树突状细胞疫苗与食管癌免疫治疗

随着树突状细胞(DC)体外扩增技术和肿瘤抗原制备、负载体系等DC疫苗制备技术的发展,与食管癌治疗相关的多种DC疫苗相继出现,包括多肽负载DC疫苗、食管癌细胞-DC融合疫苗、核酸负载DC疫苗、自体肿瘤抗原负载DC疫苗等,其中多肽负载DC疫苗及凋亡的自体肿瘤细胞负载DC疫苗等在临床应用中已取得较好疗效.     

鼻咽癌患者自体树突状细胞疫苗治疗对机体免疫功能的影响

目的比较鼻咽癌患者自体树突状细胞（DCs）疫苗治疗前后对患者机体免疫机能的影响,探讨热休克的鼻咽癌细胞抗原负载的鼻咽癌自体DCs疫苗激发机体免疫应答的能力与趋势。方法 20例鼻咽癌患者随机分为对照组及治疗组,对照组实施常规放疗,治疗组在常规放疗后给予1个疗程的DCs免疫治疗（4次皮内注射）。治疗过程中动态检测T细胞亚群、自然杀伤（NK）细胞、Th1类细胞因子（IL-2、IL-12、TNF-α、IFN-γ）水平,进行分析比较。结果 DCs治疗前与治疗后外周血CD3＋、CD3＋CD4＋、CD4＋/CD8＋、NK细胞比率无明显变化（P〉0.05）;治疗后治疗组细胞因子IL-2、IL-12、TNF-α和IFN-γ的水平较治疗前明显升高（P〈0.05）。结论鼻咽癌自体DCs疫苗免疫治疗可明显提升鼻咽癌患者Th1类细胞因子水平,激发Th1型免疫应答,增强机体抗瘤能力。     

CIK和CEA负载DC联合化疗治疗胃癌的研究

目的 评价胃癌患者术后应用CIK和CEA负载DC联合化疗的临床疗效.方法 选取行胃癌根治手术治疗的患者30例,随机分为2组,分别给予化疗和CIK-DC/CEA细胞免疫治疗联合化疗的治疗方案,随后观察治疗之后的临床反应,并随访其临床疗效、生活质量情况及生存率等评价指标.结果 免疫细胞回输治疗后,患者未见明显不良反应,血清中Th1类细胞因子水平较治疗前有明显升高,治疗前后比较有显著性差异（P〈0.05）;随访结果显示,免疫治疗临床疗效、生活质量、生存率较对照组均有一定的改善,但无显著性差异（P〉0.05）.结论 CIK-DC/CEA细胞免疫治疗胃癌是有一定的近期临床疗效的,可为改善胃癌根治术的预后以及免疫治疗提供一定的理论基础.     

DC-CIK联合化疗在晚期胰腺癌治疗中的应用

目的 研究以DC-CIK方案联合化疗治疗晚期胰腺癌的临床应用价值.方法 回顾性分析以DC-CIK方案联合化疗治疗的30例晚期胰腺癌患者（观察组）的病历资料,并与同期采取化疗方法治疗的30例患者（对照组）进行对照研究.分析2种治疗方法的总有效率和生存期.结果 观察组完全缓解1例,部分缓解5例,总有效率20%,临床受益率73%.对照组完全缓解0例,部分缓解3例,总有效率10%,临床受益率43%.观察组临床有效率明显高于对照组（P〈0.01）.观察组中位生存期、平均生存期及1 a生存率均显著高于对照组（P均〈0.05）.结论 DC-CIK联合化疗能提高晚期胰腺癌患者生存期,减轻患者化疗的毒副作用,为胰腺癌的治疗提供了一条新途径.     

热休克凋亡乳腺癌细胞负载的DC体内激发Th1型免疫反应

目的:探讨乳腺癌患者免疫热休克凋亡乳腺癌细胞负载的树突状细胞(DC)后体内免疫状态的变化,并对其安全性进行初步评估.方法:分离患者外周血单核细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和白介素-4(rhIL-4)诱导DC;将患者自体肿瘤细胞热休克后诱导其凋亡并负载自体DC.对10例确诊为乳腺癌的患者进行1个疗程(4次)的DC免疫治疗.结果:治疗中未出现明显不良反应,生活质量均有不同程度的改善,血清中IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平治疗后呈明显上升趋势.结论:热休克凋亡乳腺癌细胞负载的DC体内可激发Th1型免疫应答,增强机体抗瘤能力,同时无明显毒副反应.     

乳腺癌细胞抗原负载的自体树突状细胞体内诱导特异性T细胞应答

Objective To explore the potential of autologous dendritic cells (DCs) loaded with breast tumor cells antigen in inducing tumor-specific T cells response in vivo. Methods Fresh tumor samples from patients with breast cancer were collected and made into apoptotic heat shock tumor cells. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated. DCs were induced from monocytes with granulocytemacrophage colony-stimulating factor (rhGM-CSF) and interleukin-4 (rhIL-4) combination for 5 days. DCs were co-cultured with autologous apoptotic heat shock tumor cells for 48 h. Twenty-four patients with breast cancers received four vaccinations of auto-DCs at 1 st, 2nd, 4th, and 6th week with cell number from 4×106 to 6×106. Results The vaccinations were well tolerated, and most patients experienced improved quality of life after DC immunization. Cytokine levels including IL-2, IL-12, TNF-α and IFN-γ in sera were obviously increased after DC vaccination [(68. 5±12. 4), (118. 2±31. 5), (78. 3±11.5) and (92. 6±14. 9) ng/L respectively] as compared with those before vaccinations [(33. 8±7. 2), (48. 5±10. 9), (18. 7±5. 3 ) and (20. 5±6. 3) ng/L respectively]. Both antigen specific delayed type hypersensitivity (DTH) reaction and the frequency of antigen specific IFN-gamma+CD8+T lymphocytes were examined after 4 times of DC vaccinations. The DTH tests were positive in 7 out of 10 patients. The frequency of IFN-γ+CD8+T cells was enhanced in 4 out of 10 patients. One out of 24 patients experienced a progressive disease, while the others showed no progress during a follow-up period of 34 months. Conclusion Autologous DCs loaded with heat-shocked apoptotic breast cancer cells antigen elicit specific anti-tumor T cell immune responses companying with high levels of Thl type cytokine secretion. DCs vaccination after surgery may be a novel and effective combination tool for tumor treatment.     

自体DC-CIK细胞治疗晚期肾细胞癌的疗效

目的：探讨自体树突状细胞（dendritic cell,DC）激活的细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞在晚期肾细胞癌（renal cell carcinoma,RCC）治疗中的临床效果与安全性。方法：采集22例2011年7月至2012年6月期间南京医科大学附属苏州医院肿瘤内科收治的22例RCC Ⅳ期患者\[男性12例、女性10例,中位年龄60.8岁（21~79岁）\]外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,体外制备成DC-CIK细胞。流式细胞术分析DC-CIK细胞中CD3+T、CD8+T、CD4+T、NK（CD3-CD56+）和NKT（CD3+CD56+）细胞的比例,MTT法检测DC-CIK细胞对白血病K562细胞（对NK细胞敏感）和肾癌786-0细胞（对NK细胞不敏感）的杀伤活性。受试患者于常规治疗（手术+化疗+放疗/细胞因子治疗）结束后4周进行DC-CIK细胞治疗,每次静脉回输细胞数约（5.0±0.5）×108个,5次为1疗程,共3个疗程,分别于疗程开始前与结束后1周内监测患者外周免疫学指标（淋巴亚群、细胞因子谱）,严密观察并记录治疗过程中的不良反应。结果：DC-CIK细胞组成为CD3+细胞占（86.92±5.32）%、CD3+CD8+CD56+（NKT细胞）占（52.04±7.33）%、CD8-CD56+（NK细胞）占（785±315）%,DC-CIK细胞对786-0细胞和K562细胞的体外杀伤率相仿（效靶比为3∶1时,杀伤率分别为（16.5±1.7）%和（18.4±1.9）%,P=0.014）。患者接受DC-CIK细胞治疗后,外周血淋巴细胞亚群（CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD3-CD56+NK细胞）比例无显著变化（P>0.05）;外周血中IL-2、IL-12和IFN-γ细胞因子水平较治疗前明显提升（均P＜0.05）,而TNF-α 和IL-10变化不明显（均P＞0.05）。2例患者发生一过性发热,持续4~6 h恢复,1例出现短期乏力。结论：DC-CIK细胞体外能有效杀伤786-0细胞和K562细胞。 输注后可提升部分RCC患者免疫水平,安全性良好,可作为晚期RCC患者辅助治疗之一。     

多肽负载DC联合CIK治疗激素难治性前列腺癌的疗效

目的:研究多肽负载树突状细胞(dendritic cell,DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对激素难治性前列腺癌(hormone refractory metastatic prostate cancer,HRPC)患者免疫治疗的效果。方法:选择无锡市第四人民医院中西医结合科收治的HLA-A2+HRPC患者26例,分离外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经GM-CSF、IL-4联合诱导培养为成熟DC,负载前列腺癌特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)、前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phosphatase,PAP)、前列腺特异性膜抗原(prostate specific membrane antigen,PSMA)三个多肽,制备成DC疫苗,经患者腹股沟皮内注射;未贴壁细胞经IFN-γ、IL-2、抗CD3单抗、IL-1体外诱导培养成CIK,经静脉回输给患者。在治疗后1周进行迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)检测,在患者治疗前后进行血清中细胞因子和PSA检测,治疗结束后4周进行短期疗效评价。结果:26例HRPC患者对DC联合CIK治疗的耐受良好。治疗后患者血清中IL-2、IL-12、IFN-γ水平较治疗前显著升高(上升幅度分别为65.07%、67.69%和125.38%,P<0.05或P<0.01),TNF-α和IL-10水平变化不大;DTH的阳性率为43.5%(10/23);7例患者的CD8+IFN-γ+T细胞比例较治疗前显著提高[(8.95±2.74)%vs(0.39±0.15)%,P<0.01];8/26例患者的PSA下降,降幅为13%～66%。26例患者短期疗效评价,3例PR、4例PD、19例SD,所有患者治疗中未出现明显不良反应。结论:多肽负载DC联合CIK治疗HRPC能激发患者的免疫应答、诱导Th1型细胞因子的分泌,近期疗效良好,是一种安全的治疗方法。     

CEA多肽负载的自体树突状细胞治疗晚期肺癌8例近期疗效观察

目的探讨CEA多肽负载的自体树突状细胞（DC）治疗晚期肺癌的安全性和近期疗效。方法分离患者外周血单核细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）和白介素-4（rhIL-4）体外诱导DC,CEA多肽负载自体DC,对8例HLA-A2阳性且CEA较高的晚期肺癌患者进行4次DC免疫治疗,观察其安全性、免疫功能和临床疗效。结果治疗中未出现明显不良反应,血清中IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平治疗后呈明显上升趋势,4例患者的DTH检测阳性;4例患者血清CEA降低,2例平稳,2例升高。7例有可评价病灶的患者中,1例部分缓解（PR）、1例轻微缓解（MR）、3例稳定（SD）、2例进展（PD）。结论CEA负载的自体DC治疗晚期肺癌患者可改善患者的免疫功能,激发特异性免疫反应,缓解病情,且不良反应少,为肺癌的免疫治疗提供了一条新途径。     

HPV多肽致敏的树突状细胞体外激发特异性CTL能力的研究

目的 观察以高危型人乳头瘤病毒16型(HPV16) E6和E7基因编码的多肽E613-21(KLPDLCTEL)和E786-94(TLGIVCPI)为抗原负载的树突状细胞(DC)体外诱导特异性CTL的能力.方法 采集HPV+HLA-A2+宫颈癌患者外周血,分离单核细胞(Mo)与外周淋巴细胞(PBL);将Mo诱导成DC后负载E6和E7多肽,用其反复致敏PBL(3次);ELISA法检测致敏细胞上清细胞因子分泌水平;流式细胞标记法检测致敏细胞中特异性CTL的比例;MTT法检测致敏细胞杀伤靶细胞的能力.结果 11例HPV 16+ HLA-A2+宫颈癌患者DC平均得率为(10.79±0.88) ×l06(每100 ml外周血),CD11c+ HLA-DR+为(97.15±2.41)％,其中CD80+为(84.28±5.39)％,CD83+为(85.17+5.06)％,CD86+为(97.74±0.87)％.PBLs致敏3次后,平均增殖(15.4±1.5)倍;致敏第21天上清细胞因子水平分别为:IL-2(2551.9±195.3) pg/ml、IL-12(554.9士64.0)pg/ml、IFN-γ(2416.9±281.7)pg/ml,TNF-α(632.4±71.1) pg/ml,明显高于未致敏组(P＜0.05),IL-10(235.1+34.7) pg/ml与对照组比较无显著差异;特异性CTL的平均比例为(6.32±1.54)％,明显高于对照组(P＜0.05),对负载E6、E7多肽的T2细胞株杀伤率明显高于对照组(P＜0.05).结论 HPV E6和E7混合多肽负载的DC体外能有效地诱导特异性CTL,刺激Thl型细胞因子的分泌,为治疗型宫颈癌疫苗的研制提供科学依据.