幽门螺杆菌感染与胃癌组织环氧合酶2表皮生长因子受体和血管内皮生长因子的表达

目的 探讨环氧合酶2(COX-2)、表皮生长因子受体(EGFR)和血管内皮生长因子(VEGF)在胃癌组织中的表达,三者间的相关性及其与幽门螺杆菌(Hp)感染的关系.方法 采用免疫组化法检测61例胃癌组织及相应的20例癌旁组织中COX-2、EGFR和VEGF的表达;采用Westernblot方法检测10例胃癌组织及其相应癌旁组织中COX-2、EGFR和VEGF蛋白的表达;用快速尿素酶诊断法和13C呼气试验检测47例胃癌患者Hp感染状况.结果 免疫组化检测结果显示,COX-2、EGFR和VEGF在胃癌组织中的阳性表达率分别为59.02%、36.07%、60.66%,均明显高于癌旁组织(分别为25.00%、0和30.00%;均P＜0.05),三者在胃癌组织中的表达且呈正相关.COX-2和EGFR在Hp感染阳性胃癌组织中的阳性表达率分别为75.76%和45.45%,高于Hp感染阴性者(28.57%和14.29%;均P＜0.05).Western blot检测结果表明,胃癌组织中COX-2、EGFR和VEGF的灰度值分别为51.29±23.42、35.89±12.50和48.55±10.33,均显著高于癌旁组织(均P＜0.05).结论 COX-2、EGFR和VEGF在胃癌组织中高表达,Hp感染可能上调胃癌组织中COX-2、EGFR的表达.     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导BIO细胞产生的研究

目的观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）与成虫抗原（SwAP）是否能够诱导小鼠调节性B细胞的产生。方法SEA、SWAP和脂多糖（LPS）分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和磁珠分选后的脾脏CD19＋B细胞,72h后用流式细胞术分别检测CD19＋IL-10＋细胞比例,和细胞表面CD80、CD86及CD40的表达,用ELISA法检测培养上清中IL-10的水平。体内实验用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,1次／N,共3次,末次免疫后7d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19＋IL-10＋细胞比例,用ELIsA法检测培养上清中IL-10的水平。结果LPS与SEA体外均能显著诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19＋IL-10＋细胞,两者无显著差异,而swAP组不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19＋II-10＋。细胞;SEA与LPS能够诱导脾脏CD19＋B细胞表面高表达CD80、CD86和CD40,而SwAP不能诱导脾脏CD19＋B细胞活化;SEA与LPS诱导脾脏CDt9＋B细胞分化为IL-10＋细胞的比例也显著升高,同时能刺激脾脏CD19＋B细胞分泌高水平的IL-10,两者无显著差异;而SwAP不能诱导小鼠脾脏CD19＋。B细胞分化为IL—10＋细胞并分泌IL-10。SEA体内免疫小鼠后,小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19＋IL-10＋细胞比例显著升高,并且能够分泌高水平的IL-10,而swAP和PBS免疫组均不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD-9＋IL-10＋细胞并分泌1L-10。结论SEA体外体内均能诱导小鼠产生分泌IL-10的B10细胞,并且在体外不依赖于脾脏其他免疫细胞的参与,而SwAP体外体内均不能诱导B10细胞的产生。     

全反式维A酸对UVB照射的A375细胞酪氨酸酶代谢及铜锌超氧化物歧化酶的影响

目的 探讨全反式维A酸（ATRA）对中波紫外线（UVB）照射的人A375黑素瘤株细胞黑素含量、酪氨酸酶及铜锌超氧化物歧化酶（Cu/ZnSOD）的影响。方法 将培养的A375细胞分为6组：ATRA + UVB组：A375细胞照射UVB后加入全反式维A酸;氢醌 + UVB组：照射UVB后加入氢醌;UVB组：仅照射UVB;ATRA组：A375细胞加入ATRA;氢醌组：A375细胞加入氢醌;阴性对照组：A375细胞只加入相应溶媒,既不照射UVB,也不加入药物。分别培养,于24 h、48 h和72 h测定黑素含量及酪氨酸酶活性;于培养24 h, Western 印迹检测酪氨酸酶蛋白的变化,实时定量PCR法分别检测酪氨酸酶和Ｃu/Zn SOD在mRNA水平的变化。结果 UVB照射的A375细胞加入全反式维A酸后24 h、48 h、72 h黑素含量及酪氨酸酶活性均下降。UVB照射A375细胞后24 h酪氨酸酶蛋白及mRNA测定值分别为0.72 ± 0.070、1.400 ± 0.135,加入全反式维A酸24 h后酪氨酸酶蛋白及mRNA值分别为0.42 ± 0.056（P < 0.01）、0.810 ± 0.062（P < 0.01）;UVB照射A375细胞后24 h Cu/ZnSOD mRNA水平为0.323 ± 0.066,加入全反式维A酸后Cu/ZnSOD在mRNA水平增高为0.625 ± 0.103（P < 0.01）。结论 全反式维A酸能够通过酪氨酸酶途径抑制UVB辐射导致的A375细胞黑素含量增加,并可提高Cu/ZnSOD水平。     

转人溶菌酶基因小鼠乳腺生物反应器的建立

目的 研究人溶菌酶（human lysozyme，hLYZ）动物乳腺生物反应器制备的可行性。方法 将hLYZ基因与动物乳腺特异表达载体p205C3连接，所得重组载体p205C3-hLYZ用显微注射法建立转基因小鼠。结果 共出生了136只F0代小鼠，PER和Southern杂交检测基因整合阳性率分别为5．15％（2♀5♂）和2．94％（1♀3♂）。Western印迹检测结果表明，分泌在小鼠乳汁中的表达产物与正常hLYZ具有相同的分子量。目前转基因小鼠已经繁殖到B代，每一代基因整合阳性母鼠的乳腺均表达hLYZ，乳汁中的表达量最高达750mg/L。斑点杂交试验证明，表达有较强的组织特异性，除在乳腺表达外，仅在脾脏和小肠有一定的异位表达。结论 成功建立了hLYZ小鼠乳腺生物反应器。     

日本血吸虫虫源性抗原诱导效应性B细胞分化的研究

目的 目的 观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原 （SEA） 和可溶性成虫抗原 （SWAP） 诱导小鼠效应性B细胞分化情况。方 方 法 法 SEA、 SWAP和脂多糖 （LPS） 分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和脾脏CD19+ B细胞, 72 h后采用流式细胞术检测 CD19+ IL?6+ 及CD19+ IFN?γ+ 细胞比例; 用酶联免疫吸附试验 （ELISA） 检测抗原刺激后脾脏B细胞培养上清中IL?6和IFN?γ 水平。用SEA、 SWAP、 PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠, 每周1次, 共3次, 末次免疫后7 d取小鼠脾脏, 流式细胞 术检测CD19+ IL?6+ 及CD19+ IFN?γ+ 细胞比例, 用ELISA法检测培养上清中IL?6和IFN?γ水平。 结果 结果 SEA与LPS可以体 外诱导脾脏单个核细胞和脾脏B细胞分化为CD19+ IL?6+ B细胞 （F = 5.099, P < 0.05; F = 6.951, P < 0.05）, 并刺激脾脏B细 胞分泌IL?6 （F = 55.184, P < 0.01）; SEA免疫小鼠后, 可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IL?6 （F = 19.244, P < 0.01）, 并诱 导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL?6+ B细胞 （F = 14.904, P < 0.05）。SWAP可以体外诱导脾脏单个核细胞分化为 CD19+ IFN?γ+ B细胞 （F = 3.277, P < 0.05）, 但不能单独诱导脾脏B细胞分化为IFN?γ+ B细胞, 也不能刺激脾脏B细胞分泌 IFN?γ; SWAP免疫小鼠后, 可以在体内刺激小鼠脾脏B细胞分泌IFN?γ （F = 31.886, P < 0.01）, 并诱导其分化为CD19+ IFN? γ+ B细胞 （F = 49.873, P < 0.01）。 结论 结论 日本血吸虫SEA可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IL?6+ B细胞, 而 SWAP可以优势诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19+ IFN?γ+ B细胞, 但依赖于其他免疫细胞的参与。     

胃癌组织ＥＧＦＲ和ＣＯＸ-２的表达与幽门螺杆菌感染关系

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)、环氧化酶-2(COX-2)在胃癌组织中的表达及其相关性,并探究它们与幽门螺杆菌(H.pylori)感染的关系.方法:采用免疫组化EnVision两步法检测47例胃癌组织及相应的20例癌旁组织EGFR、COX-2的表达;用快速尿素酶诊断法和13C呼气试验两种方法检测胃癌患者H.pyliri感染状况.结果:胃癌组织中EGFR、COX-2的阳性表达率均明显高于癌旁组织(P＜0.01);EGFR、COX-2在胃癌中表达呈正相关(P＜0.05).有H.pylori感染的胃癌组织中EGFR、COX-2的阳性表达率较未感染的胃癌组织中高(P＜0.01).结论:EGFR、COX-2在胃癌组织中高表达且有相关性;H.pylori感染可能上调胃癌组织中EGFR、COX-2的表达.     

人工抗原提呈细胞体外激活肝癌CD8+T细胞

目的:探讨人工抗原提呈细胞(artificial antigen presenting cell,aAPC)K32/4-IBBL/CD86对肝癌CD8+T细胞的活化作用。方法:磁珠法分选HLA-A 2阳性肝癌患者外周血CD8+T细胞,aAPC与CD8+T细胞按不同比例(1∶1、1∶2、1∶3)混合培养,诱导CTL。锥虫蓝拒染法测定CTL的生长曲线,MTS/PMS法检测CTL的增殖,流式细胞术检测CTL分泌IFN-γ的能力,MTT法检测CTL对人肝癌细胞株BEL7402和自体肝癌细胞的杀伤作用。结果:肝癌患者外周血CD8+T细胞经aAPC作用后,增殖能力明显增强,按1∶1、1∶2、1∶3比例混合培养后第8天分别为(21.2±2.5)×105、(17.6±3.2)×105、(15.3±2.8)×105,明显高于对照组的(8.5±0.15)×105(P<0.01),混合培养后分泌IFN-γ的CTL比例分别为(26.2±1.91)%、(21.3±1.38)%、(18.6±1.20)%,明显高于对照组的(0.1±0.02)%(P<0.01)。aAPC活化的CTL对BEL7402细胞和自体肝癌细胞的杀伤率较对照组显著增强,按1∶3混合培养后得到的CTL对BEL7402细胞和自体肝癌细胞的杀伤率分别为(21.8±4.3)%和(25.6±3.6)%,明显高于对照组的(3.8±1.8)%和(3.8±2.0)%(P<0.01);效靶比为50∶1时,1∶1混合培养组CTL对BEL7402细胞的杀伤率(56.8±3.0)%和对自体肝癌细胞的杀伤率(64.8±4.2)%明显高于1∶2混合培养组的(44.3±2.6)%、(56.1±3.4)%和1∶3混合培养组的(38.9±4.7)%、(46.2±4.7)%(P<0.05)。结论:aAPC在体外可高效活化肝癌患者CD8+T细胞,诱导CTL分泌IFN-γ,且CTL对人肝癌细胞株BEL7402和自体肝癌细胞具有明显的杀伤作用。     

肉苁蓉多糖对衰老小鼠肺蛋白含量与抗氧化功能关系的影响

使用D 半乳糖造成小鼠实验性衰老模型 ,观察肉苁蓉多糖对实验性衰老小鼠肺胶原蛋白、弹性蛋白含量的影响 ,对肺组织和红细胞中超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)及丙二醛 (MDA)含量的影响。结果　灌服肉苁蓉多糖的衰老小鼠的肺组织及红细胞中SOD、GSH Px活力不同程度提高 ,肺及血浆中丙二醛含量有所降低。同时肺胶原蛋白含量减少 ,弹性蛋白含量增多。结论　肉苁蓉多糖具有抗氧化性损伤和抗肺衰老的作用     

Nutlin-3对人A375黑素瘤细胞生物学行为的影响及可能机制

目的 观察顺式咪唑啉衍生物nutlin-3对人A375黑素瘤细胞生物学行为的影响,研究其机制。 方法 将A375细胞分为实验组和对照组,实验组细胞接受2.5、5、10 μmol/L nutlin-3处理,对照组细胞采用二甲基亚砜处理。分别于作用24、48、72 h后,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖情况;Western印迹检测p53蛋白表达的改变;流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞凋亡;Transwell法检测迁移性变化。采用重复测量的方差分析进行统计学检验。 结果 2.5、5、10 μmol/L nutlin-3处理A375细胞24、48、72 h后,MTT法显示不同时间点间的增殖抑制率差异有统计学意义（F = 67.43,P < 0.01）,不同浓度间的抑制率差异有统计学意义（F = 135.58,P < 0.01）,浓度越高抑制率越高;时间和浓度之间有交互作用（F = 26.95,P < 0.01）。Western印迹 、流式细胞仪、Transwell法检测显示,不同时间点之间A375细胞的p53表达、G2期细胞百分率、凋亡率、迁移抑制率差异均有统计学意义（F值分别为1255.00、831.38、809.45、1100.00,均P < 0.01）,除p53外,时间越长各项指标值越高;不同浓度间各项指标值差异均有统计学意义（F值分别为9196.00、267.99、723.83、1667.00,均P < 0.01）,浓度越高各项指标值越高;时间与浓度之间交互作用有统计学意义（F值分别为826.79、21.602、44.48、313.09,均P < 0.01）。 结论 nutlin-3可能通过p53蛋白积累途径抑制人A375细胞的增殖和迁移,促进细胞周期停滞和细胞凋亡。