桔梗皂苷D联合伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用及机制研究

目的探讨桔梗皂甙D（platycodin,PD）与伊马替尼（imatinib,IM）联合用药抑制慢性粒细胞白血病细胞株K562的作用及机制研究。方法体外培养CML细胞株K562,CCK-8测定PD和IM单药及联合用药对K562细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测AnnexinV/PI标记的细胞凋亡率,Westernblot方法检测cleavedcaspase-3、cleavedcaspase-9、PARP、cleavedPARP、Bcr/abl、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果联合用药组对K562细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡率较单独用药组效果明显,差异均有统计学意义（均P＜0.01）。与单药组比较,联合用药组可以明显上调cleavedcaspase-3、cleavedcaspase-9、cleavedPARP蛋白表达,同时下调PARP、Bcr/abl、p-AKT、p-mTOR蛋白的表达,差异均有统计学意义（P＜0.01或0.05）。结论PD与IM联合用药在抑制细胞增殖、诱导凋亡、抑制Bcr/abl蛋白和PI3K/AKT/mTOR信号通路方面明显优于单独用药。     

藤黄酸诱导肺癌细胞H1975凋亡的机制研究

目的 研究藤黄酸（GA）诱导人肺癌细胞H1975凋亡的分子机制,探讨氧自由基（ROS）和JNK信号通路在GA杀伤 肺癌细胞中的作用。方法 以人肺癌细胞H1975为研究对象,MTT法测定GA抑制细胞增殖的作用,Annexin V/PI 双染法测定细胞凋亡率,DCFH-DA 法测定ROS 含量,JC-1探针染色分析线粒体膜电位（MMP）,Western blot检测JNK 信号通路的激活和线粒体凋亡途径相关蛋白表达的变化。结果 GA 呈剂量依赖性抑制H1975细胞的增殖,各实验组细胞存活率与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05 或0.01）。1、2.5 和5滋mol/L GA 作用24h 后,细胞凋亡率分别为25.2%、51.8%和75.1%,剪切型凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3 和cleaved PARP 的表达随GA 浓度增高而显著增加,与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05或0.01）。GA 作用2h 后H1975细胞ROS 含量显著升高,磷酸化JNK（p-JNK）表达上调（P＜0.05或0.01）。GA 作用16h后各实验组细胞MMP 均明显降低（均P＜0.05）。GA 作用24h后实验组细胞线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bak、Bik表达增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达与空白对照组相比明显下降（P＜0.05 或0.01）。结论 GA 具有诱导H1975 细胞凋亡的作用,其可能机制是上调细胞内ROS含量,激活JNK 信号通路,进而引起MMP 降低和线粒体凋亡途径激活。     

隐丹参酮调控Wnt/β-catenin 信号通路对胃癌细胞抑制作用的研究

目的：探究隐丹参酮调控Wnt/β-连环蛋白（β-catenin） 信号通路对胃癌细胞的抑制作用。方法：将人胃癌BGC-823 细胞株分为对照组，隐丹参酮低、中、高剂量组（以下简称低、中、高剂量组），高剂量+SKL2001 组，高剂量+XAV939 组。低、中、高剂量组在培养过程中加入20、40、80 μmol/L 的隐丹参酮；高剂量+SKL2001 组中加入80 μmol/L 隐丹参酮与20 μmol/L SKL2001；高剂量+XAV939 组中加入80 μmol/L 的隐丹参酮与1 μmol/L 的XAV939。采用MTT 法、Transwell 小室法、细胞划痕实验分别检测细胞的增殖能力及迁移侵袭能力。采用RT-PCR 与蛋白免疫印迹法检测细胞中蓬乱蛋白DSH 同源物2（Dvl2）、糖原合成酶激酶-3（GSK-3β）、β-catenin 和G1/S-特异性周期蛋白-D1（Cyclin D1） 表达水平。结果：与对照组比较，低、中、高剂量组处理24 h、48 h、72 h 后细胞增殖抑制率、GSK-3β 蛋白及mRNA 表达上升（P＜0.05），Dvl2、β-catenin、Cyclin D1 蛋白及mRNA 表达降低（P＜0.05），且呈剂量依赖性（P＜0.05）。细胞划痕48 h 后，低、中、高剂量组细胞迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05），且随着剂量增加而降低（P＜0.05）；与高剂量组比较，高剂量+SKL2001 组迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均增高（P＜0.05）；与高剂量+SKL2001 组比较，高剂量+XAV939 组迁移能力、过膜细胞数及划痕愈合率均降低（P＜0.05）。结论：隐丹参酮能通过抑制Wnt/β-catenin 信号通路的活性对胃癌细胞起抑制作用。