胃癌组织C19orf28蛋白表达的预后价值

目的：探讨C19orf28是否可以预测胃癌（gastriccancer,GC）患者的预后。方法：采用免疫组化染色法检测141例胃癌组织及其癌旁组织（距癌组织5cm）中C19orf28蛋白表达水平。结果：C19orf28蛋白在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P<0.05）。C19orf28高表达患者（n=43）的临床病理学特征与C19orf28低表达患者（n=98）的临床病理学特征差异无统计学意义。C19orf28高表达患者总生存期（overallsurvival,OS）短于C19orf28低表达患者OS（P=0.0003）。C19orf28高表达患者平均生存期（23.40个月）短于C19orf28低表达患者平均生存期（38.35个月），差异有统计学意义（P<0.01）。Cox多因素风险回归模型分析显示，C19orf28表达（HR=2.34,P=0.005,95%CI1.30～4.21）是胃癌患者不良预后的独立预测因子。结论：胃癌组织C19orf28蛋白表达水平与患者不良预后相关，在预测胃癌患者预后中有潜在应用价值。     

Med19基因沉默对p53野生型和突变型乳腺癌细胞紫杉醇化疗疗效的影响

目的：探讨下调中介体（mediator,Med）19表达是否增加紫杉醇(pacliatxel, PTX)对p53野生型和突变型乳腺癌细胞化疗的疗效。方法：构建Med19RNA干扰（RNAi）慢病毒,分别感染p53野生型的乳腺癌细胞MCF-7和p53突变型的乳腺癌细胞MDA-MB-231,两种细胞均分为Med19基因敲减组（KD组：细胞感染pGcscil-Med19-siRNA-GFP ）、空载体感染组（NC 组：细胞感染pGcscil-Med19-NC-GFP）、对照组（CON组：未感染慢病毒的乳腺癌细胞）,荧光显微镜观察慢病毒感染效率。Western blotting检测Med19基因沉默后各组细胞内P53、磷酸化P53（pP53）、P21蛋白表达水平的变化。紫杉醇分别作用于Med19基因沉默前后的MCF-7和MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化。结果：KD组和NC组细胞的荧光感染效率均大于90%,表明获得了满意的感染效率。与CON组和NC组相比,两种细胞KD组的Med19蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义（均P<0.05）。MCF-7细胞KD组P53、pP53、P21蛋白表达上调,差异有统计意义（均P<0.05）。在0.01～50 μg/ml 范围内,紫杉醇抑制两种乳腺癌细胞的生长增殖并呈浓度依赖性（P<0.05）,对KD组的抑制率和细胞凋亡率均高于NC组及CON组,差异有统计学意义（均P<0.05）;但MDA-MB-231细胞各组间抑制率差异无统计学意义（均P>0.05）。10 μg/ml紫杉醇导致两种细胞的KD组和NC组均出现G2/M期阻滞,并且MCF-7细胞KD组G0/G1期细胞较NC组显著增加（P<0.05）。结论：Med19基因沉默增强紫杉醇对p53野生型乳腺癌MCF-7细胞化疗的疗效,其机制可能为增强了p53基因的表达活化,通过其下游基因p21 调节细胞周期、促进细胞凋亡。     

Menin通过PI3K/Akt信号通路抑制胃癌AGS细胞的生长

目的 :探讨多发性内分泌腺瘤病1型(multiple endocrine neoplasia type 1,MEN 1)基因编码蛋白menin对人胃癌AGS细胞生长的影响,及其可能的作用机制。方法:将携带有MEN1基因的重组腺病毒Ad-MEN1感染人胃癌AGS细胞,然后采用蛋白质印迹法和免疫荧光法检测Ad-MEN1感染后对AGS细胞中menin表达水平的影响;分别采用MTT和FCM法检测menin过表达对AGS细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响;再用蛋白质印迹法检测磷酸肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路相关蛋白及其磷酸化水平的变化。结果:蛋白质印迹法和免疫荧光检测结果显示,menin蛋白在Ad-MEN1感染后的AGS细胞中表达水平明显增加(P<0.05),重组腺病毒Ad-MEN1在AGS细胞中的感染复数为60时,感染效率最佳,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。DNA合成前期(G0/G1期)细胞所占比例上升,合成期(S期)细胞所占比例下降(P值均<0.05)。然而,menin高表达对AGS细胞的凋亡没有明显的作用(P>0.05)。Menin过表达后,AGS细胞中磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)和NF-κB p65的表达明显下调(P值均<0.05)。结论:Menin高表达可以抑制人胃癌AGS细胞的生长,其机制可能与抑制P13K/Akt和NF-κB信号转导通路有关。     

宫颈癌患者HPV感染和调节性T细胞的相关性研究

目的 探讨宫颈部位人乳头瘤病毒（HPV）感染与CD4＋ CD25＋ CD127-调节性T细胞（TReg）及机体免疫水平的关系.方法 采用第二代核酸杂交扩增技术（HC2）检测41例正常对照组、50例宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ、42例CIN Ⅱ～Ⅲ和70例感染HPV宫颈癌患者;采用流式细胞术检测外周血CD4＋CD25＋ CD127-TReg、细胞毒性T细胞（CTL）和NK百分率;采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中TGF-β1和INF-γ的含量.结果 ①HPV感染率随着宫颈病变的加重而升高（P =5.75×10^-19）;②宫颈CIN Ⅱ～Ⅲ组与宫颈癌组外周血CD4＋CD25＋CD127-TReg、CTL、NK、TGF-β1、INF-γ与CIN Ⅰ组及正常对照组比较,差异均 有统计学意义（P=1.03×10^-9）;且在HPV阴阳性组间比较亦有统计学意义（P=2.33×10^-4）;③CTL与NK和Treg呈负相关（P值分别为1.62×10^-6和3.41×10^-5）;INF-γ含量与TReg呈负相关（P=2.11×10^-5）;④HPV与CD4＋ CD25＋ CD127-TReg百分率呈正相关（P =3.02×10^-6）.结论 宫颈HPV感染与TReg密切相关,TReg失调导致的免疫水平下降可能是宫颈癌免疫逃避机制之一.     

Linc00355在结肠癌中表达上调并促进肿瘤细胞增殖和侵袭

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)Linc00355在结肠癌组织中的表达水平,以及沉默Linc00355表达对结肠癌HCT116细胞增殖及迁移和侵袭能力的影响。方法:通过对肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中lncRNA进行差异表达的分析,筛选出在结肠癌组织中差异表达的lncRNA。用Kaplan-Meier方法分析Linc00355表达水平与患者生存的相关性。通过共表达分析方法预测与Linc00355相关的mRNA,并进行基因本体(Gene Ontology,GO)功能富集分析。采用siRNA干扰技术沉默结肠癌HCT116细胞中Linc00355的表达水平,随后采用CCK-8法和平板克隆实验检测沉默Linc00355表达对HCT116细胞增殖能力的影响,Transwell小室实验检测对细胞的迁移及侵袭能力的影响。结果:Linc00355在结肠肿瘤组织中的表达水平显著上调(P<0.01),且Linc00355高表达与患者的总生存时间呈现明显的负相关(P<0.05);GO富集分析提示,Linc00355共表达mRNA与p53信号转导、蛋白质泛素化及细胞衰老等多个信号通路相关(P值均<0.05);沉默Linc00355后HCT116细胞的增殖、迁移及侵袭能力均明显降低(P值均<0.001)。结论:Linc00355在结肠癌患者中是一个不良的预后指标,Linc00355可能通过调控多个信号通路促进结肠癌的发生和发展。     

长链非编码RNA ZEB1-AS1促进食管鳞癌侵袭转移

背景与目的：长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）锌指E-盒结合同源异形盒1-反义链1（Zinc finger E-box binding homeobox 1 antisense 1，ZEB1-AS1）在多种肿瘤中高表达，与肿瘤患者临床病理学特征及预后相关，但其在食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）中的作用及其机制尚不清楚。从细胞与分子生物学水平探讨lncRNA ZEB1-AS1在ESCC细胞侵袭转移中的作用。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）方法检测9株ESCC细胞株中lncRNA ZEB1-AS1的表达水平，筛选出一株高表达细胞株。采用小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）转染Eca-109细胞，分成干扰组（siZEB1-AS1）、干扰对照组（siNC）和空白组（Eca-109）。采用RTFQ-PCR方法检测lncRNA ZEB1-AS1的表达水平，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）实验检测细胞增殖能力情况，采用划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力情况，采用RTFQ-PCR方法和蛋白质印迹法（Western blot）检测ZEB1的表达水平。结果：9株ESCC细胞株中，Eca-109细胞中lncRNA ZEB1-AS1表达水平最高。siRNA 抑制lncRNA ZEB1-AS1表达，降至对照组的57%。与对照组细胞相比，lncRNA ZEB1-AS1不影响Eca-109细胞增殖，但是能显著促进Eca-109细胞迁移和侵袭。lncRNA ZEB1-AS1上调ZEB1 mRNA和蛋白的表达。结论：lncRNA ZEB1-AS1通过上调ZEB1促进ESCC迁移、侵袭，lncRNA ZEB1-AS1/ZEB1或许可以作为ESCC治疗的潜在靶点。     

肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤放射治疗中的研究进展

肿瘤相关巨噬细胞（TAM）是肿瘤组织中数量最多的免疫细胞之一。TAM为一个表型可塑的异质性细胞群体,能调控肿瘤增殖、转移及耐药等表型,已成为抗肿瘤治疗的新靶点。放射治疗是恶性肿瘤的基本治疗手段之一,研究发现放射治疗对TAM的表型和功能有显著影响,而TAM也可反过来调控肿瘤放疗疗效。本文就TAM在肿瘤放疗中的研究进展作一综述。     

CHPF高表达在结直肠癌预后评估中的意义

目的探讨软骨素聚合因子(chondroitin polymerizing factor, CHPF)在结直肠癌预后评估中的意义。方法采用免疫组化SP法检测206例结直肠癌原发灶及癌旁组织中CHPF蛋白的表达,应用Western blot法检测结直肠原发灶癌组织及其癌旁组织中CHPF蛋白的表达。结果 CHPF蛋白在原发灶癌组织(122/206,59.2%)中的表达显著高于癌旁组织;Western blot实验显示在新鲜结直肠癌组织中检测到CHPF蛋白(5/5,100%)。CHPF蛋白高表达与结直肠癌神经或脉管侵犯(P=0.011)、TNM分期(P0.01)、癌结节(P=0.035)明显相关;与患者性别、年龄、肿瘤分化程度和KRAS状态无关(P0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果表明,CHPF蛋白高表达与结肠癌患者不良预后显著相关(P0.001)。Cox多因素风险回归模型分析显示,CHPF蛋白可以作为结直肠癌患者不良预后的独立预测因子。结论 CHPF蛋白高表达是结直肠癌患者不良预后的预测因子之一。     

肠炎和肠炎相关结直肠癌miRNA表达检测及生物信息学分析

背景与目的：炎症性肠病(inflammatory bowel diseases,IBD)为一组慢性肠道疾病,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)与克罗恩病(Crohn’s disease,CD)。肠炎相关性结直肠癌(colitis-associated col-orectal cancers,CAC)是由IBD癌化形成的一种恶性肿瘤。该研究通过检测UC、CD和CAC组织中相关微小核糖核酸(miRNA)的水平,初步探讨其作为肠炎癌转化分子标志物的可能性,并对在肠炎和CAC中显著变化的一组miRNAs进行靶基因归集和生物信息学分析,为以miRNAs为靶点的基因治疗提供理论和实验基础。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)技术,检测13例UC组织、3例CD患者组织、12例CAC组织及8例正常肠组织中16种miRNAs的表达。通过生物信息学对显著变化的一组miRNA进行靶基因分析,将文献中已报导的所有靶基因进行汇总,并利用DAVID数据库对靶基因进行功能富集分析(GO-analysis)和信号转导通路富集分析(KEGG-analysis,BIOCARTA-analysis)。结果：炎症相关miR-146a和癌症相关miR-27a、miR-29a、miR-20a、miR-21在UC、CD和CAC中的表达都显著高于正常结肠组织,且这一组miRNA的靶基因都富集在癌症相关通路、免疫信号相关通路和炎癌转换相关通路上。结论：miR-146a、miR-27a、miR-29a、miR-20a和miR-21可能是参与肠炎向结直肠癌转化的一组miRNA。     

长链非编码RNA ARHGAP5-AS1抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的：检测长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）ARHGAP5-AS1在乳腺癌组织及细胞中的表达，分析其表达与患者临床病理参数及预后的相关性，并初步探讨其对乳腺癌细胞体外增殖、迁移和侵袭的影响。方法：通过对TCGA数据库中乳腺癌相关数据集的生物信息学分析，筛选出在乳腺癌中低表达且与患者不良预后相关的lncRNA ARHGAP5-AS1，采用qPCR 方法在江南大学附属医院肿瘤科从 2010 年 4 月至 2016 年 10 月收集的乳腺癌组织中验证其表达。采用 χ2检验分析ARHGAP5-AS1表达与乳腺癌患者临床病理参数之间的关系，Kaplan-Meier生存分析构建生存曲线，比较高、低表达组的总生存期和无复发生存期。CCK-8 实验、划痕实验和 Transwell 实验分别检测 ARHGAP5-AS1 敲低对乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT-549的增殖、迁移和侵袭的影响。结果：TCGA 数据库分析结果显示，ARHGAP5-AS1 在乳腺癌组织中的表达水平显著低于正常乳腺组织（P<0.01），其低表达与较大肿瘤直径（T3）、远处转移（M1）、ER 和 PR 阴性以及较短的总生存期显著相关（均P<0.05）。乳腺癌组织中ARHGAP5-AS1表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05），其低表达与较大的肿瘤直径和淋巴结转移相关（均 P<0.05）。同样，ARHGAP5-AS1 在 6 株人乳腺癌细胞系（MDA-MB-231、BT-549、MDA-MB-468、MCF-7、HCC1937、Hs578T）中的表达水平也显著低于正常乳腺上皮细胞系（MCF-10A）（均P<0.05）。细胞功能实验显示，ARHGAP5-AS1敲低促进MDA-MB-231和BT-549细胞的增殖、迁移和侵袭（均P<0.05）。结论：ARHGAP5-AS1异常低表达可能通过促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭影响乳腺癌的发生发展。