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目的 研究桃叶珊瑚苷调控miR-1294/酪氨酸3单加氧酶-色氨酸5单加氧酶激活蛋白ζ(tyrosine 3-monooxygenase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein zeta, YWHAZ)分子轴对宫颈癌C-33A细胞增殖和迁移的影响。方法 采用DMEM细胞培养基配制桃叶珊瑚苷培养液,分别采用0、20、40、60、80、100μmol/L桃叶珊瑚苷处理宫颈癌C-33A细胞,噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide, MTT)实验分析C-33A细胞的增殖情况。将C-33A细胞分为对照组(0μmol/L桃叶珊瑚苷处理)和桃叶珊瑚苷组(80μmol/L桃叶珊瑚苷处理),以细胞划痕实验检测C-33A细胞的迁移情况。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative fluorescence polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测两组C-33A细胞中miR-1294的表达。采用MicroRNAdb数据库和双荧光素酶基因报告实验分析和验证miR-1294与YWHAZ之间的调控关系。qRT-PCR和Western blot法分别检测YWHAZ基因和Akt信号通路蛋白p-Akt、p-PRAS40、mTORC1、SGK1的表达。结果 0、20、40、60、80、100μmol/L桃叶珊瑚苷处理后宫颈癌C-33A细胞增殖活性(A)值分别为1.02±0.17、0.75±0.06、0.61±0.10、0.41±0.05、0.17±0.09、0.47±0.12,桃叶珊瑚苷能够明显抑制C-33A细胞的增殖活力(F=28.90,P<0.05)。对照组和桃叶珊瑚苷组C-33A细胞划痕愈合率分别为59.28%±9.93%和25.75%±9.29%,差异有统计学意义(t=4.93,P<0.05)。对照组和桃叶珊瑚苷组miR-1294的表达分别为1.01±0.62和10.14±2.02,差异有统计学意义(t=8.65,P<0.01)。miR-1294可靶向结合YWHAZ(t=8.76,P<0.01)。对照组和桃叶珊瑚苷组C-33A细胞中YWHAZ mRNA表达分别为4.74±1.22和1.01±0.22,miR-1294可负调控YWHAZ基因表达(t=6.00,P<0.01)。与对照组比较,桃叶珊瑚苷组YWHAZ蛋白和Akt信号通路蛋白p-Akt、p-PRAS40、mTORC1、SGK1表达明显降低。结论 桃叶珊瑚苷通过调控miR-1294/YWHAZ分子轴抑制宫颈癌C-33A细胞的增殖和迁移。  相似文献   
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目的 探讨miR-3074通过靶向调节表皮生长因子受体通路底物8(epidermal growth factor receptor substrate 8,EPS8)基因表达对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 应用OncoLnc在线数据库分析miR-3074表达水平与宫颈癌患者总生存期的关系。实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-3074在宫颈癌细胞系(SiHa、HCC94、C33A、HeLa)和正常宫颈上皮细胞H8中的表达。选取miR-3074表达最低的细胞系,分别转染对照模拟物(对照组)和miR-3074模拟物(miR-3074组)。CCK-8法和Transwell实验分别检测细胞增殖活力和侵袭能力。生物信息学软件RNAhybrid预测miR-3074的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证miR-3074与靶基因的靶向关系。qRT-PCR和Western blot法检测miR-3074对靶基因表达的影响。结果 miR-3074表达水平较高的宫颈癌患者总生存期长于miR-3074表达水平较低的患者,差异有统计学意义(P<0.01)。与H8细胞比较,宫颈癌细胞系中miR-3074表达降低(P<0.05),miR-3074表达最低的细胞系是HCC94(P<0.01)。对照组和miR-3074组miR-3074表达分别为1.03±0.17和13.49±2.66,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组HCC94细胞增殖活力降低(P<0.05),细胞侵袭能力降低(P<0.01)。miR-3074能作用于EPS8mRNA的3′非翻译区(P<0.01)。与对照组比较,miR-3074组EPS8基因表达显著降低(P<0.01)。结论 miR-3074在宫颈癌细胞系中表达下调,miR-3074能够抑制宫颈癌HCC94细胞的增殖和侵袭,其机制可能与靶向抑制EPS8表达有关。  相似文献   
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