衣霉素对RPMI-8226细胞分化的影响

目的:探讨衣霉素对RPMI-8226细胞分化的机制.方法:用衣霉素处理RPMI-8226细胞.APAAP法测定细胞表面CD49e的表达率;ELISA法测定培养上清液中免疫球蛋白轻链的变化,Western blot法检测XBP-1u蛋白表达水平.结果:衣霉素处理后RPMI-8226细胞表面CD49e表达率增高,细胞培养上...     

抑制miR-21表达对结肠癌HCT116细胞生物学行为的影响

目的：探讨抑制 miR-21 表达对结肠癌HCT116细胞增殖、周期、凋亡、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法：实验分为3组,以miR-21抑制剂转染HCT116细胞为转染抑制组（IN）,另设阴性对照组（NC）、空白对照组（MOCK）,以Real-time PCR检测转染后HCT116细胞中miR-21的表达,应用MTT法、流式细胞术、Transwell侵袭和迁移实验检测转染后HCT116细胞的增殖、周期、凋亡、侵袭、迁移;以Western blotting检测转染后HCT116细胞PTEN的表达,荧光素酶报告实验检测转染后HCT116细胞PTEN的活性。结果：miR-21抑制剂转染后,HCT116细胞中miR-21的表达较NC和MOCK组细胞明显降低。下调miR-21后,HCT116细胞的增殖能力明显降低\[72 h时：（1.05±0.45） vs （1.43±0.02）,（1.45±0.01）;t=13.83,P=0000 159;t=14.88,P=0.000 119\],细胞凋亡率显著增加\[（16.30±1.00）% vs（1.87±0.53）%,（1.86±0.12）%;t=25.01,P=0.000 015 2;t=24.985,P=0.000 015 2\],细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞的侵袭\[（50±2.0） vs （115±3.0）,（111±3.0）个;t=29.09,P=0.000 008 31;t=31.23,P=0.000 006 27\]和迁移能力\[（22±2.0） vs （52.3±2.5）,（53.0±1.0）个;t=2401,P=0.000 017 8;t=16.34,P=0.000 082 0\]明显下降。miR-21抑制剂转染的HCT116细胞中PTEN的表达及其荧光素酶相对活性均显著增加。结论：miR-21可能通过抑制PTEN进而调控大肠癌细胞生物学行为,PTEN可能是miR-21的靶基因之一。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与血管再狭窄

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）是由锌和钙依赖性肽链内切酶多基因家族组成,能消化降解细胞外基质（extra cellular matrix,ECM）的几乎所有成分,是参与ECM降解的最主要的酶。血管重建术后,血管损伤、血流动力学改变、炎症、血栓形成及纤溶激活、氧化应激等因素都可促进MMP的表达和激活,活化的MMP降解ECM,促进血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC）迁移增殖,导致新内膜增生和血管重塑,最终导致血管再狭窄。     

钙信号在ALA-PDT诱导SW480细胞凋亡及细胞自身保护机制中的作用

背景与目的:肿瘤的光动力疗法(photodynamictherapy,PDT)是基于光敏剂选择性积聚在肿瘤组织中,肿瘤细胞接受可见光照后凋亡或坏死的一种治疗方法。细胞内游离钙作为重要的第二信使参与多种细胞功能的调节,但钙信号在PDT中的作用却不甚清楚。本研究的目的是探讨钙信号在!氨基酮戊酸-光动力学疗法(ALA-PDT)诱导SW480细胞凋亡及细胞自身保护机制中的作用。方法:将SW480细胞分为4组:空白对照组、激光照射组、ALA组和ALA-PDT组。用TUNEL法检测细胞凋亡;用激光共聚焦显微镜观测各组细胞内游离钙离子浓度的变化;放射免疫法测定各组细胞内cAMP及cGMP含量;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组细胞中钙调素的基因表达;Western蛋白印迹检测各组细胞MEK和ERK1/2蛋白产物及磷酸化蛋白产物的表达。结果:TUNEL法显示ALA-PDT组的人结肠癌细胞在PDT后30min凋亡指数(apoptosisindex,AI)为(25.26±5.04)%,60minAI为(50.45±7.85)%;激光共聚焦结果为ALA-PDT组细胞内游离钙离子浓度在10min时荧光强度为100.00±19.83,而20min时达185.40±18.90(P<0.01),而空白对照组、单独激光照射组、ALA组细胞内钙离子浓度无明显变化;在监测时间内,cAMP含量在30min时为(3.215±0.245)pmol/L,显著高于其它各组及各组内不同时相的cAMP含量(P<0.001);空白对照组、激光照射组、ALA组以及ALA-PDT后30min、60min、90min组的CaM3的相对表达量分别为3.97±0.29、4.28±0.39、4.51±0.44、12.60±1.84、11.39±1.13和12.77±1.35,ALA-PDT后30～90min组的CaM3表达显著高于空白对照组、激光照射组和ALA组(P<0.001);ALA-PDT后SW480细胞的ERK通路激活。结论:钙信号对ALA-PDT诱导SW480细胞凋亡起着重要作用,同时也诱导了细胞自身的保护机制——ERK通路激活。     

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织中CK14及CK19表达水平的影响

目的探讨皮肤再生医疗技术(moist exposed burn therapy/moist exposed burn ointment,MEBT/MEBO)对大鼠慢性难愈合创面组织中CK14及CK19表达水平的影响。方法按照随机数表法将90只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、急创组、慢创组、rb-bFGF组及MEBO组,每组18只,空白组大鼠仅做背部备皮处理,急创组大鼠建立急性创面模型,慢创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠建立慢性创面模型;造模成功后,空白组大鼠备皮处皮肤以及急创组与慢创组大鼠创面予以生理盐水纱布湿敷,rb-bFGF组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子(recombinant bovine basic fibroblast growth factor,rb-bFGF)凝胶治疗,MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(moist exposed burn ointment,MEBO)治疗。分别于局部处理第3、7、14天取各组大鼠皮肤或创面组织行Masson染色,观察组织形态学差异,并进行Western blotting及RT-PCR检测,对比CK14、CK19蛋白表达及其mRNA转录水平。结果 (1) Masson染色结果显示,急创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织形态学差异不明显,均可见炎性细胞逐渐减少,新生血管及皮肤附属器逐渐形成,创面组织形态逐渐接近正常,而慢创组大鼠创面组织中炎性细胞消散及新生血管生长较慢,逐渐形成瘢痕组织形态。(2)局部处理第3、7、14天,急创组、慢创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织中CK14蛋白表达及其mRNA转录水平均呈逐渐升高的趋势(P均0.05),至局部处理第14天,急创组、rb-bFGF组及MEBO组均升高至空白组水平(P均0.05),而慢创组仍低于其它各组(P均0.05)。(3)局部处理第3、7、14天,急创组、慢创组、rb-bFGF组及MEBO组大鼠创面组织中CK19蛋白表达及其mRNA转录水平均呈先升高后降低的趋势(P均0.05),至局部处理第14天,急创组、rb-bFGF组及MEBO组均降低至空白组水平(P均0.05),而慢创组仍高于其它各组(P均0.05)。结论MEBT/MEBO能够促进慢性难愈合创面愈合,调控创面组织中CK14及CK19的表达水平可能是其部分作用机制。     

血管重建术后再狭窄的防治现状

目的 了解血管重建术后再狭窄的各种防治手段。方法 对有关国内、外血管重建术后再狭窄防治方法的文献进行综述。结果 血管再狭窄的防治手段包括基因治疗、药物治疗、血管外支架和物理治疗等。基因治疗的方法包括转染能抑制血管平滑肌细胞增殖的基因和利用反义核酸技术或RNA干扰技术使能促进血管平滑肌细胞增殖的基因失活。结论 各种防治方法各有优、缺点，有些还存在争议。随着分子生物学技术的发展，基因治疗将会成为防治血管再狭窄的最有效手段。     

腹壁疝修补术后并发症原因及防治

腹壁疝因发生部位的不同可分为腹部疝和腹股沟疝。前者依据发病的原因可以分为切口疝、创伤性疝和先天性疝,依据部位又可以分为腹壁疝、白线疝和脐疝等;后者则包括斜疝、直疝、股疝和闭孔疝等。无论是哪一种疝,治疗原则不外乎还纳疝内容物,对薄弱的腹壁组织进行加强,尽量防止疝复发。     

趋化因子及其受体与乳腺癌的关系研究进展

对几种趋化因子及其受体，即SLC／CCR7，SDF-1／CCR4，MCP-1及MIP-1在乳腺癌发病过程中的研究进展进行综述。乳腺癌患者的SLC／CCR7，SDF-1／CCR4，MCP-1及MIP-1水平较正常人高。对这些趋化因子及其受体的深入研究有望成为治疗乳腺癌的新靶点。     

人天冬氨酸-β-羟化酶树突状细胞疫苗对肝癌细胞系的体外作用研究

目的：通过对携带人天冬氨酸-β-羟化酶（aspartate-β-hydroxylase,AAH）基因的树突状细胞杀伤肝癌细胞系的研究,探索可用于防治肝癌的树突状细胞疫苗。方法：重组腺病毒（Ad-AAH-IRES2-EGFP）感染C57BL/6小鼠骨髓未成熟树突状细胞（dendritic cells,DCs）制备携带AAH基因的DCs（AAH-DCs）,与同体小鼠脾脏T淋巴细胞共培养后作为效应细胞,以肝癌细胞株HepG2和Huh7分别作为靶细胞,效应细胞分别和靶细胞共培养24 h,CCK-8法检测效应细胞对靶细胞增殖的影响;流式细胞术检测效应细胞对靶细胞凋亡的影响。将AAH-DCs连续3次皮下注射免疫C57BL/6小鼠,乳酸脱氢酶释放法检测免疫后小鼠脾脏T淋巴细胞对靶细胞的裂解效应。结果：AAH-DCs与T淋巴细胞共培养组靶细胞的增殖能力明显低于对照组（P=0.000）,凋亡率明显高于对照组（P=0.000）;实验组靶细胞的裂解率明显高于对照组（P=0.000）。结论：荷载AAH基因的树突状细胞疫苗能够诱导产生细胞毒性T淋巴细胞从而杀伤表达AAH的肝癌细胞。