联合应用MS⁃275和MDV3100对前列腺肿瘤干细胞样微球的作用

目的：探讨雄激素受体（androgen receptor,AR）拮抗剂和组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）抑制剂对前列腺肿瘤干细胞样微球的作用,并探讨其可能的分子机制。方法：采用无血清悬浮培养前列腺LNCaP和22RV1肿瘤细胞以获取干细胞样肿瘤微球细胞,然后单独和联合使用AR拮抗剂MDV3100和HDACⅠ类抑制剂MS?275分别处理2种微球细胞,镜下观察细胞形态,评估其克隆形成能力。应用实时荧光定量聚合酶链反应检测微球细胞中CD133的转录水平,Western blot检测DNA损伤标志物磷酸化H2A.X（p?H2A.X）的表达和细胞凋亡标志蛋白聚ADP?核糖聚合酶（PARP）特异性裂解片段的水平,同时检测Wnt信号通路关键分子β?catenin以及原癌基因c?Myc、cyclin D1蛋白表达情况。结果：MDV3100单独处理能明显降低肿瘤干细胞标志物CD133的表达;而MS?275单独或联合MDV3100处理均能明显抑制肿瘤干细胞样肿瘤微球的形成、降低肿瘤微球细胞CD133的表达,并促进肿瘤微球细胞产生PARP的特异性裂解,使p?H2A.X表达水平升高,同时可以明显降低β?catenin、c?Myc及cyclin D1的表达。结论：联合应用MS?275和MDV3100可以显著增强MDV3100的抗肿瘤活性,具体表现在抑制肿瘤干细胞样微球细胞生成及克隆形成、损伤细胞的DNA、诱导细胞凋亡等。该结果为临床联合应用HDACⅠ类抑制剂MS?275和AR拮抗剂MDV3100治疗前列腺肿瘤提供了一定的实验依据。     

联合应用MS-275和MDV3100对前列腺肿瘤干细胞样微球作用的研究

目的：本研究旨在探讨雄激素受体(androgen receptor, AR)拮抗剂和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)抑制剂对前列腺肿瘤干细胞样微球的作用,并探讨其可能的分子机制?方法：采用无血清悬浮培养前列腺LNCaP和22RV1肿瘤细胞以活期干细胞样肿瘤微球细胞,然后单独和联合使用AR拮抗剂MDV3100和HDAC I类抑制剂MS-275分别处理两种微球细胞,镜下观察细胞形态,评估其克隆形成能力。应用实时荧光定量聚合酶链反应检测微球细胞中CD133的转录水平?Western blot检测DNA损伤标志物磷酸化H2A.X (p-H2A.X)的表达和细胞凋亡标志蛋白聚ADP-核糖聚合酶特异性裂解片段的水平,同时检测Wnt信号通路关键分子β-catenin以及原癌基因c-Myc、cyclin D1蛋白表达情况? 结果：MDV3100单独处理能明显降低肿瘤干细胞标志物CD133的表达;而MS-275单独处理、或MS-275联合DV3100处理均能明显抑制肿瘤干细胞样肿瘤微球的形成、降低肿瘤微球细胞CD133的表达,并促进肿瘤微球细胞产生PARP的特异性裂解、使p-H2A.X表达水平升高,同时可以明显降低β-catenin、c-Myc及Cyclin D1的表达? 结论：联合应用MS-275和MDV3100可以显著增强DV3100的抗肿瘤活性,具体表现在抑制肿瘤干细胞样微球细胞生成及克隆形成、损伤细胞的DNA、诱导细胞凋亡等。该结果为临床联合应用HDAC I类抑制剂MS-275和AR拮抗剂MDV3100治疗前列腺肿瘤提供了一定的实验依据?     

曲古抑菌素A和多西他赛联合应用治疗前列腺肿瘤的实验研究

目的研究组蛋白去乙酰化抑制药物与常用的紫杉类化疗药物联合应用对人类前列腺癌细胞的杀伤作用,探讨其可能的分子机制。 方法用不同浓度的组蛋白去乙酰化抑制药物曲古抑菌素A(trichostatin A, TSA)和紫杉类化疗药物多西他赛(Docetaxel,DTX)分别处理DU145和22Rv1前列腺肿瘤细胞,体外观察二者对肿瘤细胞的细胞毒作用。采用水溶性四唑盐(water soluble tetrazolium,WST-1)法检测细胞的增殖抑制率;蛋白质免疫印迹(western blot,WB)检测细胞中DNA损伤标志物磷酸化H2A.X(p-H2A.X)和细胞凋亡标志蛋白聚ADP-核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)特异性裂解片段的表达水平;采用定量实时荧光聚合酶链反应(quantitative real-time fluorescence polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞中相关肿瘤抑制分子Maspin、p21^CIP1/WAF1和Bax的转录表达水平。 结果TSA和DTX对于前列腺肿瘤细胞增殖的抑制作用随着浓度升高而增强。TSA对DU145细胞的细胞毒作用(IC50=0.16 μM)较对22Rv1细胞(IC50=0.06 μM)弱。而DTX对DU145细胞的细胞毒作用则较对22Rv1细胞表现更显著。低剂量的TSA(0.01 μM,0.1 μM)能协同DTX抑制肿瘤细胞的增殖。DTX能诱导肿瘤细胞中的PARP分子产生细胞凋亡的特异性裂解、使p-H2A.X表达水平升高,并促进肿瘤抑制分子MASPIN、p21^CIP1/WAF1和细胞凋亡分子Bax的转录表达。使用低剂量的TSA处理虽未见产生PARP的细胞凋亡特异性裂解片段和p-H2A.X表达升高,但促进DU145细胞表达maspin和Bax,也使22Rv1表达maspin和p21^CIP1/WAF1升高。同时TSA协同DTX显著诱导DU145细胞转录表达maspin、p21^CIP1/WAF1和Bax,协同诱导22Rv1细胞转录表达maspin和Bax分子。 结论TSA和DTX均能抑制肿瘤细胞增殖。DTX处理能有效损伤肿瘤细胞的DNA,诱导肿瘤细胞凋亡。联合应用TSA和DTX可以显著提高抗肿瘤相关分子的表达。这种药物诱导的细胞毒作用可能是通过诱导肿瘤抑制基因的表达而发挥作用,并具有组织和细胞特异性。该结果为临床应用TSA和DTX药物干预和治疗前列腺肿瘤提供用药指导,同时也提醒临床医师用药时必须考虑患者的个体化差异。     

基于分子检测技术的实验室质量改进与管理

临床医生获得与疾病相关的分子检测数据以及据此做出准确诊断,是后续实行精准治疗的前提和基础。分子检测结果的准确与否不仅要依靠先进检测设备和检测技术,还要高度重视实验室管理和数据的质量控制。高质量的分子检测数据是包括技术人员的综合专业素质、实验操作流程的规范性、实验室内部质量管理等方面集中反映。正确处置这些要素对检测结果的准确性和可重复性起着重要作用。本文就核酸分子检测中常用的突变扩增阻滞系统(amplification refractory mutation system,ARMS)技术结合实时荧光定量PCR(ARMS-PCR)检测技术和二代测序技术在应用过程中出现的问题进行分析和讨论,旨在与业内人士一起学习交流,以提高检测结果的可靠性,为临床提供可靠的实验室诊疗依据。     

安徽地区17 160例健康体检女性人乳头瘤病毒感染状况及基因分型

目的探讨安徽地区健康体检女性感染人乳头瘤病毒（HPV）发生率及病毒亚型分布，为宫颈癌的防治提供依据。 方法采用聚合酶链反应（PCR）反向点杂交技术对2018年4月至2018年12月合肥金域医学检验实验室有限公司接收的不同年龄段的健康体检女性宫颈脱落细胞样本进行HPV基因分型检测，根据基因型检测结果分析HPV及其亚型在女性人群中的潜在感染率、各基因型检出率和不同年龄段分布。 结果17 160例健康女性体检样本中，HPV基因检测阳性者共2 990例，总阳性率为17.42%（2 990/17 160）。17种高危型和6种低危型HPV均被检出。其中单一基因型检出者占73.71%（2204/2 990），二重基因型检出者占19.03%（569/2 990），三重基因型检出者占5.55%（166/2 990），四重（43例）、五重（7例）和六重（1例）基因型检出共占1.71%（51/2 990）。2 204例单一基因型感染样本中，高危型感染者1 829例（82.99%）。常见的高危HPV亚型依次为HPV52（20.07%、367/1 829）、HPV16（16.84%、308/1 829）、HPV53（9.84%、180/18 29）、HPV18（8.26%、151/1 829），此4种高危型HPV检出率占总高危型的55.00%（1 006/1 829）；其他13种高危型HPV分布于其他823例患者。低危型HPV共检出375例，以HPV81亚型最常见（40.00%、150/375），其次为HPV42亚型（22.13%、83/375）和HPV43亚型（17.33%、65/375）。其他3种低危型分布于其余23例患者。二重HPV感染者中，均为高危亚型感染者390例（68.54%），均为低危亚型感染者10例（1.76%），高低危亚型混合感染者169例（29.70%）。三重感染中，高危亚型感染者73例（43.98%），低危亚型感染者2例（1.20%），高低危亚型混合感染者91例（54.82%）。四重及以上HPV感染中，高危亚型感染22例（43.14%），低危亚型感染0例（0.00%），高低危混合感染29例（56.86%）。无论单一HPV感染还是多重HPV感染，均以高危型HPV感染为主。21～25岁、26～30岁、31～35岁、36～40岁、41～45岁、46～50岁、51～55岁、56～60岁、≥ 61岁年龄组体检者HPV阳性检出率差异有统计学意义（χ² = 28.701、P < 0.001）。 结论安徽地区健康体检女性HPV感染以单一感染和高危感染为主，高危型HPV感染率从高至低依次为HPV52、HPV16、HPV53和HPV18；不同年龄分层HPV感染率存在差异。