泛素水解酶22调控丝裂原活化蛋白激酶激酶6基因的转录活性

目的：克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛 素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法：采用PCR扩增MKK6基因启动 子片段,并以该片段为模板对USP22结合位点进行定点突变,将野生型与突变型启动子片段定向插入荧光素酶表达 载体pGL3-Basic;用重组载体与内参质粒pRL-TK共转染HeLa细胞,行双荧光素酶活性检测以确定其转录活性;利用 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验观察USP22蛋白与MKK6启动子是否存在直接的结合;下 调USP22表达后,检测MKK6转录活性的变化。结果：成功扩增MKK6启动子及其突变体并构建荧光素酶表达载体; USP22结合位点的突变导致该启动子活性在HeLa细胞中明显降低(P<0.05);USP22与MKK6启动子在细胞中存在直接结 合;抑制USP22的表达导致MKK6转录水平明显下降(P<0.05)。结论：在HeLa细胞中,USP22有效地调控MKK6基因的 转录。     

对叶百部多糖的相对分子质量测定及单糖组成分析

目的 提取纯化对叶百部多糖,并对其相对分子质量及单糖组成进行研究.方法 采用乙醇沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶过滤层析法从对叶百部中纯化得到水溶性多糖,命名为STP-1,分子筛层析法测定其分子质量,柱前衍生气相色谱法对其单糖组成进行研究.结果 STP-1的分子量为4.2×104Da,单糖组成包含鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和半乳糖(Gal),其摩尔比为2.35∶ 1.78∶ 1∶15.09∶ 13.56.结论 对叶百部多糖为五种单糖组成的中性杂多糖,以葡萄糖和半乳糖为主.     

藜蒿黄酮粗提物对SMMC7721细胞生长抑制作用

目的 制备藜蒿黄酮粗提物,并检测其对人肝癌细胞株SMMC7721的抑制作用.方法 采用乙醇热回流和超声波辅助乙醇温浸法制备藜蒿黄酮粗提物,用紫外分光光度法进行鉴定,然后MTT法鉴定藜蒿黄酮粗提物对SMMC7721细胞的生长抑制作用.结果 采用乙醇热回流法黄酮得率为1.67％,超声波辅助乙醇温浸法黄酮得率为3.71％.750～1 250μg/mL各组藜蒿黄酮粗提物均抑制肿瘤细胞生长,呈剂量依赖性.结论 超声波辅助乙醇温浸法提取藜蒿黄酮优于乙醇热回流法,藜蒿黄酮粗提物可显著抑制肝癌细胞株SMMC7721的生长.     

骨髓间充质干细胞成脂成骨平衡调控研究进展

骨质疏松症（OP）是一种全身性的骨代谢疾病,主要表现为骨量减少、骨质脆性增加、骨骼微结构退化。随着对骨质疏松症发病机制的深入研究,骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化失衡（成骨分化减少,成脂分化增多）是引发骨质疏松症的关键。我们总结了BMSCs成脂成骨分化相关的信号通路,充分理解这些信号通路,有利于更好的阐明骨质疏松症的发病机制,为临床医生有效地治疗骨质疏松症提供帮助。     

核转运抑制肽表达载体的构建及对HeLa细胞增殖、迁移的影响

目的 构建核转运抑制肽与红色荧光蛋白(RFP)的融合表达载体,探讨该融合蛋白在HeLa细胞中的表达、定位以及对细胞增殖、迁移的影响。方法 分别合成编码两种核转运抑制肽Bimax1和Bimax2的多核苷酸,退火后插入红色荧光蛋白表达载体pDs-Red-C1;质粒转化大肠杆菌DH-5α,挑取阳性菌进行DNA测序;利用脂质体转染法将重组载体pDs-Red-Bimax1、pDs-Red-Bimax2及空白载体转入HeLa细胞中,荧光显微镜观察红色荧光的表达与定位;MTT实验和细胞迁移实验检测融合蛋白表达对细胞增殖、迁移的影响。结果 DNA测序显示,两种核转运抑制肽Bimax1和Bimax2成功插入红色荧光蛋白表达载体;转染真核细胞后Bimax1和Bimax2引导红色荧光蛋白在细胞核表达;同时,融合蛋白RFP-Bimax1和RFP-Bimax2对HeLa细胞的增殖、迁移有抑制作用。结论 成功构建核转运特异性抑制肽与红色荧光蛋白融合表达的载体,融合蛋白在细胞核局限表达并能抑制肿瘤细胞的增殖、迁移。     

Wortmannin和U0126抑制胰岛素对大鼠骨骼肌成肌细胞的促分化作用

目的观察wortmannin和U0126抑制胰岛素对大鼠成肌细胞向成熟肌细胞分化作用,探索定向诱导肌分化的途径及其分子机制。方法分离和培养大鼠骨骼肌成肌细胞,用含不同浓度胰岛素的DMEM培养基培养,收集细胞,在相差显微镜下观察形态变化,并通过免疫细胞化学方法和Western blot法检测生肌素(myogenin)表达。用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)特异性抑制剂wortmannin和MEK特异性抑制剂U0126干预后,观察胰岛素对骨骼肌成肌细胞分化的影响。结果胰岛素能明显促进骨骼肌成肌细胞形成肌小管,诱导2 d开始有肌管形成并逐渐增多到7 d达到高峰;胰岛素促进骨骼肌成肌细胞的生肌素阳性细胞核和生肌素蛋白表达增多,而wortmannin和U0126能下调胰岛素的这种作用。结论 Wortmannin和U0126可阻断胰岛素促进骨骼肌成肌细胞向成熟肌细胞分化,使肌管生成减少,生肌素表达下调。     

Importin 8在成骨分化中的细胞内定位及表达差异

目的观察Importin 8(IPO8)在成骨分化过程中的细胞内定位与表达差异。方法对人成骨样SaOS-2细胞进行成骨诱导分化,采用茜素红染色、免疫细胞化学方法和实时定量PCR技术检测成骨分化效果及分化过程中IPO8的细胞内定位和表达差异。结果茜素红染色显示SaOS-2细胞成骨诱导第10天可见大量红色结节样结构。免疫细胞化学方法显示,IPO8主要定位于细胞核周胞质。诱导至第3天,IPO8胞浆胞核均有表达,但明显开始向核内移动。至第7天,核内表达更明显,而到第10天,细胞呈骨细胞样,IPO8均匀分布于胞质内。实时定量PCR技术检测发现,OPN基因在SaOS-2细胞成骨分化过程中表达增加,而IPO8基因在成骨分化至第3天时表达最高,之后呈下降趋势。结论 IPO8在成骨分化过程中的细胞内定位与表达存在明显差异,提示IPO8可能参与成骨细胞分化过程的调控。     

非手术因素影响腭裂术后患者语音清晰度的回归分析研究

目的 探讨非手术因素对腭裂术后患者语音清晰度的影响,为腭裂术后患者更好地开展语音训练提供依据.方法 对该院79例腭裂术后患者可能影响语音清晰度的非手术因素进行Logistic回归分析,分析各因素对腭裂术后恢复语音清晰度的作用.结果 有显著性意义的2个变量“语言训练”和“父母文化程度”为语音清晰度的保护性因素,其它因素与语音清晰度关系不大.结论 术后患者进行正确有效的语音训练和良好的家庭语言发育环境对腭裂术后患者语音清晰度的恢复具有积极意义.     

复方止嗽散对咳嗽变异性哮喘大鼠Th1/Th2细胞因子平衡的影响

目的研究复方止嗽散(百部、紫菀、桔梗等)对咳嗽变异性哮喘(CVA)大鼠Th1/Th2细胞因子平衡影响,探讨复方的平喘作用机制。方法建立SD大鼠CVA模型,灌胃止嗽散提取物,采用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素IL-4及干扰素INF-γ含有量,并测定BALF中的炎性细胞变化,比较组间差异。结果止嗽散中、高剂量组大鼠BALF中,炎性细胞计数均较模型组明显降低,而INF-γ/IL-4比值升高,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论复方止嗽散对CVA大鼠的Th1/Th2细胞因子失衡具有调节作用,并能减少炎症细胞,推测与其平喘作用相关。     

母子分离应激对Cplx2基因缺陷小鼠中枢神经递质多巴胺分泌的影响

目的本文旨在探讨母子分离应激对complexinⅡ(Cplx2)基因小鼠中枢神经递质多巴胺分泌的影响。方法实验分4组:应激Cplx2-/-组、应激Cplx2+/+组、无应激Cplx2-/-组和无应激Cplx2+/+组。无应激组小鼠正常饲养,应激组小鼠从出生后第2日至第21日每天施加母子分离应激。小鼠生长到第4周时,利用聚合酶链反应技术检测其基因型。4组小鼠腹腔注射激动剂去氧麻黄碱或生理盐水后,采用高效液相加电化学检测器测定纹状体多巴胺含量。结果应激Cplx2-/-组、应激Cplx2+/+组、无应激Cplx2-/-组和无应激Cplx2+/+组注射去氧麻黄碱后,与生理盐水对照组相比,纹状体多巴胺水平显著升高(P<0.05),以应激Cplx2-/-组纹状体多巴胺分泌增多最为明显。与无应激Cplx2+/+组相比较,应激Cplx2+/+组注射去氧麻黄碱后纹状体多巴胺分泌增多(P<0.05);与无应激Cplx2-/-组相比较,应激Cplx2-/-组注射去氧麻黄碱后纹状体多巴胺分泌增多(P<0.05);与应激Cplx2+/+组相比,应激Cplx2-/-组注射去氧麻黄碱后纹状体多巴胺分泌增多(P<0.05)。与无应激Cplx2+/+组相比,无应激Cplx2-/-组注射去氧麻黄碱后纹状体多巴胺分泌增多(P<0.05)。结论本实验证实小鼠中枢神经递质多巴胺分泌可能受去母子分离应激和Cplx2等因素的多重影响。