上调miR-145表达抑制卵巢癌HO8910细胞侵袭、迁移及促进TβR-Ⅱ蛋白表达北大核心

目的:探究微小RNA-145(microRNA-145,miR-145)对卵巢癌(ovarian cancer, OC)HO8910细胞侵袭、迁移及TβR-Ⅱ蛋白水平的影响。方法:将某大学研究实验室细胞库提供的OC细胞HO8910分为ZW组(无转染HO8910细胞)、ZN组(转染miR-145-NC)、YJ组(转染miR-145 mimics)。采用qRT-PCR、MTT、Hoechst33258荧光染色、Transwell小室、细胞划痕、Western blot检测miR-145、转化生长因子βⅡ型受体(transforming growth factorβtypeⅡreceptor, TβR-Ⅱ)表达、细胞活力、凋亡、侵袭、迁移能力以及TβR-Ⅱ蛋白量。结果:YJ组HO8910细胞中miR-145的表达量最高,提示转染成功。YJ组TβR-Ⅱ表达量较其他两组对比明显提高(P<0.05),ZW组、ZN组miR-145、TβR-ⅡmRNA表达水平无明显差异(P>0.05);培养48、72、96 h, YJ组细胞活力较ZW组、ZN组比较明显减弱(P<0.05),随着时间的延续,培养96 h三组细胞活力均优于48、72 h(P<0.05);YJ组与ZW组、ZN组对比细胞凋亡率明显提高(P<0.05);ZW组HO8910细胞荧光强度最弱,细胞凋亡率最低,ZW组与ZN组对比无明显差异(P>0.05);三组细胞侵袭、迁移数量相比差异较大(P<0.05),其中YJ组侵袭、迁移数量少于其他两组(均P<0.05),ZN组与ZW组的细胞侵袭、迁移数量无明显差异(P> 0.05);YJ组TβR-Ⅱ蛋白表达量与ZU组、ZN组对比明显升高(P<0.05),YJ组转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)蛋白表达量与其他两组对比均降低(P<0.05),ZW组TGF-β、TβR-Ⅱ蛋白表达量与ZN组对比差异较小(P> 0.05)。结论:通过上调miR-145对抑制OC细胞迁移、侵袭等生物活性发挥积极作用,分析原因可能与靶向调控TβR-Ⅱ蛋白相关。     

CEA,CA19—9,CA125和CA15—3联合检测用于恶性肿瘤诊断

检测肿瘤标记物在恶性肿瘤诊断中已得到广泛的应用，并成为判断疗效、监测复发等的重要手段。本文报告４０名健康人和２５３名恶性肿瘤患者进行四项肿瘤标记物联合检测的测定结果，并将各单项检测与联合检测对恶性肿瘤的检出率进行了比较，探讨了联合检测提高恶性肿瘤检出...     

黄体生成素基因rs34349826和rs6521位点单核苷酸多态性与男性不育相关性研究

目的:研究黄体生成素β亚基(LHB)基因的rs34349826(c.104 AG)和rs6521(c.114 CG)位点单核苷酸多态性(SNP)与男性不育之间的相关性。方法:采用病例-对照的试验方法,纳入就诊于南京总医院的男性原发性不育患者405例(病例组)和有正常生育史的健康男性424例(对照组)。同时,按照WHO《人类精液检查与处理实验室手册》第5版,根据精子浓度将病例组分为少精子症组、严重少精子症组和无精子症组。收集所有研究对象的临床基本资料,并采集外周血提取基因组DNA,使用Sequence Mass Array技术进行LHB基因rs34349826和rs6521位点基因型的检测,建立Logistic回归模型分析两位点多态性与男性不育间的关联;并使用SHEsis在线软件对两位点单倍型分析其单倍型组合与男性不育的关系。结果:病例组与对照组在精液量[(3.74±1.71)ml vs(3.51±1.36)ml]、精子浓度[(27.37±30.80)×10~6/ml vs(79.21±61.60)×10~6/ml]、前向运动精子百分率[(11.90±14.72)%vs(39.40±9.64)%]、LH[(6.25±4.83)IU/L vs(3.29±1.39)IU/L]和FSH[(15.64±17.03)IU/L vs(4.56±2.31)IU/L]差异显著(P0.05)。经Logistic回归分析,发现LHB rs34349826位点和LHB rs6521位点的各基因型与男性不育无相关性,亚组分析也无相关性。而SHEsis软件对LHB rs34349826和rs6521两个位点单倍型分析,发现在病例组-对照组中,GG型基因组合是男性不育的保护因素;亚组-对照组也发现类似结论。结论:LHB基因rs34349826和rs6521位点的多态性与男性不育均无相关性,但后期可以通过扩大样本量进一步证实。而单倍型分析,GG型基因组合是男性不育的保护因素。     

ELISA定量测定AFP试剂盒的线性及标准问题

ＥＬＩＳＡ定量测定ＡＦＰ试剂盒的线性及标准问题毛爱珍许斌（江苏省肿瘤医院检验科，南京２１０００９）关键词线性标准酶联免疫吸附法甲胎蛋白我们对市场上７种国产、进口ＡＦＰ定量ＥＬＩＳＡ试剂盒进行了比较，发现各试剂盒的线性及所设标准存在差异。１试剂及来源７...     

骨髓涂片和流式细胞术诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯的临床价值比较

目的比较骨髓细胞形态学(BMA)和流式细胞术(FCM)诊断非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓侵犯的临床价值。方法回顾性分析本院在2013~2014年间收治的207例NHL患者的骨髓涂片及流式细胞免疫表型的检测结果,分析2种检测方法在不同程度、不同形态淋巴瘤骨髓侵犯的临床价值。结果经2种方法联合检测,总体阳性率为24.6%(51/207)。BMA和FCM的骨髓侵犯阳性率分别为17.4%(36/207)和22.2%(46/207);其中阳性结果一致者29例,主要表现于高比例瘤细胞骨髓侵犯的病例;不一致36例多见于低比例瘤细胞骨髓侵犯的病例(17.4%),16例FCM检测为阳性而BMA为阴性的病例主要为轻度异形小细胞淋巴瘤,8例BMA阳性而FCM为阴性的病例为高度异形大细胞淋巴瘤。结论 BMA、FCM在诊断不同形态淋巴瘤细胞侵犯的敏感性不同,FCM诊断轻度异形细胞淋巴瘤骨髓侵犯的敏感性高于BMA,BMA检测高度异型大细胞淋巴瘤骨髓侵犯优于FCM,两者联合检测可提高骨髓侵犯的阳性率。     

D-二聚体检测失败的解决方法

目的通过对D-二聚体反应曲线的观察与分析,探讨各种不同情况下的D-二聚体检测失败的解决方法。方法对于检测失败的标本,认真分析反应曲线,同时结合标本的外观属性,采取相应的解决方法。结果①当D-二聚体浓度低于检测下限时,直接报"小于低限值";②当反应曲线基线吸光度偏高时,机外手工3倍稀释复测,有个别标本仍检测失败,增大至10倍稀释,复测成功,验证为超出检测上限的极高值脂血标本;③当反应曲线起始斜率超限时,机外手工进行5倍稀释再以DD(D)模式复测,仍有1标本复测失败,属于极高值标本,经10倍稀释后复测成功。结论 D-二聚体低于仪器的检测低限,或高于检测高限时均直接导致检测失败;而重度脂血、重度黄疸血则会显著抬高本底,影响光度计的分辨能力,也可能导致检测失败。应仔细解读反应曲线,具体情况具体分析,方能给出恰当的解决方法。     

全面分析 排除隐患 确保生化仪正常运行

自动生化分析仪完全模仿并代替了手工操作,已成为大中型实验室不可缺少的仪器[1]。本科室自2004年8月购进日本东京医疗TMS 1024i生化仪,8年来仪器运行一直很正常,各个项目的精密度、准确度一直很好。但近期却发现某些项目(如磷离子、钙离子)的重复性明显变差,影响了检验报告的质量,给日常工作造成了很大麻烦。为此本科室进行了全面隐患排查,并着重从以下几个方面进行分析,探究问题的根源,最终成功排除了故障。     

髓源性抑制细胞——肿瘤免疫治疗的新靶点

肿瘤可以通过多种机制有效地逃避免疫系统监视,包括抗原处理缺陷、异常表达共刺激分子以及肿瘤细胞表面配体等。近年来人们发现肿瘤患者体内聚积一群与肿瘤免疫逃逸密切相关的细胞     

自行设定酶活性测定的K值

临床检验测定酶催化活性使用的常规方法为连续监测法，该方法并不使用标准品来计算酶活力单位，而是根据K值计算。因此，K值的设置非常重要，设置不当易引起系统误差。目前，常用K值设置方法有2种，即实测K值和厂家K值，我室从生化仪装机一直采用厂家K值进行计算，室间质评结果一直不理想。     

LncRNA DCST1-AS1结合ALDOA促进三阴性乳腺癌细胞的侵袭

摘要：目的?探索长链非编码RNA(LncRNA) DCST1-AS1结合果糖二磷酸醛缩酶A(fructose-bisphosphate aldolase A, ALDOA)对三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-231)侵袭的影响。方法?采用RNA pulldown试验、质谱分析和RNA免疫共沉淀试验检测并分析DCST1-AS1与ALDOA之间的相互作用；采用癌症基因组图集(The Cancer Genome Atlas，TCGA)中的侵袭性乳腺癌阵列分析DCST1-AS1与ALDOA表达的相关性；RT-PCR和western blot分析三阴性乳腺癌细胞中DCST1-AS1失调对ALDOA表达的影响；Transwell试验分析DCST1-AS1结合ALDOA对乳腺癌侵袭能力的影响。结果?DCST1-AS1在乳腺癌细胞内与ALDOA直接结合。ALDOA在TCGA乳腺癌阵列中高表达(P<0.01)，并与DCST1-AS1的表达呈正相关(r=0.19，P<0.01)。与阴性对照组相比，干扰ALDOA能抑制DCST1-AS1对MDA-MB-231细胞的促侵袭功能。结论?DCST1-AS1通过与ALDOA直接结合促进三阴性乳腺癌细胞的侵袭。