激光多普勒血流仪监测C57BL／6小鼠永久性大脑中动脉闭塞模型

目的评估激光多普勒血流仪监测C57BL／6小鼠永久性大脑中动脉闭塞（MCAO）模型的可行性。方法C57BL／6小鼠随机分为2组,假手术组和永久性MCAO组。线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞模型,激光多普勒仪实时监测小鼠脑血流,术后神经功能学评分,24h后2,3,5．三苯基氯化四氮唑染色确定梗死体积。结果MCAO组术前脑血流（186．78±62．50）PU,栓线插入成功后患侧脑血流降低到（25．80±7．66）PU,降低了90．4％。神经功能学评分在（2．48±0．36）分,脑梗死面积达39．79％。假手术组脑血流在基础值波动,未见降低;神经功能学评分为0分,未见脑梗死病灶。结论激光多普勒血流仪监测是一个很好的确定小鼠脑梗死模型成功与否的筛选方法。     

脂多糖上调小鼠肝脏PCSK9升高血浆低密度脂蛋白胆固醇

目的:研究感染和炎症时前蛋白转化酶枯草溶菌素9 ( proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)在调节血浆低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)代谢中的作用及其可能的分子机制?方法:用全自动生化仪监测小鼠血浆总胆固醇?高密度脂蛋白胆固醇?甘油三酯?磷脂以及谷氨酸氨基转移酶含量?同时,用快速液相色谱(fast protein liquid chromatography,FPLC)分析混合的小鼠血浆?血浆淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)浓度用酶联免疫吸附法测定?用定量PCR法检测肝脏组织的PCSK9?LDL受体等脂代谢相关基因mRNA丰度,并用Western blot 分析肝组织中LDL受体表达变化?结果:研究发现低剂量脂多糖(liposacaridica,LPS)注射24 h后血浆谷氨酸氨基转移酶无明显变化,小鼠血浆LDL-C增高43.02%,高密度脂蛋白胆固醇增高30.09%?甘油三酯增高27.21%,磷脂增高25.50%?LPS注射组动物的血浆SAA明显增多至(1 271.05 ± 94.13) ng/ml,增多的SAA主要与高密度脂蛋白和低密度脂蛋白结合?LPS处理诱导肝脏PCSK9基因表达上调,抑制肝脏LDL受体的蛋白表达?结论:研究表明LPS引起肝细胞中PCSK9上调,LDL受体蛋白表达受抑制,同时小鼠血浆LDL-C迅速增多,提示PCSK9抑制LDL受体通路可能通过影响血浆脂蛋白代谢在炎症导致的宿主反应中起重要作用?     

硫化氢对H2O2所致大鼠胸主动脉损伤的保护作用

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)引起的大鼠离体胸主动脉损伤的保护作用和机制?方法:分离正常大鼠胸主动脉,制备主动脉环,利用300 μmol/L H2O2建立大鼠胸主动脉环氧化应激损伤模型?25?50?100 μmol/L的硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)预处理后再用H2O2损伤大鼠胸主动脉环,应用血管功能检测张力仪比较各组舒张功能,并采用二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光染色法测定活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的生成?Western blot法检测大鼠胸主动脉环中ERK1/2和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达?结果:300 μmol/L的H2O2可引起大鼠胸主动脉环内皮依赖性舒张功能受损,50?100 μmol/L的NaHS预处理后该损伤得到明显改善,使H2O2诱发的ROS亦显著减少?同时,H2O2可激活大鼠胸主动脉组织中的MAPK/ERK通路,使其磷酸化水平增加,而给予50?100 μmol/L的NaHS预处理后可抑制该作用?结论:硫化氢对H2O2致大鼠胸主动脉氧化应激性损伤有保护作用,其机制可能与调节ERK信号通路有关?     

大鼠心肌缺血再灌注后不同时间点心脏及肝脏中HIF-1、VEGF的表达

目的:探讨大鼠心肌缺血再灌注后不同时间点心脏和肝脏中缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的变化?方法:结扎雄性成年SD大鼠冠状动脉左前降支,缺血30 min,再灌注6 h(I30minR6h)或24 h(I30minR24h),real-time PCR法检测心肌组织中HIF-1α和VEGF的mRNA水平,Western blot法检测心肌以及肝脏组织中HIF-1α?HIF-1β 和VEGF蛋白表达的改变?结果:与假手术组相比,I30minR6h组心肌中 HIF-1α和VEGF mRNA和蛋白水平明显增加,但I30minR24h组无明显变化?心肌组织中HIF-1β蛋白水平及肝脏中HIF-1α?HIF-1β 和VEGF蛋白水平在不同再灌注时间点无明显改变?结论:心肌缺血再灌注影响心肌HIF-1和VEGF的表达,但对肝脏中HIF-1和VEGF的表达无影响,且其对心肌HIF-1和VEGF表达的影响与再灌注时间相关?     

大鼠骨髓间充质干细胞体外培养可自发分化为内皮细胞

目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow－derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在体外正常培养条件下能否自发分化为内皮细胞?方法:分离原代大鼠BMSCs,传代后正常培养至第7代,选用第3代和第7代用于本次实验?用Real－time PCR方法检测第3代和第7代BMSCs内皮细胞标识物CD31?血管生成素受体2(tyrosine kinase with immunoglobulin－like and EGF－like domains 2,Tie－2)及血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)的表达;体外血管生成试剂盒(Matrigel)检测血管生成能力;免疫荧光染色检测细胞内vWF蛋白的表达?结果:在培养至第7代后,部分BMSCs在形态上呈椭圆形;Real－time PCR和免疫荧光的结果显示第7代BMSCs的内皮细胞标志物表达水平明显高于第3代BMSCs;体外血管生成实验表明第7代BMSCs在Matrigel胶上能形成网状结构?结论:BMSCs在体外正常培养条件下细胞表型会发生一定的变化,并可部分自发分化为内皮细胞?     

甘油醛-3-磷酸脱氢酶核转位与高糖应激诱导的H9c2细胞凋亡密切相关

目的:探讨高糖应激是否引起心肌细胞中甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)核转位以及GAPDH核转位是否与细胞凋亡有关。方法:高糖培养H9c2细胞48 h后,收集细胞进行细胞凋亡的测定,用DCFH-DA荧光探针测定细胞中活性氧簇(ROS)的水平,用Western Blotting方法测定细胞质和细胞核中GAPDH以及细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,用细胞免疫荧光的方法测定GAPDH的核转位情况。结果:与低糖培养组相比,高糖培养组H9c2细胞凋亡率增高,ROS生成和iNOS表达增多,GAPDH由细胞质向细胞核转位;而线粒体呼吸链复合体I抑制剂鱼藤酮和iNOS抑制剂1400W均阻断GAP-DH的转位,并减少高糖诱导的H9c2细胞的凋亡。结论:高糖诱导H9c2细胞中GAPDH由细胞质向细胞核转位;鱼藤酮和1400W可抑制高糖Flavonoids诱导的细胞凋亡,这一作用与抑制GAPDH核转位有关。     

脂多糖对肝细胞烟酸受体表达及胆固醇外流的影响

目的急性或慢性炎症状态时下高密度脂蛋白和载脂蛋白A-I含量降低。GPR109A是一种G蛋白偶联受体,在脂细胞中介导烟酸抑制的甘油三酯水解。作者的前期研究发现肝细胞中GPR109A过表达,可抑制肝细胞中ABCA1活性,使得肝细胞介导的游离胆固醇向新生apoA-I外流减少,从而降低HDL浓度。但是炎症应激时高密度脂蛋白含量降低是否与GPR109A的活化有关,并不清楚。方法用定量PCR法检测多种巨噬细胞和肝细胞中GPR109A的含量。同时,用酶联免疫吸附法测定肝细胞中环磷腺苷的释放量。最后作者还用液闪计数仪观察了肝细胞中游离胆固醇外流至载脂蛋白A-I的变化。结果作者的研究结果提示,低剂量LPS注射可以在2 h内迅速上调小鼠肝细胞GPR109A的表达,而非仅诱导了Kupffer细胞中GPR109A的表达上调。同时,作者也在人的肝细胞株上验证了相同的结果。此外,作者发现炎症上调的GPR109A抑制了肝细胞中环磷腺苷的释放,也降低了游离胆固醇外流至新生的apoA-I。结论作者的研究表明炎症应激时肝细胞中上调的GPR109A参与了血浆HDL减少的调节,从而增加了心血管事件发病的危险性。