多微孔多聚糖止血粉应用于软组织创伤性出血

背景：前期实验以马铃薯为原料经交叉乳化制备了一种具有自主知识产权的专利产品多微孔多聚糖止血材料。 目的：观察多微孔多聚糖止血粉应用于软组织创伤出血的止血效果。 方法：在实验组1家兔腹部软组织制作1条长约3 cm、深约0.5 cm的创面,吸干出血创面后将多微孔多聚糖止血粉直接喷洒于创面,用量1.0-2.0 g,以吸干出血创面后不做任何处理的家兔为对照。在实验组2家兔腹部组织切割1条长约3 cm、深约1.0 cm的创面,吸干出血创面后将多微孔多聚糖止血粉均匀喷洒于创面,用量1.0-2.0 g,以吸干出血创面后不做任何处理的家兔为对照。 结果与结论：多微孔多聚糖止血粉吸收血液中的水分,形成＂糊状凝胶＂止血痂黏附于出血创面表面达到止血效果。实验组1创面止血时间（15.25±1.04） s,实验组2创面止血时间（11.25±1.89）s,止血显效率为87.5%,有效率为100%;对照组创面止血时间大于5 min。喷洒多微孔多聚糖止血粉 24 h苏木精-伊红染色显示,肌组织轻度水肿,小血管扩张,间质内可见少数散在中性粒细胞浸润;7 d时炎症消退,肌组织表面轻度纤维化、完全吸收,接近正常组织,肌细胞未见明显变化。以上结果表明多微孔多聚糖止血粉可用于软组织创伤止血。     

免疫效应细胞增殖与细胞毒性功能检测3种方法的比较

目的：对比研究用于检测免疫效应细胞增殖与细胞毒功能的方法。方法：分别采用CCK?8法、EdU标记法、CFSE标记法检测不同培养条件下NK92细胞增殖［组1：100 U/mL白细胞介素（interleukin,IL）?2;组2：100 U/mL IL?2+10 U/mL IL?15］。用乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）释放法、活细胞染料双标流式法、荧光素酶法检测两组NK92对K562细胞的杀伤。结果：CCK?8法检测结果提示组2增殖能力强于组1,但差异无统计学意义（P＞0.05）,而EdU和CFSE标记法均提示两组间增殖能力有显著差异（P＜0.05）。活细胞染料双标流式法与荧光素酶法均能够检测出不同效靶比下两组NK92细胞毒功能的差异（P＜0.05）,LDH释放法在低效靶比下未检测出两组细胞毒性的差异（P＞0.05）。以双标流式法的检测值为标准参照,荧光素酶法和LDH释放法的检测值与其呈显著相关性（rS=0.979 4,P＜0.001;rS=0.973 2,P＜0.001）。结论：CCK?8法更侧重于检测代谢活性,EdU和CFSE标记法更适用于悬浮类免疫细胞的增殖检测。3种细胞毒功能检测具有一致性,活细胞染料双标流式法适合检测对悬浮类靶细胞的杀伤,荧光素酶法比LDH释放法更适用于检测对贴壁细胞的杀伤作用。     

B6-Co与B6小鼠眼睑胚胎发育的形态观察

目的:探讨遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)胚胎期眼睑发育形态学差异。方法:将B6-Co小鼠与B6小鼠对照,取胚胎期16.5天(E16.5)的胚胎,切取整个头部固定、脱水,冷冻切片。采用HE染色观察胚胎期眼睑闭合状况;FITC-鬼笔环肽染色眼睑部位的细胞骨架;Hoechst染色眼睑部位细胞核。结果:B6小鼠在E16.5天眼睑完成闭合,而B6-Co小鼠眼睑不能闭合,眼睑细胞骨架异常,无微丝束形成,不利于细胞迁移。结论:B6-Co小鼠由于眼睑边缘部位细胞迁移障碍引起的眼睑发育缺陷,造成出生时眼睑开放。     

B6-Co小鼠感染角膜中TLR4/9的表达及意义

目的：研究TLR4和TLR9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达水平及意义。方法：采用Trizol法提取小鼠角膜RNA,实时荧光PCR检测目的基因mRNA表达水平;取小鼠眼球作冰冻切片,进行TLR4/9免疫荧光染色。结果：B6-Co小鼠角膜组织中TLR4/9 mRNA的表达在不同周龄阶段均高于B6小鼠,随着小鼠周龄的增加呈上升趋势,第4周和第8周TLR4表达、第8周和第16周TLR9表达与B6小鼠的差异,均有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光显示B6-Co小鼠角膜上皮层中TLR4/9蛋白表达高于B6小鼠,在第8周荧光信号最强。结论：TLR4/9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达上调,提示TLR4/9在角膜感染免疫应答中发挥作用。     

抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B(GPA/GPB)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用人“O”型血红细胞作为免疫源,免疫BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb,用谱红细胞筛选阳性克隆;采用直接、间接血凝试验检测杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价。分别用快速定性试纸和酶处理红细胞检测mAb的Ig亚类及抗原表位。用Western blot鉴定抗GPA/GPB mAb的特异性。结果:获得4株分泌抗M、1株抗N及3株抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞培养上清mAb的效价介于1×2-4~1×2-8之间,腹水mAb的效价在1×2-7~1×2-12之间。除1株mAb 1C1C9C4为IgM外,其他7株mAb均为IgG。通过杂交瘤细胞培养上清与谱红细胞的反应格局,结合mAb抗原表位的检测,确定4株和1株mAb可分别特异性结合于GPA的M、N抗原表位;另3株mAb 6D7C9、7C9H4和7C9G11与“O”型血红细胞膜的Western blot结果显示,均可结合GPA、GPB蛋白。结论:成功地建立了4株分泌抗M、1株分泌抗N及3株分泌抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株,可用于MNSs血型系统的研究及鉴定,并为制备双功能抗体用于病毒、肿瘤疾病的诊断和治疗打下了坚实的基础。     

分次剂量可变方案照射MCF-7乳腺癌细胞的实验研究

目的用人乳腺癌细胞MCF-7研究不等分次剂量(VFS)照射方案的效果。方法10组相同数目的MCF-7细胞样本,用MTT分析方法获得不同的分次剂量方案照射后的细胞存活率(S)进行比较。结果除1组外,其余9组VFS方案照射后获得的S值均小于CFS照射后的S值,其中有统计学意义的有3组;在相同变化幅度的情况下,递减的VFS照射方案所获得的效果要好于递增VFS照射方案,其中有显著的统计学意义的有2组。结论实验结果与理论计算结果一致,所以,VFS方案,尤其是分次剂量递减的VFS方案可能应用于临床以提高治疗效果。     

丹酚酸B对内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的:研究丹酚酸B对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用,并探讨其对HUVECs CD54表达和中性粒细胞黏附率的影响.方法:以H2O2为损伤剂,观察丹酚酸B对HUVECs培养上清中LDH、NO、MDA含量的影响,并利用免疫组化方法和显微计数法观察该药对H2O2存在下CD54表达和中性粒细胞黏附率的影响.结果:丹酚酸B可剂量依赖性地减少H2O2所致内皮细胞LDH外漏和MDA生成,并提高NO释放,还能有效抑制H2O2存在下CD54表达和增加中性粒细胞黏附率.结论:丹酚酸B具有减轻H2O2所致内皮细胞的氧化性损伤,降低血管内皮细胞表面细胞黏附分子表达和抑制中性粒细胞黏附的作用,这一作用可能是丹酚酸B抗心肌缺血/再灌注损伤的作用机制之一.     

高脂血症大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物表达的变化

目的观察高脂饲料喂养的大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物（SSeCKS）的表达变化,探讨高脂血症对SSeCKS表达的影响。方法高脂饮食组（n=8）和正常饮食组（n=8）SD大鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养16周后,测血清总胆固醇及甘油三酯;用HE染色观察心脏病理学改变;用免疫组织化学法检测SSeCKS在心脏的表达;用免疫荧光双标法观察SSeCKS在心脏中的细胞定位。结果高脂饮食组总胆固醇和甘油三酯较正常饮食组明显升高（P〈0.05）;病理学观察发现高脂饮食组形成高脂性心脏病变;免疫组织化学检测发现高脂饮食组中SSeCKS表达主要分布在心内膜、心间质;免疫荧光双标发现SSeCKS与心脏组织内皮细胞和α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞部分共定位。结论高脂饲料喂养能使大鼠形成高脂血症,并引起心脏SSeCKS表达升高,SSeCKS可能参与了心脏结构重塑及细胞凋亡,从而促进动脉粥样硬化心脏病的发展。     

Gravin参与血管内皮生长因子诱导的人脐静脉内皮细胞体外血管形成

目的研究Gravin在血管内皮生长因子（VEGF）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）迁移和体外“小管样结构”（TLS）形成中的作用。方法用VEGF诱导HUVEC,通过Western blot和细胞免疫荧光分析Gravin在细胞内分布的变化;用Gǒ6983【蛋白激酶C（PKC）抑制剂】和VEGF共处理内皮细胞,观察对Gravin分布的影响,观察其对VEGF诱导HUVECs迁移和TLS形成的影响。结果VEGF呈时间和剂量依赖性诱导Gravin磷酸化,并向核周和细胞边缘重分布;以上效应能被0.5μmol/LGǒ6983抑制;Gǒ6983同时抑制VEGF诱导HUVEC迁移和TLS形成。结论PKC-Gravin信号通路参与VEGF诱导的内皮细胞迁移和血管形成。     

Hspa5和E-cadherin在B6-Co小鼠胚胎后期眼睑中的表达研究*

目的：检测遗传性角膜混浊突变系小鼠（B6-Co）与B6小鼠在胚胎后期眼睑组织中Hspa5、E-cadherin基因及蛋白的表达变化，探讨两者与B6-Co小鼠EOB表型形成的内在联系。方法：取B6、B6-Co胚胎期16.5天（E16.5d）、E18.5d小鼠眼睑，用Realtime PCR法和Western Blot法检测眼睑中Hspa5、E-cadherin的mRNA和蛋白表达情况。结果：E16.5d，B6-Co小鼠眼睑中Hspa5表达显著降低，E-cadherin表达显著升高；E18.5d，B6-Co小鼠Hspa5表达显著升高，E-cadherin表达显著降低。结论：Hspa5、E-cadherin的基因和蛋白在B6-Co突变系小鼠眼睑中的表达出现明显异常，提示B6-Co小鼠胚胎发育后期Hspa5、E-cadherin表达变化与EOB表型的形成有密切关联。