基于MAPKs和NF-κB信号通路的麻黄-桂枝药对抗炎作用机制研究

目的:考察麻黄-桂枝药对对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及其分子机制。方法:体外培养RAW264.7细胞,CCK8法确定麻黄-桂枝作用的最适浓度,设定正常对照组、模型对照组(LPS组)、实验组(25、50、100、200μg/mL的麻黄-桂枝+LPS组),实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6 mRNA的表达,Western blot法检测MAPKs和NF-κB通路中关键蛋白的表达水平。结果:麻黄-桂枝作用的最适浓度为25μg/mL～200μg/mL。与正常对照组比较,模型对照组NO、PGE_2、TNF-α、IL-6含量显著升高,iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,麻黄-桂枝100μg/mL～200μg/mL组iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平显著下降(P<0.05或P<0.01)。LPS致炎后,与正常对照组比较,模型对照组30 min P-p65、P-IκB-α、P-p38、P-ERK、P-JNK蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,麻黄-桂枝各组30 min P-p65、P-IκB-α、P-JNK蛋白表达显著降低、P-ERK显著升高(P<0.01)、P-p38无显著差异,12 h后P-p38和P-ERK表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:麻黄-桂枝可能通过对炎症细胞因子和促炎介质的调控来减轻炎症反应;并通过调控NF-κB信号通路中p65、IκB-α以及MAPKs信号通路中p38、ERK、JNK蛋白的磷酸化来发挥抗炎作用。     

罗仁治疗儿童肾病综合征蛋白尿经验介绍＊

本文介绍了罗仁教授治疗儿童肾病综合征蛋白尿的学术思想及理法方药。肾病综合征蛋白尿属中医学的“水肿”“尿浊”“虚劳”“腰痛”范畴，发病主要与肺、脾、肾三脏功能失调有关。蛋白尿是肾病综合征的必要诊断条件，不仅可直接导致低蛋白血症，引发水肿，还会促进肾功能的恶化。罗仁教授认为尿蛋白源于血浆，是水谷精微，为至阴之精，应固藏于肾，并且有赖于肺之宣发、脾之升清、肝之疏泄的共同作用，创立了肾病1号方从肺、脾、肝、肾四方面减少尿蛋白，使患者更早进入缓解期，延缓疾病进展，调节免疫，防止复发，尤其对激素抵抗、激素依赖患者具有更重要的意义，并随证或随症加减，对于病情复杂的复合病或复合证患者可用单双日疗法调整阴阳，单日用肾病1号方减少蛋白尿，双日用小生六汤调和脏腑，还从心理、运动、饮食三方面指导患者积极面对疾病。     

温针对肌筋膜痛扳机点模型大鼠病理形态及致痛性炎性介质的影响

目的:在建立扳机点大鼠模型的基础上用温针进行干预,通过显微病理技术及微透析技术,评价其对扳机点模型大鼠病理形态及致痛炎性介质的影响。方法:将64只SD雄性大鼠随机分为A组(空白对照)、B组(模型对照)和C组(模型干预);A、B每组又分3小组(A0,A1,A2和B0,B1,B2),C组分为2小组(C1,C2)。B、C两组建立MTr Ps模型,造模成功后并分别给予C1组7 d和C2组15 d温针干预。分批处死大鼠,MTr Ps局部取材,制片后进行苏木精-伊红染色,光镜下观察其病理变化,通过微透析技术对大鼠动物模型扳机点局部白细胞介素-1β和前列素E2进行检测。结果:镜下可见,造模组的肌纤维排列紊乱、断裂、扭曲,局部肌纤维纤维化、挛缩增粗等;局部可见有巨噬细胞等炎症细胞侵入及挛缩结节部位出现大面积粘连,温针干预后局部肌纤维的病理状态明显改善,局部微小血管形成和成熟,局部肌纤维修复。在造模成功后,进行温针干预前B0组的白细胞介素-1β和前列素E2的量明显高于A0组(P0.01),通过7d的温针干预,C1和B1组白细胞介素-1β和前列素E2的量差异无统计学意义(P0.05),C1、B1组明显高于A1组(P0.01);通过15d温针干预,C2组的白细胞介素-1β和前列素E2的量低于B2组(P0.05),但C2、B2组明显高于A2组(P0.01),C2组的白细胞介素-1β及前列素E2的量低于C1组(P0.05)。结论:运动联合击打的造模方式通过病理组织学证实是有效的;温针能够改善大鼠肌筋膜痛扳机点局部肌纤维的病理状态及炎症状态,促进局部微小血管形成和成熟,有助于扳机点局部肌纤维修复。     

伊贝母异甾体生物碱通过Wnt/β-catenin信号通路调节哮喘大鼠气道炎症和气道重塑机制的研究

目的 探讨伊贝母异甾体生物碱对哮喘大鼠气道炎症、气道重塑及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 本研究采用吸入卵清蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立大鼠哮喘模型，连续给予药物7天；抽取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞分类计数，酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF中白介素4（IL-4）、白介素5（IL-5）和白介素13（IL-13）的水平；取肺组织进行苏木精-伊红（HE）染色，观察药物对哮喘大鼠气道重塑的影响；采用Western blot技术考察异甾体生物碱对Wnt/β-catenin信号通路上Wnt5a、Wnt7b和β-catenin蛋白的调节作用。结果 与模型组比较，异甾体生物碱组大鼠肺泡间质炎性细胞浸润和支气管管腔狭窄均显著改善，支气管壁厚度和平滑肌厚度均明显降低；Western blot结果显示异甾体生物碱对于哮喘大鼠Wnt/β-catenin通路上的Wnt5a、Wnt7b和β-catenin蛋白表达均有显著的调节作用。结论 异甾体生物碱对于哮喘相关的病理变化-炎症和气道重塑均有一定的治疗作用，且该治疗作用与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的影响＊

目的 探究三仁汤对脾胃湿热型大鼠NLRP3、Caspase-1蛋白的调控及胃黏膜细胞焦亡的影响。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、三仁汤高、中、低剂量组，每组各10只。根据前期的研究方法，利用高脂、高糖、湿热的条件，复制脾胃湿热证的模型，给予三仁汤干预，高、中、低剂量分别为16.4 g/kg，8.2 g/kg，4.1 g/kg。HE染色观察胃黏膜病理变化，免疫印迹法检测大鼠胃黏膜细胞NLRP3、Caspase-1蛋白的表达。结果HE结果显示，三仁汤高、中、低剂量组均对胃黏膜细胞焦亡有所改善。免疫印迹的结果显示模型组大鼠NLRP3和Caspase-1高表达，三仁汤高、中、低剂量组下调NLRP3和Caspase-1蛋白的表达，具有统计学差异（P < 0.05）。结论 三仁汤可能通过降低脾胃湿热大鼠的NLRP3、Caspase-1蛋白的表达，减少胃粘膜细胞焦亡，抑制胃粘膜炎症的爆发，从而防治脾胃湿热证模型大鼠，为临床治疗脾胃湿热证的胃痛提供了理论依据。     

断藤益母汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MEKK2及CIA小鼠关节炎的影响

目的:为了研究断藤益母汤(DTYMD)在类风湿关节炎中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)上游激酶的调控作用,阐明DTYMD抗炎的分子机制。方法:培养成纤维样滑膜细胞,将细胞分为空白组,模型组,DTYMD高、中、低质量浓度组(1 000,800,600 mg·l~(-1)),甲氨蝶呤(MTX)组(20μmol·l~(-1))组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2(MEKK2)的蛋白和mRNA表达进行分析。将42只雄性DBA/1J小鼠随机分为6组,每组7只,分别为正常组,模型组,MTX组(2 mg·kg~(-1)),DTYMD低、中、高剂量组(6. 25,12. 5,25 mg·kg~(-1))。除正常组外,其他5组均采用二次免疫法构建胶原诱导型关节炎(CIA)模型。给药结束后,取小鼠后肢踝关节行苏木素-伊红(HE)染色并进行关节病理评分。结果:与模型组比较,DTYMD以浓度依赖方式抑制成纤维样滑膜细胞活性(P 0. 01);与空白组比较,模型组细胞增殖率升高(P 0. 01)。与模型组比较,DTYMD高、中质量浓度组降低MEKK2蛋白及mRNA的表达(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,DTYMD不同剂量组均降低细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的表达(P 0. 01);与空白组比较,模型组MMP-1,IL-6,TNF-α表达明显上升(P 0. 05,P 0. 01)。在动物实验中,与模型组比较,DTYMD高、中剂量组可以降低CIA小鼠关节肿胀度(P 0. 05,P 0. 01);与正常组比较,模型组小鼠二次免疫后关节明显肿胀(P 0. 05)。在CIA小鼠踝关节HE染色中,与空白组比较,模型组小鼠病理学评分升高(P 0. 01);与模型组比较,DTYMD高、中剂量小鼠关节病理评分明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。结论:DTYMD可能通过下调MEKK2对细胞因子IL-6,TNF-α,MMP-1负性调控,从而缓解类风湿关节炎的炎症反应。     

生化汤加味促进剖宫产后子宫复旧随机对照试验的系统评价及Meta分析＊

目的 对生化汤加味促进剖宫产后子宫复旧的有效性与安全性进行系统评价，为其在临床应用提供循证医学证据。方法 检索中国生物医学文献数据库（CBM）、中国知网（CNKI）、万方资源数据库（WanFang）、维普期刊数据库（VIP）、Cochrane Library、PubMed、Web of Science等，检索时限为建库至2020年7月，选择生化汤加味促进剖宫产后子宫复旧的随机对照试验（RCT），采用Cochrane系统评价员手册提供的偏倚风险评估工具进行文献质量评价，应用RevMan5.3软件进行Meta分析。结果 共纳入12篇RCT文献，共计1804例剖宫产产妇；Meta分析结果显示，生化汤加味联合缩宫素组在产后第1、3、5天子宫底高度［MD = -0.75，95%CI（-1.35， -0.15），P < 0.00001；MD = -1.92，95%CI（-3.13， -0.72），P < 0.00001；MD = -1.92，95%CI（-3.79， -0.06），P < 0.00001］低于单用缩宫素组，联合用药组血性恶露时间［MD = -1.52，95%CI（-2.71，-0.34），P < 0.00001］和产后恶露持续时间［MD = -4.47，95%CI（-6.20，-2.75），P < 0.00001］均短于单用缩宫素组。结论 生化汤加味联合缩宫素与单用缩宫素比较，更能促进产后子宫复旧；不良反应少，报道的仅有4例出现轻微腹泻，安全性较高；但由于纳入文献质量较低，上述结论尚需更多的随机对照临床研究加以证实。     

川芎嗪对免疫介导骨髓衰竭小鼠肾脏氧化应激的影响

目的探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对免疫介导的骨髓衰竭(BMF)小鼠肾脏氧化应激的影响。方法将C57小鼠随机分成正常对照组、单纯辐照组(TBI)、模型组、TMP低剂量组(5 g·L~(-1))、TMP中剂量组(10 g·L~(-1))、TMP高剂量组(20 g·L~(-1))。C57小鼠经5.0 Gy X射线全身辐照和淋巴细胞输注,建立BMF模型。观察14 d后小鼠外周血三系细胞、骨髓有核细胞、骨髓病理学、肾脏病理学及氧化应激等指标。结果模型组骨髓病理显示有核细胞减少,外周血三系明显降低,说明成功建立免疫介导BMF模型;模型组肾脏病理显示肾小管水肿,氧化应激指标MDA升高,抗氧化应激指标GSH、SOD、GSH-Px下降,提示BMF小鼠肾脏存在氧化应激损伤。经TMP治疗后,肾脏病理未见明显异常,肾脏中MDA下降及GSH、SOD上升,免疫组化结果显示,HIF-1α表达下降,并出现VEGF表达。结论 TMP可减轻免疫介导的BMF小鼠肾脏氧化应激损伤,可能与调节HIF-1α/VEGF表达有关。