免疫球蛋白降解酶IdeS在大肠杆菌中的表达、纯化及功能鉴定

病原链球菌为逃避宿主的免疫反应,分泌一种可特异地裂解免疫球蛋白G的降解酶(immunoglobulin G-degrading enzyme of Streptococcus pyogenes, IdeS)。IdeS既可作为工具酶用于IgG的指纹分析,又可用于治疗与自身免疫反应相关的疾病。本研究基于质粒pCold构建了两种重组IdeS的表达载体,并在大肠杆菌Shuffle T7中进行异源表达,经亲和色谱纯化后检测其蛋白活性。结果表明N-端含有His6-标签的重组IdeS产量为4 mg·L^-1,其与抗体IgG1以1∶200 (m/m)在37℃反应30 min即可完全酶解。而N-端含有His6-标签且C-端含有硅胶亲和标签(SiBP)的重组IdeS产量为1.5 mg·L^-1,其与抗体IgG1以1∶20 (m/m)在37℃反应30 min才可反应完全。C-端融合肽对于IdeS产量与活性都有较大的影响,使其活性降低,不利于后续应用于药物研发。上述结果表明,本系统所表达的N-端含有His6-标签的IdeS重组蛋白具有较高的活性,完全能满足抗体类药物研发...     

铁代谢及其在心力衰竭治疗中的作用机制研究进展

心力衰竭(heart failure, HF)进展过程复杂,涉及多种信号通路的调控异常。其中,铁离子作为血红蛋白、肌红蛋白、氧化呼吸链及DNA合成酶等重要蛋白的辅因子,在心肌能量代谢过程中发挥着不可或缺的功能。近年来,大量研究表明心力衰竭与铁代谢紊乱相关,缺铁和铁过载均可导致多种心肌病的发病,最终进展为心力衰竭,铁代谢可能是心力衰竭诊断、预防和治疗的关键靶点。本文就机体铁代谢的基本过程及其在心力衰竭中的作用机制进行综述,以期为心力衰竭的治疗提供新的线索和依据。     

神经血管单元结构和功能及其在脑缺血损伤发生机制中的作用

近年来,从神经血管单元（NVU）这一整体性结构及其功能出发开展脑缺血发病机制的研究越来越受到人们的重视,NVU已经成为脑科学和脑重大疾病研究领域的热点之一。NVU主要组成细胞有神经元、星形胶质细胞、小胶质细胞和脑微血管内皮细胞等,它们在结构上密切相关,在功能上共同维持脑稳态,在脑功能和脑缺血损伤中发挥重要作用。NVU损伤导致微血管及血脑屏障完整性受损、神经元细胞死亡、神经胶质反应、免疫细胞浸润,甚至组织损伤和脑水肿。本文以期阐明NVU的结构和功能及其在脑缺血损伤发生机制中的作用,为开展基于NVU结构和功能的脑缺血疾病防治药物研究提供新思路和新策略。     

脉抒对高脂血症金黄地鼠血脂及血管内皮功能的影响

目的:观察脉抒(Mai Shu,MS)对高脂血症金黄地鼠血脂和血管内皮功能的影响。方法:以高脂膳食诱导高脂血症金黄地鼠模型,给予不同剂量脉抒(低剂量:1 g/kg/d、中剂量:2 g/kg/d、高剂量:4 g/kg/d),观察给药2、4、8周后血清总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、三酰甘油(Triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(High Density Lipoprotein Cholesterol,HDLC)、非高密度脂蛋白胆固醇(non-high Density Lipoprotein Cholesterol,non-HDL-C)的变化;采用快速蛋白液相色谱(Fast Protein Liquid Chromatography,FPLC)技术分离给药8周后血清中极低密度脂蛋白(Very Low Density Lipoprotein,VLDL)、低密度脂蛋白(Low Density Lipoprotein,LDL)、高密度脂蛋白(High Density Lipoprotein,HDL),并检测其所含的总TC含量;测定肝脏TC、TG含量,计算肝指数;采用全自动血液黏度仪检测8周后全血血黏度值;采用离体微血管压力直径灌流系统观察各组金黄地鼠肠系膜小动脉对不同浓度梯度乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)诱导的内皮依赖性舒张反应的变化,评价脉抒对血管内皮功能的影响。结果:脉抒高、中剂量在2、4、8周均能明显降低高脂血症金黄地鼠血清TC含量(P0.01、P0.01、P0.05;P0.01、P0.01、P0.01),还可以显著降低血清VLDL、LDL、HDL所携带的胆固醇水平(P0.05,P0.01),并且能够降低地鼠肝组织TC(P0.01,P0.05)、TG的含量(P0.01,P0.05),抑制肝指数(P0.01,P0.05),改善中切(P0.01,P0.05)和高切(P0.05,P0.05)全血黏度,脉抒中剂量还可以改善高脂血症金黄地鼠的血管内皮舒张功能。结论:脉抒具有改善高脂血症金黄地鼠血脂、全血黏度和血管内皮舒张功能的作用。     

基于外泌蛋白质组的酿酒酵母信号肽元件的分析及鉴定

目的分析鉴定酿酒酵母细胞内源性地促进重组蛋白外泌表达的信号肽元件,并应用于重组蛋白的高效合成。方法利用生物信息学软件SignalP4.1、Phobius、Wolf Psort0.2和ProP1.0对已报道的酿酒酵母外泌蛋白质组所对应的信号肽进行计算分析,确定目标信号肽功能元件;再构建融合表达载体,转化酵母细胞,对获得的阳性克隆在摇瓶培养条件下外泌蛋白的表达进行测定验证。结果通过生物信息学分析,从酿酒酵母外泌蛋白质组中确定了16个含有prepro区的信号肽功能元件,以敲除外切β-(1,3)-葡聚糖酶1(EXG1)基因的酿酒酵母W303-1b/(35)ES为宿主菌,采用酵母α-交配因子的信号肽功能元件作为对照,由EXG1的信号肽功能元件引导外泌的融合蛋白活性是α-交配因子的3倍。结论组合外泌蛋白质组和生物信息学分析的研究策略可以快速准确地分离鉴定促进异源蛋白分泌表达的信号肽功能元件,可应用于生物活性蛋白的高效表达。     

小檗碱对肠道菌的抑制作用

目的测定小檗碱对肠道菌的抑制作用。方法选取24株需氧、厌氧肠道菌,利用试管倍比稀释法,测定小檗碱对各种肠道菌的MIC值;再选取有代表意义的4种肠道菌,分别检测小檗碱对4种肠道菌生长曲线的影响。结果小檗碱对24株肠道菌均表现出不同程度的抑制作用,大部分抑制较弱(最低MIC为64μg/ml)。其中,小檗碱对能够引起肠道感染的痢疾志贺菌、弗氏志贺菌的抑制作用相对较强,对其他正常菌抑制较弱。生长曲线的测定表明,小檗碱对4种有代表意义的肠道菌在对数生长期和稳定期均有明显的抑制作用,且随着小檗碱浓度的增高,抑制作用增强。结论小檗碱治疗胃肠道感染,在一定程度上依赖于小檗碱对致病性肠道菌的抑制作用以及小檗碱对肠道菌群的调节。     

宁夏枸杞子化学成分的研究

目的研究枸杞子的化学成分。方法利用硅胶柱层析、氧化镁柱层析、Sephadex LH-20凝胶和高效液相色谱法对其化学成分进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据分析鉴定化合物结构。结果从枸杞子中分离得到8个化合物,鉴定了8个化合物,分别为：烟酸（1）,棕榈酸（2）,正二十烷酸（3）,麦角甾醇（4）,β-胡萝卜素（5）,玉米黄素双棕榈酸酯（6）,β-谷甾醇（7）,甜菜碱（8）。结论化合物正二十烷酸（3）为首次从该植物中得到。     

小果博落回的化学成分及苯菲啶生物碱的xbp1转录激活作用评价

采用溶剂提取、萃取粗分离和硅胶柱色谱纯化等天然药物化学研究手段,从罂粟科植物小果博落回的根中除得到部分已报道的苯菲啶型生物碱外,又进一步分离得到8个化合物。通过深入的波谱分析并参考文献数据鉴定其结构分别为1-氧代-2,22(30)-何帕二烯-29-羧酸(1)、3-氧代-12-齐墩果烯-30-羧酸(2)、3α-羟基-12-齐墩果烯-30-羧酸(3)、3β-羟基-12-齐墩果烯-30-羧酸(4)、阿魏酸(5)、阿魏酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(6)、3-O-阿魏酰奎尼酸(7)和3-O-阿魏酰奎尼酸甲酯(8)。其中1为新的何帕烷型三萜类化合物,2~8为首次从该植物中分离得到的化合物。为寻找具有潜在抗溃疡性结肠炎活性的天然药物活性物质,本文采用特异的体外靶向xbp1高通量双荧光素酶报告基因药物筛选模型,对小果博落回所含主要成分进行了xbp1转录激活作用评价。实验结果首次阐明了二氢型苯菲啶生物碱类化合物,即二氢血根碱(9)和二氢白屈菜红碱(10),具有一定的xbp1转录激活作用,其作用强度分别为空载体对照组的1.76倍和1.77倍。     

法尼醇X受体与糖脂代谢

法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)属于核受体超家族,研究证明FXR可调控多种代谢通路,除在胆汁酸代谢中发挥重要作用外,FXR激活后参与维持机体糖脂代谢稳态。随着糖脂代谢异常相关疾病发病率的升高,FXR对糖脂代谢的调节越来越引起研究者的重视。FXR激动剂可能成为治疗2型糖尿病和脂代谢紊乱等代谢性疾病的新型药物靶点。     

α-突触核蛋白与Cu~(2+)相互作用的研究进展

帕金森病是一种慢性中枢神经系统退行性疾病,其主要的病理特征是黑质致密部多巴胺能神经元丢失,残存神经元胞质中出现路易小体,其主要成分是异常聚集的α-synuclein蛋白(α-突触核蛋白)。α-synuclein的聚集与多种因素有关,其中金属离子与α-synuclein结合可导致蛋白构象发生变化引起蛋白发生聚集。近年的研究发现,Cu2+能够特异地结合α-synuclein蛋白,并诱导α-synuclein的聚集。该文就Cu2+与α-synuclein相互作用的的结合位点、结合模式以及Cu2+在α-synuclein毒性形式中可能发挥的作用作一综述。