23-plex Y-SNPs复合扩增体系在法医学应用的研究

 【目的】 应用SNaPshot技术建立23-plex Y-SNPs的复合扩增体系,研究其在法医学中的应用价值?【方法】 从Y染色体单体群命名树上选择23个Y-SNP位点:P164,P203,P148,P145、M89、P151、M216、P120,P157,P149,P131,P199,P123,P191,P201,M111,M9,P132,P200,P197,M119,P136和M134,进行复合PCR扩增,PCR产物纯化后利用荧光标记单碱基延伸技术(SNaPshot试剂盒)结合毛细管电泳技术对单核苷酸多态性进行检测,应用该体系调查了290名广东地区无亲缘关系的男性个体.【结果】 所建立的23个Y-SNPs检测体系,各位点均具有遗传多态性,基因多样性范围为0.013 7 ~ 0.491 2?在290名男性中检测到143个单体型,单体型多样性为0.990 7.【结论】 该23个Y-SNPs检测体系能快速而准确的对样本进行SNP分型,在法医学?人类学和相关学科的研究中具有较高的应用价值.     

病毒性心肌炎差异表达蛋白MYL4的筛选鉴定及表达研究

目的:调查心肌肌球蛋白轻链4(myosin light polypeptide 4,MYL4)在病毒性心肌炎损伤中的作用?方法:随机将Balb/c小鼠分为实验组(n = 30)和对照组(n = 10),实验组用于建立柯萨奇病毒B3病毒性心肌炎小鼠模型,分别在病毒感染后第3?7?14天留取心脏及血清标本?利用差异蛋白质组学的方法鉴定了部分的病毒性心肌炎差异表达蛋白,并对其中一个分子MYL4在病毒性心肌炎发病中的作用进行研究?结果:质谱鉴定6个差异表达分子分别为:MYL4?热休克蛋白B1?异柠檬酸脱氢酶a亚单位?电压依赖的阴离子通道蛋白?蛋白酶体a亚单位1型和巨噬细胞封端蛋白?Western blot及ELISA验证发现MYL4在病毒性心肌炎小鼠心脏组织及血清中表达明显升高(P < 0.01),且ELISA结果显示MYL4的表达与疾病严重程度呈正相关(r = 0.97,P < 0.00)?结论:MYL4在病毒性心肌炎组织及血清中表达升高,参与了病毒性心肌炎的发生发展?     

海洛因成瘾和正常大鼠前额叶皮质差异蛋白的分离与鉴定

目的 建立和比较海洛因成瘾与正常大鼠前额叶皮质(PFC)蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定海洛因成瘾大鼠PFC中的差异蛋白表达谱.方法 以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和海洛因成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离,2-D图谱经ImageMaster 2D 5.0软件分析,选取7个差异蛋白点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱/串联质谱进行鉴定.结果 经肽指纹图谱和串联质谱分析,并在NCBInr数据库检索,选取的7个蛋白点被成功鉴定为5种蛋白:成瘾组特有的是葡萄糖调节蛋白58和26 s蛋白酶复合体亚基p40.5;成瘾组含量下调的蛋白是ATP合酶D链;Ndufa10和α-烯醇化酶在两组中发生相对分子质量和(或)等电点迁移.结论 双向电泳结合质谱分析初步鉴定了大鼠前额叶皮质中与海洛因成瘾和神经毒性相关的差异蛋白,为进一步深入研究其病理机制奠定了基础.     

力竭性运动对病毒性心肌炎小鼠心脏功能及结构的影响

目的 探讨力竭性运动对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心脏功能和结构的影响.方法 采用CVB3病毒感染Balb/c小鼠复制小鼠模型,剧烈过量运动前后定时检测小鼠心电图,观察小鼠12 h内的死亡率和14 d的总死亡率,计算PR间期变化、心率变化率,普通光镜及电镜观察心肌结构的改变.结果 力竭性运动可导致病毒性心肌炎小鼠在运动后12 h内和14 d的死亡率明显上升,运动前后心率变化、PR间期等指标在病毒性心肌炎组与正常对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);虽然光镜下没有明显差异,但电镜观察发现,力竭性运动导致了病毒性心肌炎小鼠心肌超微结构异常改变.结论 力竭性运动可导致病毒性心肌炎小鼠心脏结构异常和功能衰减,是导致心脏性猝死的独立危险因素.     

2007-2013年东莞市不明原因夜间睡眠猝死综合征的流行病学特征分析

目的研究近年来东莞市不明原因夜间睡眠猝死综合征(SUNDS)的流行病学特征,探寻有关的病因学线索。方法收集东莞市2007-2013年SUNDS死亡病例,并在资料库中按年龄、性别和死亡时间相接近、1∶1匹配死因明确者作为对照组,同时对两组病例按年龄、性别、籍贯、死亡月份、死亡时刻及职业划分亚组,对病例资料数据进行统计分析,研究该病的流行病学特征。结果 2007-2013年东莞市SUNDS死亡病例共计565例;男女性别比为14.7:1;2007-2013年各年发病率分别为0.68/10万、0.79/10万、0.60/10万、1.24/10万、1.20/10万、1.65/10万、0.93/10万;年龄分布在17~55岁,中位年龄为35岁,与全死因组年龄分布差异有统计学意义;发病例数最高峰出现在3-6月份,最低在10-12月份,与当地全年月平均气温变化趋势存在相关性;死亡高峰时段为凌晨0-1点,例数较最低时段(凌晨3-4点)高出20多倍;病例籍贯来源最多为湖南省(93例),有发病"聚集性"的是云南省(病例组/对照组4.25倍)、香港(3.67倍)及海南(2倍);SUNDS病例主要发生于劳动强度大、文化程度低的工厂一线工人、保安、清洁员等人群中。结论近年来东莞市SUNDS的年均发病率未见下降,提示发病的高危因素依然存在,须作进一步流行病学调查查明高危因素。     

可卡因滥用所致的心血管系统病理损害

目前通常认为可卡因滥用所致的死亡是由于单次大剂量使用引起的，事实上除了少数是药物过量而引起急性中毒外，多数可卡因引起的死亡和可卡因在血液中的浓度水平并不紧密相关。长期应用可卡因，使机体在分子、细胞和组织水平发生一系列的改变，而这些改变可导致猝死。其中，可卡因导致心血管系统的损害是十分重要的因素。可卡因引起心脏的改变包括冠状动脉硬化、痉挛、动脉夹层，心肌肥大、坏死等病变。本文对近年来此领域的研究进展做一综述。     

中国广东汉族与新疆维吾尔族24个Y-STR基因座的多态性分析

目的应用GFS 24Y试剂盒,对中国广东汉族和新疆维吾尔族共584个无关男性样本进行24个Y-STR基因座分型,统计其基因座、单倍型的遗传多态性,并分析其群体差异。方法采用磁珠法提取样本DNA后用GFS24Y试剂盒扩增,3130XL遗传分析仪进行基因分型,根据分型结果进行统计分析。结果获得了中国广东汉族与新疆维吾尔族共584个样本24个Y-STR基因座的分型结果及各等位基因频率分布资料。在广东汉族群体中,各基因座的基因多样性(GD值)为0.560 6~0.963 9,由24个基因座组成的单倍型共有299个,单倍型多样性(HD值)为0.999 93;在新疆维吾尔族中,GD值为0.443 9~0.957 9,共观察到282个单倍型,HD值为0.999 85。两个民族未观察到共有单倍型。通过两个群体间的比较,共有22个Y-STR基因座等位基因频率分布在两个民族之间存在差异(P0.05),各基因座在两个民族的遗传分化系数(Fst值)为0.000 767 9(DYS481)~0.247 946(DYS520)。结论 24个Y-STR基因座在中国广东汉族与新疆维吾尔族人群中均有较高的多态性,并显示出明显的民族特征,在法医亲权鉴定和个体识别、群体遗传学等领域均有重要的应用价值。     

106例中国人vWA位点的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色技术，检测了人类血管性假血友病因子（ｖＷＦ）基因内含子４０中的ｖＷＡ位点等位基因及其无亲缘关系的随机个体频率。调查了１０６例中国人无关个体，发现该位点有８个等位基因，其大小为１３８－１６６ｂｐ，１８种基因型，符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律。１０个２代家系和１个４代家系调查结果表明ｖＷＡ位点的遗传符合孟德尔定律。此位点的杂合度为０．７８７，多态信息含量（ＰＩＣ）为０．７７２，具有高度遗传多态性。实验结果表明，该位点能较好地解决法医学上因生物检材量少和ＤＮＡ降解等难以进行鉴定的疑难问题，在法医学应用上具有重要价值。     

19个X-STR荧光复合扩增体系的法医学应用评估

目的 评估含有19 个X染色体-短串联重复序列（X-STR）的复合扩增体系在法医学中的应用效果。方法 参照DNA分析方法科学工作组（SWGDAM）的验证指南,评估了含有19 个X-STR的复合扩增体系的种属特异性、灵敏度、抗抑制剂、精确性、可重复性、一致性、在混合样本与陈旧样本中的检测效果及Stutter峰和群体多态性。结果 DNA 模板量在0.25~1.00 ng 时,各基因座分型结果清晰准确,均衡性好、特异性强,混合、陈旧样本均能获得正确的分型结果;检测中国南方汉族共196份无关个体血样,19个X-STR遗传标记共检出151个等位基因,基因频率为0.0037 ~ 0.8439,其中多态性信息量最为丰富的基因座是DXS10135（多肽性信息含量= 0.9173）,个体识别能力在男、女性群体中分别为0.9124、0.9894;累积个体识别能力在男性群体中大于0.999 999 999 874,在女性群体中大于0.999 999 999 999;在三联体案件中的累积平均排除概率大于0.999 999 999 298,在二联体中的累积平均排除概率大于0.999 999 500 495。结论 含有19 个X-STR的复合扩增体系分型准确、稳定,满足法医学实践的要求,获得的基因频率等参数可为X-STR检验提供数据支撑。     

可卡因滥用所致的心血管系统病理损害

目前通常认为可卡因滥用所致的死亡是由于单次大剂量使用引起的,事实上除了少数是药物过量而引起急性中毒外,多数可卡因引起的死亡和可卡因在血液中的浓度水平并不紧密相关.长期应用可卡因,使机体在分子、细胞和组织水平发生一系列的改变,而这些改变可导致猝死.其中,可卡因导致心血管系统的损害是十分重要的因素.可卡因引起心脏的改变包括冠状动脉硬化、痉挛、动脉夹层,心肌肥大、坏死等病变.本文对近年来此领域的研究进展做一综述.