鱼精蛋白对人结肠肥大细胞IgE依赖性与非依赖性类胰蛋白酶释放的调节

目的 :探讨鱼精蛋白对人结肠肥大细胞IgE依赖性与非依赖性类胰蛋白酶释放的调节。方法 :人结肠组织经酶消化后 ,细胞成分用全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4 试管中、 37°C条件下完成。用酶联免疫吸附试验方法测定类胰蛋白酶水平。结果 :促分泌剂抗IgE抗体和离子载体钙 (CI)均可明显刺激人结肠肥大细胞类胰蛋白酶的释放。鱼精蛋白浓度在<10 μg mL时可以剂量依赖性的方式抑制抗IgE抗体和CI诱导的类胰蛋白酶释放 ,但是 ,浓度为 10 0 μg mL时 ,作用则相反。在 37°C条件下同结肠细胞预培养 2 0min ,1μg mL的鱼精蛋白可明显抑制抗IgE抗体和CI诱导的类胰蛋白酶释放 ,而 10 μg mL的鱼精蛋白则起相反的作用。结论 :小剂量鱼精蛋白可以抑制肥大细胞IgE依赖性与非依赖性类胰蛋白酶的释放 ,提示其可成为炎症性肠病或其它肥大细胞相关性疾病的一个新的治疗途径     

人白细胞介素(IL)-28和IL-29基因的克隆与序列分析

人IL 2 8A、IL 2 8B和IL 2 9是由外周血单个核细胞(PMBC)和树突状细胞 (DC)等产生的细胞因子 ,组成一个新的细胞因子家族[1,2 ] 。其基因结构与IL 10相近似 ,但氨基酸水平与干扰素 (IFN)更接近 ,故Kotenko等[2 ] 也将它们相应地称为IFN λ1(IL 2 9)、IFN λ2 (IL 2 8A)和IFN λ     

人呼吸道粘液分泌体外实验方法的建立

目的建立研究人类呼吸道粘液分泌的体外实验方法。方法直径小于3mm的小支气管组织(HSBT)剪碎后被均匀地放入24孔培养板中。分别记录基础粘蛋白分泌量(BM)和激发粘蛋白分泌量(SM)，SM用超过BM的百分率表示。在含50nmol／L视黄酸的BEGM与DMEM(1：1)混合液中进行支气管粘膜上皮的原位培养，在带半透膜的插入培养板中培养正常人支气管上皮细胞(NHBE)。MUC5AC粘蛋白ELISA以其多克隆抗体为一抗，绵羊抗兔IgG为二抗，邻苯二甲酰胺显色。酶连二花葙豆凝集素(DBA)试验(ELDBAA)以DBA铺盘以便与粘蛋白结合，用过氧化物酶标记的DBA识别被捕捉的粘蛋白。结果MUC5AC ELISA的敏感性为10ng／ml，而ELDBAA为30ng/ml。经过3h培养，HSBT的基础MUC5AC和DBA粘蛋白分泌量分别为11和19ng／mg组织。原位培养的支气管粘膜上皮细胞3h积聚的粘蛋白分泌量分别为MUC5AC粘蛋白793-1868ng／孔和DBA粘蛋白290-2675ng／孔。NHBE细胞在气液界面形成后的第6d，3h积聚的基础DBA粘蛋白分泌量为22ng／孔。结论:上述组织和细胞培养以及粘蛋白测量方法的建立为呼吸道粘液分泌的研究奠定了良好基础。     

支气管肺泡灌洗液中肥大细胞的染色与激活特点和组胺测定

目的 :研究支气管肺泡灌洗液 (BALF)中肥大细胞的特性。方法 :来源于 10名稳定期轻度哮喘患者的BALF经过滤和冲洗后 ,取 10 μL细胞悬液与等量的 0 5 %阿辛蓝混合并计数有核细胞总数和肥大细胞数。其余的细胞重新悬浮于含钙、镁离子的HBSS(全HBSS)中。激发过程在LP4 试管中完成 ,即在预先加完 5 0 μL钙离子导入剂 (CI)或缓冲液的试管中分别加入10 0 μL细胞悬液 ,并在 37°C水浴箱中培养 2 0min。激发反应由快速降温并离心而终止。组胺测定采用酶联免疫反应试剂盒来进行。结果 :经阿辛蓝染色的肥大细胞呈天蓝色 ,占BALF中有核细胞的 (0 2 9± 0 0 2 ) %。CI可引起浓度相关性的组胺释放 ,最大组胺释放由 1μmol LCI所引起。结论 :经上述方法处理的BALF肥大细胞可对阿辛蓝着色 ,可被CI激活。     

蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2功能分化的分析研究

目的：研究蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2(PLA2)中D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化及其功能分化决定位点的鉴定。方法：运用序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算研究D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化情况及其分化位点。结果：序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算结果表明蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2的确发生了功能分化，对于K49 PLA2来说，1S，7K，11Q，E12，R34，T56，N88，L92，E108，K116，K128可能为功能分化决定位点。对于D49 PLA2，L2，G33，G35，F46和Y118可能为功能分化决定位点。结论：我们首次通过序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算鉴定出蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2可能的功能分化位点，为今后通过基因重组和定点突变方法研究蛇毒Ⅱ类PLA2结构功能关系提供了线索。     

肥大细胞脱颗粒信号的自我放大机制

目的：变态反应性疾病包括支气管哮喘、变应性鼻炎、变应性皮炎、食物及药物过敏等，发病率约占全球人口的40％，对人类危害极大。目前已经证实此类疾病的发生是一种炎症过程，而肥大细胞被认为在这种炎症过程中起着重要的作用，被称为初级效应细胞（primary effector cells），是连接变态反应诱导阶段和效应阶段的纽带。但是，迄今为止微量过敏原引起机体大量肥大细胞激活的机制尚不清楚，因而很有必要给以深入研究。方法：①肥大细胞激活实验：以类胰蛋白酶、组胺、蛋白酶激活受体激动剂等激活酶悬浮的人大肠肥大细胞，并分别用酶联免疫吸附试验和特异性玻璃纤维结合荧光检测技术测量类胰蛋白酶和组胺的分泌量②小白鼠腹腔炎症性细胞聚集实验：注射后收集腹腔灌洗液并分类计数炎症性细胞③应用激光共聚焦显微镜结合双色荧光标记鉴定肥大细胞亚型。     

蛋白酶激活受体2激动剂对肥大细胞释放组胺的影响

目的 研究PAR-2激动剂(tc-LIGRLO-NH2与SLIGKV-NH2)和胰蛋白酶对结肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 结肠组织经酶消化后,细胞成份用全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2均可诱导人结肠肥大细胞剂量依赖性组胺释放。浓度为100μmol／mL时,tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2可分别引起比基础分泌量多出2．5倍和2倍的组胺释放,而反PAR-2激动剂tc-OLRGIL-NH2和VKGILS-NH2在实验浓度高至300μmol／mL时仍对组胺释放无影响。胰蛋白酶在1．0～100μg/mL间可引起剂量相关性组胺释放,胰蛋白酶抑制剂可抑制之。PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2的作用从加样后1min开始,3min后完成。细胞经过百日咳毒素和代谢抑制剂预先处理后,几乎失去了对tc-LIGRLO-NH2、SLIGKV-NH2和胰蛋白酶刺激的反应性。结论 PAR-2激动剂和胰蛋白酶是高效的组胺释放刺激剂,其在人结肠炎症性疾病中起一定的作用。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的探讨蛋白酶激活受体1（PAR1）激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介索-8（IL-8）分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内，并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和／或凝血酶抑制剂水蛭索进行刺激，刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果经过16h的培养，SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加，增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍，RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放．凝血酶在浓度1kU／L时就可引起IL-8释放量增加，10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰，为基础分泌量的7．5倍。水蛭索可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明，PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加，16h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8，PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

转化生长因子-β在哮喘气道炎症与重塑中的作用

Transforming growth factor-β(TGF-β) was reported to be increased in asthma in some studies. Accumulation of TGF-β in airway promotes smooth muscle cell mitogenesis and hyperplasia, and in-duces fibroblast and myofibroblast and smooth muscle proliferation as well as increase in protein synthesis in connective tissue(such as collagen deposition on the reticular basement membrane). The autocrine induction of collagen expression by smooth muscle may contribute to the thickening of the reticular basement membrane, irre-versible f‘throsis and remodeling seen in the airways in some asthmatics. TGF-β is considered to be a major fi-brogenic cytokine. It can increase smooth muscle mass and lead to severe bronchial obstruction in an asthma at-tack.