线粒体靶向过表达ECSIT转基因小鼠的构建与鉴定

目的：构建线粒体靶向过表达ECSIT转基因小鼠,并对其进行鉴定和心功能分析,建立ECSIT基因相关功能研究模型动物。方法：构建过表达打靶载体pCAG?OTCL?ECSIT?3Xflag?BPA,采用电转导方法将线性化打靶载体转入胚胎干细胞（ES细胞）;将含有过表达载体的ES细胞进行囊胚腔注射,并将嵌合囊胚移植至代孕小鼠体内,繁殖嵌合体小鼠。嵌合体小鼠和 C57BL/6J 鼠交配繁殖出杂合子,PCR 筛选阳性过表达小鼠。采用小动物超声分析线粒体靶向过表达ECSIT小鼠的心功能。结果：成功构建了线粒体靶向过表达ECSIT载体pCAG?OTCL?ECSIT?3Xflag?BPA,经PCR鉴定为阳性;完成线粒体靶向过表达ECSIT基因打靶及囊胚注射,经PCR鉴定为阳性;分别提取转基因小鼠心肌组织线粒体和胞浆蛋白,检测发现线粒体特异性过表达ECSIT。8周龄转基因小鼠心功能与同龄野生型小鼠无明显差异。结论：成功构建出线粒体靶向过表达ECSIT小鼠;线粒体过表达ECSIT对8周龄小鼠心功能无明显影响。     

成年小鼠ECSIT 3′⁃UTR的鉴定及功能分析

目的：鉴定成年小鼠Toll途径进化保守信号介导因子（evolutionarily conserved signaling intermediate in Toll pathways,ECSIT）的3′非翻译区（3′?untranslated region,3′?UTR）序列,并在细胞中验证非编码RNA对ECSIT表达的影响。方法：采用RACE技术克隆得到小鼠ECSIT 3′?UTR序列,并与基因组数据库进行比对;预测ECSIT 3′?UTR可能结合的微小RNA（microRNA,miRNA）,并针对ECSIT的全长序列设计小干扰RNA（siRNA）;通过Western blot分别检测使用不同miRNA和siRNA干扰后,细胞中ECSIT的表达。结果：成功鉴定了346 bp的小鼠ECSIT 3′?UTR,与NCBI上序列一致率达到99%;在细胞中miR?7?5p和siRNA1、2可以干扰ECSIT的表达。结论：成功鉴定得到成年小鼠心脏ECSIT mRNA 3′?UTR序列,该非编码区可作为非编码RNA的调控区域,为进一步从分子水平探明ECSIT在小鼠生长发育及疾病中的作用提供科学依据。     

气体信号分子与动脉粥样硬化

气体信号分子是一类相对分子质量小、可自由穿过生物膜、跨细胞或细胞器运输不完全依赖膜受体或转运体的内源性信号转导物质。气体信号分子发挥效应多样、作用机制复杂，针对其研究一直是领域热点。文章将重点论述一氧化氮、一氧化碳和硫化氢三种气体信号分子在动脉粥样硬化中的作用及分子机制。     

猪naive⁃like胚胎干细胞向神经细胞体外诱导分化

目的：明确不同时期胎猪的肾脏发育情况,并研究胎猪肾脏发育相关信号分子的表达。方法：收集不同时期（妊娠21.5、27.5、35.0、45.0、75.0及110.0 d）胎猪肾脏组织,应用HE法观察不同时期胎猪肾脏的组织结构。通过实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肾脏发育相关信号分子（Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4）的mRNA和蛋白表达水平,并通过免疫组织化学检测Pax2在不同时期胎猪肾脏的表达定位情况。结果：27.5 d胎猪的后肾已经开始发育;35 d早期肾小体已经出现,肾小管也开始发育;45 d观察到近皮质不成熟的肾小体和近髓质成熟的肾小体;75 d肾单位数目显著增加,观察到肾椎体、肾乳头和肾盂;110 d肾脏基本发育成熟,皮髓质分界明显,仍有新的肾单位产生。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4在胎猪75 d的肾脏中mRNA和蛋白表达量高于35 d。Pax2广泛表达于输尿管芽、后肾间充质、帽状间充质、肾小囊体、逗号形体、S形体以及肾小管,并在后肾发育过程中持续表达。结论：27.5 d时胎猪后肾已经开始发育,110 d基本发育成熟。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4等信号分子在胎猪肾脏发育过程中均有不同程度表达,其中Pax2可能是胎猪肾脏发育的关键调控分子。