DNA甲基化修饰对非洲爪蛙胚层分化的影响

目的：探讨DNA甲基化修饰对非洲爪蛙三个胚层分化的影响。方法：用30 μmol/L 的5?氮杂?2’?脱氧胞苷（5?AZA?CdR）处理胚胎,抑制早期胚胎细胞内DNA甲基化转移酶1（DNA methyltransferase 1,DNMT1）的活性,观察胚胎的表型,并收集原肠期胚胎通过原位杂交检测三胚层标记基因的表达情况;显微注射DNMT1特异的反义寡核苷酸（DNMT1MO）以敲降胚胎细胞内DNMT1的表达,然后通过原位杂交检测胚层标记基因的表达情况。结果：5?AZA?CdR处理导致胚胎早期发育异常,抑制中胚层标记基因Xbra的表达。敲降DNMT1促进背部中胚层标记基因GSC和Chordin的表达,抑制腹部中胚层标记基因Wnt8的表达。结论：DNA甲基化转移酶参与调节非洲爪蛙三胚层分化形成的过程。     

卵巢癌中抑癌因子SUFU的表达变化及意义

目的：探讨卵巢癌中抑癌因子SUFU（suppressor of Fused）表达变化及其意义。方法：通过免疫组化检测人卵巢癌和癌旁组织样本中SUFU的表达量，并在数据库大样本和细胞水平上进行验证。同时在人正常卵巢上皮细胞系IOSE80和卵巢癌细胞系SKOV3分别抑制和过表达SUFU后，运用MTT、EdU、流式细胞术、Western blot、Transwell、平板克隆形成实验等方法分别检测细胞的增殖、凋亡、上皮间充质转化（epithelial?mesenchymal transition，EMT）、迁移与侵袭的情况，并随后用Western blot和实时定量PCR（quantitative real?time PCR，qPCR）检测Sonic Hedgehog（SHH）信号通路的下游靶基因GLI1蛋白和mRNA水平。结果：在3例卵巢癌组织样本中，相比于癌旁组织，癌组织中SUFU蛋白表达有一定下调，而这个结果在TCGA数据库大样本中也得到验证；此外在细胞水平上，人正常卵巢上皮细胞IOSE80中SUFU蛋白和mRNA表达水平明显高于卵巢癌细胞SKOV3。进一步在SKOV3细胞中过表达SUFU能够有效抑制其增殖、EMT、克隆形成、迁移和侵袭，促进凋亡；相反，在IOSE80细胞中下调SUFU则能够促进细胞EMT、迁移和侵袭能力。同时，相比正常卵巢上皮细胞，卵巢癌细胞中GLI1 mRNA和蛋白水平明显上升；当在卵巢癌细胞中上调SUFU时，SHH信号通路的下游靶基因GLI1的表达则明显下调。结论：SUFU能够抑制卵巢癌的发生发展，其作用机制与SHH信号通路相关。