母婴分离模型程序选择及其效应研究进展

母婴分离作为一种重要的早期社会剥夺方式,出生后至断乳前的母婴分离日益受到关注。母婴分离程序选择在母婴分离模型中是及其重要的环节。文章综合阐述了不同母婴分离程序下对啮齿类动物行为及神经发育的影响,为今后研究提供了一定的理论支持。     

中药复方脑益康干预阿尔茨海默病模型小鼠脑组织神经生长因子及脑源性神经营养因子mRNA的表达

目的：观察中药复方脑益康对阿尔茨海默病模型小鼠脑组织脑神经生长因子、脑源性神经营养因子mRNA表达的影响。方法：①实验于2004—10／2005—03在南通大学基础医学院病理生理学实验室完成。②采用D-半乳糖和亚硝酸钠腹腔注射建立阿尔茨海默病小鼠模型，ICR小鼠120只，采用随机数字法分为6组，正常对照组，模型对照组，脑复康对照组[0．4g/（kg&;#183;d）]，脑益康小、中、大剂量组[（2．4，7．2，24g／（kg&;#183;d）]。脑益康由制首乌、巴戟天等组成（南通市中医院制剂室制成颗粒剂，每克颗粒剂含生药1．98g）。模型对照组、各给药组腹腔注射10g/L D-半乳糖120mg／（kg&;#183;d）和10g几亚硝酸钠90mg／（kg&;#183;d），连续60d，正常对照组腹腔注射等容量的生理盐水。脑益康和脑复康均以5g／L羧甲基纤维素钠配制灌胃，连续60d。③每组随机取6只小鼠，取脑组织，采用反转录-聚合酶链反应方法检测脑组织中脑神经生长因子、脑源性神经营养因子mRNA的表达。结果：①脑益康小、中、大剂量组脑神经生长因子mRNA的表达与正常对照组比较差异无显著性（1．05&;#177;0．25，0．83&;#177;0．46，0．99&;#177;0．46，1．12&;#177;0．22．P〉0．05）；脑益康小、中、大剂量组脑源性神经营养因子mRNA的表达与正常对照组比较差异无显著性（0．73&;#177;0．20，0．49&;#177;0．12，0．63&;#177;0．15，0．32&;#177;0．22，P〉0．05）。②模型对照组脑神经生长因子mRNA、脑源性神经营养因子mRNA显著高于正常对照组（1．98&;#177;0．60比1．12&;#177;0．22，1．32&;#177;0．37比0．32&;#177;0．22，P〈0．05）。⑧与模型对照组脑神经生长因子mRNA和脑源性神经营养因子mRNA比较，阳性药脑复康对照组、脑益康小、中、大剂量组表达明显减少沪〈0．05）。结论：脑益康提高阿尔茨海默病小鼠学习记忆作用的部分机制与其保护胆碱能神经元、改善神经生长因子、脑源性神经营养因子的逆行运输有关。     

Genistein对去卵巢后大鼠基底前脑神经元一氧化氮合酶表达及认知功能的影响

目的:观察去卵巢大鼠植物雌激素替代治疗后基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的表达和其认知功能在去卵巢后的时程变化。方法:实验于2004-07/2005-07在南通大学基础医学院人体解剖学教研室完成。3月龄雌性大鼠48只随机抽签法分为假手术组、去势组、Genistein替代组和雌激素替代组,每组12只。卵巢切除前,各组大鼠行避暗回避实验行为学检测。各组大鼠的处理:①去势组:切除双侧卵巢。②Genistein替代组:切除双侧卵巢后进行Genistein替代,剂量100μg(溶于200μLDMSO)。③雌激素替代组:切除双侧卵巢后进行雌激素替代,皮下注射苯甲酸雌二醇,剂量10μg(溶于100μL无菌芝麻油)。④假手术组:只切开双侧腰肌不触及卵巢,随即缝合伤口,相同条件下存活4周。药物注射隔日1次,时间固定,持续4周,分别于最后1次注射24h后进行灌注固定。各组大鼠在灌注前1周进行避暗回避实验。脑切片用NADPH-d组织化学方法染色,观察基底前脑内侧隔核、斜角带核垂直支脑区一氧化氮合酶阳性神经元的分布,并进行计数和统计分析。结果:实验过程中无动物死亡,全部进入结果分析。①去势前各组大鼠避暗回避实验的探索次数和滞留时间差异无显著性(P均>0.05);去势后行替代治疗1,2周后,各组大鼠避暗回避实验的探索次数和滞留时间差异无显著性(P均>0.05);替代治疗4周后,Genistein替代组和雌激素替代组大鼠的探索次数比去势组明显减少,滞留时间比去势组明显延长(P<0.05)。②大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元染色为深蓝色,胞体边界清晰,突起明显,为双极或多极细胞。内侧隔核的一氧化氮合酶阳性细胞主要分布于中线两侧,呈倒“V”字形排列,体积较小,胞体多呈梭形,各组大鼠的神经元数目在术后各时间点的差异不明显。在斜角带核垂直支则呈“人”字形排列,胞体较内侧隔核大,多呈锥形或椭圆形,多为多极神经元。各组大鼠神经元的数目呈动态变化,Genistein或雌激素替代组一氧化氮合酶阳性神经元数目上升,而去势组减少,替代治疗后1,2周内,Genistein或雌激素替代组与去势组之间差异无显著性(P>0.05);第4周时Genistein或雌激素替代组一氧化氮合酶阳性神经元的数目接近于假手术组水平,与去势组间差异有显著性(P<0.01)。结论:去卵巢后行替代治疗能增加大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的表达,改善大鼠认知功能,可能对中枢神经系统退行性病变起保护作用。     

颗粒状壳聚糖乳酸盐的制备及其抑菌性能

目的研究并制备颗粒状壳聚糖乳酸盐,检测其抑菌效果。方法通过溶解和醇沉淀工艺制备壳聚糖乳酸盐颗粒,用稀释法测定其抑菌效果。结果利用乳酸溶解和醇沉淀工艺可制备出壳聚糖乳酸盐颗粒,在红外光谱中具有特征性吸收峰。该壳聚糖乳酸盐颗粒具有很强的吸水能力,其吸水比达到1∶60~1∶80。壳聚糖乳酸盐形成的凝胶液对金黄色葡萄球菌的MIC为0.6 g/L。结论该方法生产壳聚糖乳酸盐合成工艺简单、过程易于控制、操作成本低、易于工业化生产;所制备出的壳聚糖乳酸盐颗粒具有很强的吸水性,可望将其用于纺织卫生用品产品生产中。     

替硝唑对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎作用的初步观察

肺孢子虫肺炎是免疫功能受损患者,尤其是艾滋病人肺部常见并发症。如不及时治疗,预后极差。目前预防和治疗本病的常用药物为戊烷脒和复方磺胺甲基异恶唑。但均存在明显的毒副作用。因此。研究高效、低毒、价廉的抗卡氏肺孢子虫（Pneumocystis carinii,Pc）药物成为当今肺孢子虫肺炎防治工作的迫切需要。替硝唑是一种抗滴虫、阿米巴及厌氧菌常用药物,应用替硝唑治疗肺孢子虫病尚未见报道。为此,本实验用替硝唑治疗大鼠肺孢子虫感染。观察了替硝唑对大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的影响。试图寻找更为安全、有效的抗肺孢子虫药物。     

炎症胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶基因转录的机制

目的：通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶，组成激活型MAPK激酶3和MAPK激酶6，进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节诱导型一氧化氮合酶基因在胶质细胞中的转录激活机制。 方法：实验于2003-01／2004-08在美国南卡洲医科大学神经科学研究室和南通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室进行。采用MAPK激酶3和MAPK激酶6表达质粒与接有荧光素酶的大鼠诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒；cAMP反应元件和核因子-κB联合转染C6胶质细胞株。测定荧光素酶活性，观察诱导型一氧化氮合酶基因激活表达机制。 结果：①MKK3b／MKK6b能引起诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒的激活，并都能够被p38MAPK抑制剂SB203580所抑制。②MKK可以诱导cAMP反应元件介导的和核因子-κB依赖的转录活性。③显性抑制型CRE结合蛋白和CCAAT／增强子结合蛋白都是p38MAPK的靶向作用目标，转染这两种转录因子产生相反的影响：显性抑制型CRE结合蛋白增强了诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒的表达，而显性抑制型CCAAT／增强子结合蛋白则引起抑制作用，对cAMP反应元件也具有相同的影响。④此外，激活型MAPK激酶3和MAPK激酶6诱导诱导型一氧化氮合酶启动子的激活能够被野生型活化转录因子增强。然而磷酸化缺陷型的野生型活化转录因子则起抑制作用。 结论：转录因子的靶向作用特点，对于炎症反应中NO的过量产生具有选择干扰性，在临床上具有实用价值。     

糖尿病早期大鼠坐骨神经电生理改变及胰岛素的影响

目的：观察糖尿病早期大鼠坐骨神经电生理改变及胰岛素对其的影响。 方法：实验于2005-09在南通大学药理教研室完成。从18周龄健康雄性SD大鼠36只中随机数字表法取28只造模，8只作为正常对照组。给予大鼠一次性腹腔注射链脲菌素造成胰岛素依赖性糖尿病模型，正常对照组给予等体积的柠檬酸盐缓冲液。给药72h后造模大鼠尾静脉取血。邻甲苯胺法测定血糖浓度，非空腹血糖大于16．0mmol／L纳入糖尿病模型。将纳入糖尿病模型的大鼠随机分为糖尿病模型组和胰岛素治疗组。造模成功后的第2天，每天给予胰岛素治疗组大鼠皮下注射精蛋白锌胰岛素注射液（长效胰岛素。40U／mL），给药时间在下午5点左右，胰岛素起初剂量4U／只，次日上午测定其血糖值，控制大鼠非空腹血糖值在10mmol／L以下（不低于3.9mmol／L），调整胰岛素用量为4-6U。2周时停止给药，并再次测定大鼠的血糖和体质量。糖尿病模型组不作任何处理。糖尿病模型组与正常对照组与胰岛素治疗组同时间进行血糖和体质量的测定。麻醉各组大鼠分离、暴露坐骨神经，测定其感觉神经动作电位潜伏期、波幅及传导速度。结果数据行方差分析。两两比较使用Scheffe检验。 结果：在28只造模SD大鼠给予链脲菌素后第72h。有15只大鼠血糖值为16．05—20．89mmol／L，超过16．0mmol／L。造模成功，纳入糖尿病模型。将造模成功的糖尿病模型大鼠分为糖尿病模型组8只，胰岛素治疗组7只；和正常对照组大鼠8只一起进入结果分析。①糖尿病模型组坐骨神经感觉神经动作电位的传导速度与波幅和正常对照组相比显著降低，差异有显著性意义[（40．34&;#177;1．68），（55．47&;#177;9．05）m／s，P〈0．01]；[（510．73&;#177;22．10），（637．37&;#177;29．28）μV，P〈0．01]；潜伏期延长[（1．54&;#177;0．13），（1．19&;#177;0．13）ms，P〈0．01]。给予胰岛素治疗后能有效逆转这些变化，坐骨神经感觉神经动作电位传导速度增加至（48．57&;#177;1．86）m／s，波幅上升至（593．72&;#177;22．62）μV，潜伏期缩短至（1．31&;#177;0．06）ms，与糖尿病模型组比较差异有显著性意义。②造模后2周糖尿病模型组血糖值显著高于正常对照组，差异有显著性意义[（20．1&;#177;2．0），（5．1&;#177;0．6）mmol／L，P〈0．01]；给予胰岛素治疗后血糖值显著降低至（6．6&;#177;1．8）mmol／L，与糖尿病模型组比较差异有显著性意义（P〈0．01）。 结论：在糖尿病早期（2周）即存在感觉神经功能的损害，起始因素为高血糖，通过胰岛素控制血糖后，能有效防止神经病损。     

大鼠海马83 ku蛋白诱导神经干细胞向乙酰胆碱酯酶阳性神经元的定向分化

背景:神经干细胞的临床应用还尚待时日,现阶段需要解决如何诱导神经干细胞分化为特定表型的神经元以替代丢失、变性的神经元细胞.目的:探讨大鼠海马组织83 ku蛋白对神经干细胞向乙酰胆碱酯酶阳性神经元分化的作用.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2003-10/2008-04在南通大学医学院完材料:清洁级SD大鼠12只,17 d龄SD胎鼠多只,均由南通大学实验动物中心提供.方法:取6只正常大鼠及6只切割海马伞后14 d大鼠的海马组织制成匀浆,进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据染色结果切取含有83 ku差异蛋白条带进行电洗脱,定量后调整蛋白浓度为300 mg/L.取胎鼠前脑组织,体外分离培养神经干细胞,设立3组:空白对照组加入单纯DMEM/F12无血清培养基;83 ku蚩白正常组、83 ku蛋白切割组分别加入含10 mg/L来自正常/割海马伞大鼠海码组织83 ku蛋白的DMEM/F12无血清培养基,诱导12 d.主要观察指标:用乙酰胆碱酯酶组织化学染色榆测神经干细胞分化为乙酰胆碱酯酶阳性神经元的情况.结果:诱导12d后,83 ku蛋白切割组乙酰胆碱酯酶阳性神经元较多,胞体大且分化较好,突起粗且长;83 ku蛋白正常组乙酰胆碱酯酶阳性神经元较少,胞体小,突起短;空白对照组仅见少量乙酰胆碱酯酶阳性神经元.组间乙酰胆碱酯酶阳件神经元数比较差异有显著性意义(P＜0.05),83 ku蛋白切割组＞83 ku蛋白正常组＞空白射照组.结论:大鼠海马组织中83 ku蛋白可成功诱导神经干细胞定向分化为乙酰胆碱酯酶阳性神经元.     

补阳还五汤对大鼠胫前肌失神经肌萎缩的防治作用

目的研究补阳还五汤(BYHWD)对大鼠胫前肌失神经肌萎缩的防治作用。方法建立大鼠腓总神经夹伤模型,将造模后的60只♂SPF级SD大鼠随机分为6组:BYHWD高、中、低剂量组、弥可保组、模型组、假手术组,术后每日灌胃给药。术后18d,病理切片染色。形态学分析,计算胫前肌湿重比和横截面积。结果假手术组胫前肌横截面积较大,形态规则;模型组横截面积明显减小,结构紊乱,结缔组织明显增生;BYHWD各组与弥可保组横截面积较小,形态较规则,结缔组织增生不明显。与模型组相比,BYHWD各组胫前肌横截面积明显增加(P<0.01);BYHWD高剂量组胫前肌横截面积与弥可保组相比差异也有显著性(P<0.05)。与模型组相比,BYHWD高、中剂量组胫前肌湿重比明显增高(P<0.05或P<0.01)。BYHWD低、中、高组两两比较后,湿重比与横截面积差异均有显著性(P<0.05或P<0.01),表明BYHWD低、中、高剂量组湿重比与横截面积存在明显的剂量-效应关系。结论补阳还五汤对大鼠胫前肌失神经肌萎缩有明显的防治作用。     

大鼠海马中56KD、83KD蛋白诱导神经干细胞向神经元分化的协同作用研究

目的:探讨切割海马伞大鼠海马中56KD、83KD蛋白在诱导神经干细胞向神经元分化方面是否具有协同作用.方法:切割海马伞后的海马进行非变件聚丙烯酰胺凝胶电泳,墩低分子量区的56KD、65KD和83KD 3条差异蛋白条带电洗脱后以不同的组合加入鼠胚神经干细胞的分化培养液中诱导神经干细胞分化,12天后行MAP-2免疫荧光染色,记数其中MAP-2阳性神经元数,胞体面积和细胞周长.用STATA7.0软件进行方差分析和两两比较.结果:56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组MAP-2神经元的数量是47.1±9.64,43.7±8.41,胞体大,突起丰富:65KD 83KD组、56KD 65KD组、56KD组和83KD组MAP-2神经元的胞体较小,突起较矩:65KD组和对照组的神经元胞体最小,突起最短.MAP-2神经元的数量、面积和周长统计分析结果显示:56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组与其他6组均有显著性差异.56KD 65KD 83KD组和56KD 83KD组之间没有显著性差异:65KD 83KD组、56KD 65KD组、56KD组和83KD组四组之间没有显著性差异,但是它们与65KD组和对照组均有显著性差异,65KD组和对照组之间没有显著性差异.结论:56KD、83KD蛋白在诱导神经干细胞向神经元分化方面具有协同作用.