星形胶质细胞体外缺血缺氧损伤后炎症模型的建立及应用

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞缺血缺氧损伤后炎症模型,探讨亚低温对星形胶质细胞缺血缺氧及损伤后炎症反应的影响.方法 体外原代培养新生SD大鼠星形胶质细胞,免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行鉴定.实验分正常对照组(C组)、单纯缺氧组(H组)和缺氧+白细胞组(H+W组),以无糖DMEM培养基、5%CO2+95%N2混合气体培养4 h诱导细胞缺氧模型.H+W组加入1 mLSD大鼠外周血白细胞(1×106/mL),C组加入等量培养液.将3组细胞分别置入37℃、34℃、32℃、30 ℃ CO2孵箱中作用24 h,应用速率法和LIVE/DEAD染色分别检测3组细胞在不同温度下乳酸脱氢酶(LDH)释放率的变化和形态学变化.结果 缺氧4 h即可造成星形胶质细胞的损伤.37℃时C组、H组、H+W组细胞LDH释放率依次升高,差异有统计学意义(P<0.05);与37℃相比,亚低温状态(34℃、32℃)下H组、H+W组细胞LDH释放率均降低;但在30℃时,则有明显升高,与32℃相比差异具统计学意义(P<0.05).结论 亚低温状态可明显降低星形胶质细胞的缺血缺氧性损伤及炎症性损伤,其机制可能并非通过单纯的抑制代谢来实现的.     

环介导等温扩增技术检测粪便幽门螺杆菌方法的建立及应用

目的:建立一种快速、简单的检测粪便幽门螺杆菌的环介导等温扩增方法(loop-medi atedisotherma lamplification,LAMP)。方法:针对幽门螺杆菌的16SrRNA基因设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),优化反应条件后,对方法的敏感性、特异性进行评估,并评估检测粪便模拟标本的敏感性。结果:使用LAMP方法可以在2h内得到检测结果,加入染料后阳性结果为绿色,电泳后有明显的阶梯状条带。幽门螺杆菌的基因组DNA检测敏感性为12pg,是普通PCR的10倍,对模拟粪便标本进行检测,检测限为102CFU/mL。金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌的检测结果均为阴性。结论:本研究建立的检测幽门螺杆菌的LAMP方法敏感性高、特异性强,操作简单,不需要特殊设备,是一种很有前景的检测方法。     

三氧疗法配合柳氮磺吡啶经结肠途径治疗溃疡性结肠炎

目的 观察三氧疗法配合柳氮磺吡啶经结肠途径治疗轻、中度远段溃疡性结肠炎的效果.方法 采用前瞻性随机对照试验,将符合人选标准的活动期轻、中度远段溃疡性结肠炎患者分成三氧加结疗组、结疗组及对照组各18例.3组均予柳氮磺吡啶2g/d,三氧加结疗组和结疗组经结疗机途径给药,三氧加结疗组加用三氧,对照组经灌肠途径给药.临床观察期4周,分别于第0,2,4周复查大肠镜,进行疾病活动度评价,第0,4周取活检进行组织学评价.结果 三氧加结疗组临床症状缓解速度,以及组织学分级下降程度均优于单纯柳氮磺吡啶结疗和灌肠治疗组,治疗过程中无一例发生不良反应.结论 三氧疗法经结肠途径治疗溃疡性结肠炎是可行,值得进一步研究.     

阿片受体μ-Myc-pIRES2-EGFP的构建及其在CHO细胞中的表达

目的:构建带Myc标签的大鼠μ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(μ-Myc-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达。方法:以含大鼠全长μ阿片受体基因的μ-pMD20T载体为模板,通过引物设计和扩增,在μ基因C端引入Myc标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接克隆入pIRES2-EGFP中,将获得的μ-Myc-pIRES2-EGFP转染入CHO细胞中,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并用细胞免疫荧光和蛋白印迹检测μ-Myc的表达。结果:测序及酶切结果表明获得带Myc标签的μ基因,构建入pIRES2-EGFP表达质粒中,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光,应用免疫荧光和蛋白印迹观察到目的基因表达。结论:成功构建了μ-Myc-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达。     

槲皮素调节葡萄糖氧剥夺损伤的星形胶质细胞细胞周期基因的表达

目的 研究槲皮素对葡萄糖氧剥夺损伤星形胶质细胞基因表达的影响及作用机制.方法 将原代培养成熟的星形胶质细胞分为单纯葡萄糖氧剥夺组和葡萄糖氧剥夺联合槲皮素处理组(槲皮素处理组),用基因芯片筛查缺血缺氧4h后的槲皮素处理对星形胶质细胞基因表达变化的影响,并用实时定量PCR(qRT-PCR)对差异表达基因进行了验证.结果 与单纯葡萄糖氧剥夺组相比,槲皮素处理组基因表达谱芯片筛查出的31个基因与细胞周期及其相关调控密切相关,其中上调基因为5个,下调基因26个.用qRT-PCR对其中6个基因进行了验证,检测结果和基因芯片分析结果一致.结论 槲皮素能调控葡萄糖氧剥夺损伤的星形胶质细胞细胞周期相关基因的表达.     

应用Logistic回归分析探讨吸毒强戒人员HIV感染的相关危险行为因素

目的了解吸毒强戒人群中HIV的感染情况以及影响HIV感染的相关危险行为因素,为制定预防措施提供重要依据。方法对1 085例强制戒毒人员进行问卷调查,对可能影响HIV感染的危险因素进行单因素分析以及Logistic回归分析。结果单因素分析结果显示文化程度、吸毒时间、吸毒方式、婚姻状况、性伴侣数以及安全套使用情况均与HIV的感染有关联;多因素显示性别、文化程度、吸毒时间、吸毒方式和安全套使用情况5个变量对HIV感染有很大的影响。结论吸毒者的文化程度越低、吸毒时间越长、采用静脉吸毒方式、不使用安全套是HIV感染的重要危险因素,加强这几方面的干预措施对HIV的预防至关重要。     

槲皮素对胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响

目的探讨黄酮类化合物槲皮素对人胶质瘤U87细胞侵袭、迁移、增殖及其细胞周期的影响。方法将U87细胞分成Q0、
Q50、Q100和Q150 4个组,Q0组加适量二甲亚砜（槲皮素溶剂）处理,Q50、Q100和Q150组槲皮素的浓度分别为50、100、150 μmol/L。分别
通过transwell体外侵袭实验、transwell体外迁移实验、Click-iT Edu test技术和流式细胞术检测槲皮素对其侵袭迁移能力,增殖
能力及其细胞周期的影响。结果槲皮素处理36 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150组的侵袭细胞比率分别为：52.08%、24.63%
和13.13%,P均<0.05。槲皮素处理12 h后,与对照组相比,Q50、Q100和Q150的迁移细胞比率分别为：49.46%、26.78%和14.56%,P
均<0.05。槲皮素处理24 h后,Q0、Q50、Q100和Q150组的增殖细胞百分比分别为25.21%、18.38%、16.74%和15.24%。G0/Gl期C6细
胞所占比例分别为71.14%、72.71%、69.29%、66.47%,S 期分别为25.32%、22.48%、21.96%、23.32%,G2/M 期分别为3.53%、
4.80%、8.75%、10.25%;Q100、Q150组的G2/M期细胞比例与Q0组比较,P均<0.05。结论槲皮素能明显降低胶质瘤细胞的侵袭迁移
能力;并可通过阻断U87细胞的细胞周期进程来抑制其增殖。