以ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体

目的：构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体，以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。 方法：实验于2002．08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中，构建供载体pUni／Lox-HGH。②让该供载体与具Lox位点的受载体在Cre重组酶的作用下融合，构建出人生长激素的哺乳动物表达载体pcDNA4．1／pUni-HGH，使人生长激素基因处于CMV启动子的调控下，EcoRl单酶切及BarnHI／EcoRI双酶切鉴定重组质粒。 结果：由琼脂糖凝胶电泳和序列测定证实，用ECHO克隆系统构建的融合质粒中，确实含有人生长激素带内含子的基因序列。 结论：用ECHO克隆系统可以构建人生长激素的哺乳动物表达载体，且方便、快捷，为取代原核生物表达系统生产人生长激素，提供了依据。     

雷帕霉素诱导细胞自噬在衰老相关疾病中的作用

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)是衰老和衰老相关疾病的一个关键调节因子。雷帕霉素(rapamycin,RAPA)可通过抑制m TOR通路,诱导和促进细胞自噬的发生。细胞自噬是维持细胞内稳态的主要方式与途径,通过降解多余的、受损的及衰老的蛋白与细胞器,为细胞重建、再生和修复提供必需原料。早老症(hutchinson-gilford progeria syndrome,HGPS)患者细胞中伴随早老蛋白(progerin)的异常聚集;此外,诸如亨廷顿病、帕金森病、阿尔茨海默病等神经退行性疾病细胞内同样出现异常蛋白质的聚集,而这些异常蛋白的清除正依赖于细胞的自噬作用。由此可见,雷帕霉素是潜在的抗衰老、治疗早老症及衰老相关疾病的重要药物。该文主要阐述雷帕霉素促进细胞自噬方面的功能及在HGPS、神经退行性疾病方面的应用。     

Egb 761对NO供体SNP诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的　探讨银杏叶提取物 (EGb761 )对 NO供体硝普钠 (SNP)引起的大鼠海马神经元凋亡的影响。方法　采用 MTT比色分析测细胞存活率、 Hoechst 332 58荧光染色及 DNA琼脂糖凝胶电泳分析等方法检测凋亡。结果　不同剂量 EGb 761预处理海马神经元 6 h可剂量依赖地对抗 SNP引起的神经元凋亡 ,提高神经元的存活率 ;减少 SNP引起的核固缩、凝聚和碎裂现象 ;DNA凝胶电泳图谱未见典型的“梯子状”改变。结论　 EGb 761对 NO供体 SNP诱导的海马神经元凋亡具有明显的保护作用     

血管内皮生长因子及其受体与肿瘤

血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (VEGFR)在肿瘤的生长和转移中起着重要的调节作用 ,已越来越成为人们研究的热点。本文就VEGF和VEGFR家族成员、它们与肿瘤生长转移的关系以及VEGF和VEGFR与肿瘤治疗作一综述     

两种双壳贝提取物抗疲劳作用比较

目的：通过观察扇贝提取物与翡翠贻贝提取物喂养的实验小鼠的负重游泳时间、血尿素氮水平和肝糖原含量。比较两种贝类提取物对小鼠的抗疲劳作用。方法：实验于2005—02／06在广东医学院实验动物中心和生物化学与分子生物学研究所完成。①选用SPF级昆明种雄性小鼠240只。实验用扇贝和翡翠贻贝均为市售，两种贝类经提取，过柱，浓缩及干燥得到浅黄色粉末。两种提取物经急性毒性实验证明安全无毒。②小鼠负重游泳试验：选用小鼠80只，随机分为2组：扇贝提取物组和翡翠贻贝提取物组，每组40只；每个处理组再随机分为4个亚组：10，20和40g／L扇贝提取物和翡翠贻贝提取物组（分别给予10。20和40g/L扇贝提取物和翡翠贻贝提取物水溶液自由喂养），对照组用白开水作为饮水自由喂养。喂养30d后。鼠尾根部负荷5％体质量的铅丝，置小鼠在游泳池中游泳，水温（25&;#177;1）℃。记录小鼠自游泳开始至沉入水中的时间，作为小鼠负重游泳时间。③小鼠血尿紊测定：动物分组同前，处死小鼠后，采用二乙酰一肟显色法测定小鼠血尿素水平。④小鼠肝糖原测定：动物分组同前，处死小鼠后，采用氧化酶法测定小鼠肝糖原含量。⑤计量资料差异比较采用t检验，方差不齐时采用t’检验。结果：小鼠240只均进入结果分析。①扇贝提取物20和40g／L组小鼠负重游泳时间明显长于对照组（P〈0．05，0．01）。翡翠贻见提取物20和40g/L组小鼠负重游泳时间明显长于对照组（P〈0．05，0．01）。扇贝提取物40g／L组小鼠负重游泳时间明显长于翡翠贻贝提取物40g／L组（P〈0．05）。②扇贝提取物40g/L组和翡翠贻贝提取物20g／L组小鼠血尿素氮水平明显低于对照组（P〈0．05）。扇贝提取物40∥L组小鼠血尿素氨水平明显低于翡翠贻贝提取物40g／L组（P〈0．05）。③20和40g／L扇贝取物及翡翠贻贝提取物组小鼠肝糖原含量明显高于对照组（P〈0．05）。同样质量浓度的扇贝提取物与翡翠贻贝提取物组小鼠肝糖原含量比较，差异不明显（P〉0．05）。结论：扇贝提取物和翡翠贻贝提取物均对小鼠有抗疲劳作用，且扇贝提取物对小鼠的抗疲劳作用稍优于翡翠贻贝提取物。     

以ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体

目的:构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体,以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。方法:实验于2002-08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中,构建供载体pUni/Lox-HGH。②让该供载体与具Lox位点的受载体在Cre重组酶的作用下融合,构建出人生长激素的哺乳动物表达载体pcDNA4.1/pUni-HGH,使人生长激素基因处于CMV启动子的调控下,EcoRI单酶切及BamHI/EcoRI双酶切鉴定重组质粒。结果:由琼脂糖凝胶电泳和序列测定证实,用ECHO克隆系统构建的融合质粒中,确实含有人生长激素带内含子的基因序列。结论:用ECHO克隆系统可以构建人生长激素的哺乳动物表达载体,且方便、快捷,为取代原核生物表达系统生产人生长激素,提供了依据。     

雷帕霉素靶蛋白在酵母寿命中的作用机制研究进展

酵母作为经典的模式生物,既具有原核生物生长快、基因操作简便的特点,又具有真核生物翻译后加工修饰功能的特点,已作为衰老研究及寿命相关基因鉴定的理想研究模型.营养反应激酶雷帕霉素靶蛋白(TOR,target ofrapam-ycin),在进化上高度保守,可通过调节细胞应激反应、自噬作用、代谢和核糖体生成及控制氮源碳源的代谢等生物过程影响细胞生命周期.近年来研究表明TOR与衰老进程关系密切,因此本文拟就TOR蛋白在酵母寿命研究中的最新进展进行综述,以期为高等生物衰老的研究提供线索.     

利用 RNAi阻抑 hTERT 和Bi-1双基因表达的RNAi作用效果的研究

目的：利用LipofectamineTM2000将针对靶向人类端粒酶末端逆转录酶（hTERT）和Bax inhibitor‐1（Bi‐1）基因设计并构建的质粒载体转染至CNE‐2Z鼻咽癌细胞内,诱导序列特异性的基因沉默,研究其产生的shRNA阻抑hTERT 和Bi‐1基因表达的效果。方法收集CNE‐2Z细胞,设未处理组、pEGFP‐N1组、pEGFP‐N1／Lip组,采用流式细胞术检测Lip对CNE‐2Z细胞的转染能力,RT‐PCR和Western blot法分析表达shRNA重组质粒载体对hTERT和Bi‐1基因mRNA表达的抑制效应。结果转染CNE‐2Z细胞的质粒和Lip最佳组合：质粒为2．5μg ,Lip为6．25μL。结论成功构建的针对人hTERT和Bi‐1基因的shRNA真核表达质粒能特异、有效地阻抑hTERT和Bi‐1基因的表达。     

曲列格酮对Hep G2肝癌细胞增殖、COX-2表达和前列腺素E2水平的影响

目的　探讨曲列格酮 (TGZ)对HepG2肝癌细胞增殖的影响。方法　TGZ处理HepG2细胞后 ,用MTT、[3 H]-胸苷摄入、Northern杂交、RT -PCR、Western印迹等方法分别测定细胞增殖、COX - 2表达及PGE2水平。结果　TGZ以剂量依赖方式抑制细胞增殖 ,并下凋COX - 2表达及抑制PGE2产生。结论　TGZ抑制HepG2肝癌细胞增殖 ,这种抑制作用可能与COX - 2表达减少有关。