热休克蛋白27在大肠癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)表达与大肠癌淋巴结转移的关系.方法 应用免疫组化方法检测68例临床大肠癌组织标本中Hsp27的表达情况.应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测不同转移潜能大肠癌细胞株中Hsp27 mRNA和蛋白的表达情况.结果 在大肠癌组织中,热休克蛋白27的表达率与年龄、性别、淋巴结转移、临床分期无相关性(χ2test,P＞0.05),但其过表达和大肠癌淋巴结转移显著负相关(Fisher's exact test,P=0.035).应用RT-PCR、Western blotting和免疫组化方法检测结果显示Hsp27基因和蛋白在高淋巴结转移潜能的SW620细胞中呈低表达,在低淋巴结转移潜能的SW480细胞中呈高表达.结论 Hsp27和大肠癌肿瘤细胞的转移行为可能为负相关,可能在阻止其转移中发挥重要作用.     

X线照射对宫颈癌HeLa细胞醛缩酶A表达和定位的影响

目的:观察宫颈癌HeLa细胞转染醛缩酶A(aldolase A,ALDOA)后,在X线作用下ALDOA在细胞内定位的改变,以及其对细胞存活率的影响。方法:克隆出ALDOA全长编码序列,构建真核表达质粒pECFP-C1-ALDOA,实验组通过脂质体介导将pECFP-C1-ALDOA转染HeLa细胞,设载体pECFP-C1作为阴性对照,各组均给予X线照射,荧光显微镜观察照射前后HeLa细胞中pECFP-C1-ALDOA和pECFP-C1表达及定位的变化,用XTT法检测细胞存活率的改变。结果:双酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;荧光显微镜下观察HeLa细胞内pECFP-C1-ALDOA主要分布于胞浆,pECFP-C1为全细胞均匀分布;经X线照射24h后胞浆中的pECFP-C1-ALDOA逐渐转至胞核,而pECFP-C1在细胞内的定位则不发生明显改变;经XTT法检测,发现X线照射后,转染pECFP-C1-ALDOA质粒的细胞存活率明显高于转染pECFP-C1的对照组细胞。结论:抑制ALDOA的表达,可使X线更易诱导宫颈癌细胞的死亡,因此其可能作为宫颈癌放射治疗的新靶点。     

两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响

目的 评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础.方法 分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定.结果 应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱.对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm.热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质.结论 热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱.     

结直肠癌转移动物模型血清中几种蛋白变化的观察

目的建立可视化结直肠癌转移模型,并应用血清蛋白质组学技术分析可视化结直肠癌转移模型血清蛋白质的变化。方法用pEGFP—N1绿色荧光蛋白基因转染具有转移能力的SW480细胞株,在裸鼠皮下接种成瘤后,再原位接种于裸鼠右半结肠,利用整体荧光成像系统观察结直肠癌原位成瘤及发生转移的情况。同时采集裸鼠原位成瘤后不同转移阶段的血清,进行双向电泳联合时间飞行质谱分析差异蛋白质,观察结直肠癌转移模型裸鼠癌转移前后血清蛋白的变化。结果获得稳定表达绿色荧光蛋白的SW480-EGFP细胞株,裸鼠皮下接种成瘤率为100％,原位种植成瘤率为10／10,区域淋巴结转移为10／10,肝转移率为4／10,肺转移率为3／10。通过血清蛋白质组学技术成功鉴定了5个在癌转移发生后血清内显著升高的血清蛋白：结合珠蛋白α链,载脂蛋白A4,载脂蛋白E,免疫球蛋白κ型V区L链和转铁蛋白。结论成功建立结直肠癌可视化转移模型,利用不同转移阶段鼠血清进行双向电泳图谱差异分析筛选出5个在癌转移发生后血清中显著升高的蛋白可能是与结直肠癌转移相关的蛋白。