表达活性、促进细胞凋亡是六神丸抑瘤作用机制之一。     

湖南部分地区2877例前列腺癌患者临床流行病学特征及流行学趋势分析

目的:分析湖南部分地区前列腺癌患者流行病学特征,为防控策略的制定提供参考。方法:收集2010年1月1日～2019年12月31日就诊中南大学湘雅医院、湖南中医药大学第一附属医院、湖南中医药研究院附属医院的2 877例前列腺癌患者年龄、病理类型和中医证型资料,分析探讨前列腺癌发病现状及流行趋势。结果:2010年291例,2011年315例,2012年213例,2013年220例,2014年159例,2015年226例,2016年199例,2017年180例,2018年577例,2019年497例。患病人群年龄资料显示:40岁以下罕见,65～79岁呈高发病率。年龄组变化趋势为:65～79岁年龄组发病比例逐年增加,10年间增加至63.9%;80岁及以上组发病上升更明显,10年间增长率达到97.9%。病理分型中主要为腺癌。腺癌1441例(50.1%),腺泡细胞腺癌例201例(7.00%);滤泡状腺癌37例(1.29%),前列腺导管癌27例(0.94%),病例未特指273例(9.49%),其他腺癌166例(5.77%)。其中157例患者进行了中医辨证分型,主要为肾虚证型,其中肾阴虚者40例(25.5%),肾阳虚69例(43.9%)。结论:2010～2019年湖南地区前列腺癌发病呈老龄化趋势,65～69岁为发病峰值,65～79老年男性为高危人群,需加强健康宣教和早诊早治工作,降低其发病率。