重组携带hIL-10基因的腺病毒载体的构建与鉴定

目的 构建携带人白细胞介素10(hIL-10)基因的腺病毒载体,体外细胞学鉴定其介导的基因表达.方法 以pORF-hIL10质粒为模板,PCR扩增hIL-10基因,获得hIL10 cDNA片段,酶切并插入线性化pUC19质粒,命名为pUC19-hIL10.再酶切pUC19-hIL10,插入pDC315-EGFP,置换EGFP序列,构建pDC315-hIL10.将质粒pDC315-hIL10和pDC315-EGFP分别共转染至293细胞,产生复制缺陷型重组腺病毒.pDC315-hIL10和pDC315-EGFP分别感染大鼠肝细胞,免疫学方法鉴定目的基因的表达.结果 经PCR扩增、鉴定,证明已正确构建重组腺病毒Ad5-hIL10和Ad5-EGFP.pDC315-EGFP能够在大鼠肝细胞介导EGFP的表达,使细胞呈绿色荧光反应;pDC315-hIL10能够在大鼠肝细胞介导hIL-10的表达.结论 成功构建了重组腺病毒质粒Ad5-hIL10和Ad5-EGFP,可用于IL-10基因对肝细胞损伤的保护作用的进一步研究.     

构建携带hIL-10基因的腺病毒载体及其对大鼠肝细胞损伤的保护作用

目的:构建携带人白细胞介素(human interleukin,hIL)-10基因的腺病毒载体,细胞学及动物模型实验鉴定其介导的目的基因表达,并验证其对大鼠肝细胞损伤的保护作用?方法:以pORF-hIL10质粒为模板,PCR扩增hIL-10基因,插入腺病毒质粒pDC315,构建pDC315-hIL10?将质粒pDC315-hIL10与腺病毒包装质粒共转染至293细胞,产生复制缺陷型重组腺病毒Ad5-hIL10;感染大鼠肝细胞,免疫学方法鉴定目的基因的表达;建立体内外大鼠肝细胞损伤模型,验证Ad5-hIL10对肝细胞损伤的保护作用?结果:经PCR扩增?鉴定,证明已正确构建重组腺病毒Ad5-hIL10?大鼠肝细胞感染Ad5-hIL10后,随着病毒感染强度的升高,hIL-10表达明显上升?大鼠肝细胞体外培养模型预先感染病毒Ad5-hIL10,经四氯化碳诱导损伤,则细胞存活率随感染强度(multiplicity of infection,MOI)值升高而增加,至MOI=50时,细胞存活率恢复至92%;大鼠体内肝损伤模型显示,与损伤对照组和空白病毒对照组比较,Ad5-hIL10处理的大鼠肝细胞水样变性和间质炎症反应均减轻,肝功能的各项指标均有明显改善(P < 0.05)?结论:成功构建了重组腺病毒质粒Ad5-hIL10,且能明显提高肝细胞的存活能力,对肝功能有明显保护作用?     

Galectin-3、C-erbB-2和E-cadherin在胃癌中的表达及意义

目的 研究半乳糖凝集素3 (galectin-3)、C-erbB-2和上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)在胃癌中表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测44例原发性胃癌组织及其癌旁组织galectin-3、C-erbB-2及E-cadherin的表达.结果 胃癌中galectin-3阳性率为84.1%,显著高于对照组的40.0%;有淋巴结转移组的表达率为93.5%,显著高于无淋巴结转移组的61.5% (P＜0.05).胃癌中C-erbB-2的阳性率为61.4%,显著高于对照组的10.0%;浸润全层组为69.4%,显著高于仅浸润黏膜、肌层组的25.0% (P＜0.05).胃癌中E-cadherin阳性率为68.2%,显著低于对照组的95.0%(P＜0.05),有淋巴结转移组的表达率58.1%,明显低于无淋巴结转移组的92.3%(P＜0.05).结论 Galectin-3、C-erbB-2和E-cadherin的异常表达和胃癌的发生、进展及转移有关.     

胃癌中C-erbB-2?Ki-67的表达及其意义

目的: 研究C-erbB-2和Ki-67在胃癌中表达和意义?方法:采用免疫组化SP法检测77例原发性胃癌中C-erbB-2及Ki67的表达?结果:C-erbB-2在胃癌中的阳性率为62.3%,在胃炎中的阳性率为6.7%,两者有显著差异(P < 0.05)?C-erbB-2在胃癌中的表达与胃癌的浸润深度有关(P < 0.05),与胃癌患者的年龄?性别?胃癌的分化程度和淋巴结转移无关(P > 0.05)?Ki-67在胃癌中的阳性率为77.9%,在慢性胃炎阳性率为10.0%,两者有显著差异(P < 0.05)?Ki-67的表达与胃癌患者的年龄?性别?肿瘤的浸润深度?分化程度和淋巴结转移无关(P > 0.05)?结论:C-erbB-2?Ki-67的异常表达和胃癌的早期发生有关?