Celecoxib对细菌脂多糖促牙龈成纤维细胞生长抑制作用的研究

目的观察celecoxib对细菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)促人牙龈成纤维细胞(humangingivalfibroblasts,HGFs)生长作用的影响。方法采用细胞活性和增殖水平测定(WST)实验检测LPS及celecoxib对体外培养的HGFs生长的影响。结果LPS可促进HGFs的生长,其作用效果随LPS剂量的增加而增强,1.0,12.5、100.0LPS处理后HGFs的细胞生长率与阴性对照组相比分别为126.1%,164.5%和215.5%;celecoxib对LPS促HGFs生长的现象有明显的抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性关系,12.5μmol/L到100μmol/L的celecoxib处理可使LPS刺激的HGFs生长率降低至对照组的76.3%~30.3%。结论LPS可促进HGFs的生长;celecoxib能抑制LPS对HGFs的生长刺激作用。     

环孢素对小鼠牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的观察环孢素(CsA)对小鼠牙龈上皮细胞增殖和凋亡的影响,探讨环孢素导致龈增生的机制。方法CsA胃饲小鼠8d后注射5-溴-2-尿嘧啶核苷(BrdU),在不同时间取小鼠牙龈及腭黏膜组织作BrdU染色,光镜下观察其上皮中阳性细胞的数目、分布以及完全代谢的周期,并与对照组比较。结果实验组小鼠的牙龈上皮中阳性细胞数与对照组比没有差异,但其生长周期比对照组长。其腭黏膜上皮细胞生长周期较牙龈黏膜上皮细胞无明显延长,阳性细胞数与对照组比较无差异。结论CsA可抑制小鼠牙龈上皮细胞的凋亡,但对细胞增殖没有影响。     

A20通过抑制自噬缓解实验性牙周炎牙槽骨吸收

目的：研究泛素编辑酶A20在抑制小鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用并探索其潜在机制。方法：将20只小鼠随机分为4组：无牙周炎（Control）组、牙周炎及PBS注射（PBS+P）组、牙周炎及阴性对照腺相关病毒（adeno?associated virus,AAV）注射（AAV+P）组、牙周炎及A20过表达AAV（AAV?A20）注射（A20+P）组。采用丝线结扎联合局部涂菌构建C57BL/6J小鼠实验性牙周炎模型。在小鼠牙龈局部注射AAV?A20以实现A20在牙周组织的过表达。A20免疫荧光染色验证AAV?A20在局部牙周组织的转染效率。微计算机断层扫描（microcomputed tomography,Micro?CT）、苏木素伊红（haematoxylin and eosin,HE）染色及抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate?resistant acid phosphatase,TRAP）染色比较各组小鼠牙槽骨吸收程度及上颌第一第二磨牙之间破骨细胞数目。免疫组织化学染色观察各组小鼠牙周组织核因子?κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor?κВ ligand,RANKL）及自噬相关因子表达。结果：与PBS+P组及AAV+P组相比,A20+P组小鼠牙周组织自噬水平降低（Beclin?1、LC3B表达下降,p62表达上升）,RANKL表达下调,上颌第一第二磨牙之间TRAP阳性破骨细胞数目减少,牙槽骨吸收程度减轻。结论：A20通过负向调控自噬缓解小鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收,有望成为牙周炎治疗的新靶点。     

缺氧环境下LPS诱导人牙周膜成纤维细胞炎性损伤的研究进展

内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)是牙周炎炎症免疫反应中重要的毒力因子之一,直接或间接地作用于牙周膜成纤维细胞导致其炎性损伤。而牙周膜成纤维细胞因其所处位置的特殊性,长期处于相对缺氧的环境中。所以通过体外模拟牙周膜成纤维细胞发生炎性损伤时的体内环境,有利于阐明缺氧条件下细胞炎性损伤机制。本文就缺氧环境下LPS诱导的人牙周膜成纤维细胞炎性损伤的研究做一系统性回顾。     

富血小板血浆与富血小板纤维蛋白在牙周组织再生中的应用

富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）与富血小板纤维蛋白（platelet-richfibrin,PRF）因其促进组织再生的能力,在临床口腔创伤及缺损的修复中逐渐被重视及应用,并取得了令人较为满意的效果,鉴于PRP与PRF的制作较简便,且不易出现疾病传染及免疫排斥的不良反应,两者在口腔临床中的应用越来越广泛。牙周炎是目前造成牙周骨缺损最为常见的疾病之一,国内外的学者们为了探寻促进牙周组织再生的方法,将PRP与PRF用于牙周治疗中,本文即将近年来有关PRP与PRF在牙周组织再生中的临床应用作一综述。     

氯化镧对骨髓基质细胞与支架复合物骨矿化能力的影响

目的:观察氯化镧(LaCl2)干预后的体外培养的骨髓基质细胞(BMSCs)与脱钙冻干骨(MDBM)复合后的异位威骨能力.方法:将经过5.564×102、5.554、5.564×10-2μg/mL 3种浓度La3+干预的第3代BMSCs、空白对照组和骨形成蛋白-2阳性对照组细胞与fdDBM复合后回植入裸鼠皮下,8周后对回植标本做组织学分析、X线密度测定及钙磷含量测定.结果:回植物组织切片显示各组标本均可见新生的骨组织样结构.La3+干预各组的X线密度及钙磷含量均数与空白支架组比较差异均有显著性.但La3+"干预各组组间差异不具统计学意义.结论:5.564×102、5.564、5.564×102μg/mL 3种浓度的La3+均能促进组织工程骨矿化,以5.564 μg/mL的LaCl3促进骨矿化作用较强.     

荧光技术在牙菌斑生物膜研究中的应用进展

牙菌斑生物膜是龋病和牙周病的始动因子,其形成过程呈时空动态变化,是菌丛赖以生存及细胞间信号交流的场所.对于菌斑生物膜的空间结构、信号交流及生物活性变化的研究渐成热点.激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)应用于细胞生物学及分子生物学的研究,成为牙菌斑生物膜研究的重要工具,荧光技术的不断发展,大大提高了CLSM在口腔菌斑生物膜研究领域的应用.而近年来荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)被引入细菌生物膜的研究中,使结合CLSM的荧光技术又有了新的发展.本文对几种常见的荧光技术做一综述.     

伴放线放线杆菌cdtB基因克隆及其表达蛋白的体外生物学活性检测

目的 体外构建伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)CdtB蛋白的原核表达载体并诱导其表达,通过变性、复性获得有Ⅰ型脱氧核糖核酸酶(deoxyribonuclease Ⅰ,DNase Ⅰ)样活性的重组CdtB蛋白,为进一步研究AaCdtB的功能以及Aa细胞致死性扩张毒素三聚体全毒素在牙周炎发生、发展过程中的分子致病机制奠定基础.方法 以AaATCC29522基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应(PCR)法获得cdtB基因,经双酶切、连接的定向克隆技术构建原核表达载体pET-15b-cdtB.转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导CdtB蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)及蛋白质印迹法检测并鉴定蛋白表达.纯化的重组CdtB体外与超螺旋质粒(pET-32a)DNA孵育,观察其生物学活性.结果 经测序鉴定,构建的原核表达载体pET-15b-cdtB转染的感受态大肠杆菌携带有cdtB基因,该基因片段与GenBank中已收录的AacdtB基因序列一致性高达99%.SDS-PAGE观察到32 000左右的高表达蛋白条带,蛋白质印迹法发现带有6个组氨酸蛋白标签标记的目的 蛋白CdtB.超螺旋质粒DNA与CdtB体外孵育后发生了解螺旋现象.结论 本项研究成功构建了AaCdtB的原核表达载体并诱导CdtB蛋白的体外表达,获得了具有DNaseⅠ样活性的重组CdtB蛋白.     

富血小板血浆对牙周膜成纤维细胞的增殖、迁移和分化的影响

目的: 体外研究不同浓度的富血小板血浆(platelet-rich plasma, PRP)对牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)的增殖、迁移和分化的影响.方法:不同浓度PRP(10, 50, 100, 200, 300, 500 ml/L),加入到原代培养的人PDLFs,培养时间为3、 5、 7 d,MTT法测定细胞增殖效果,transwell系统测定细胞迁移效果,AKP试剂盒测定碱性磷酸酶活性.结果:PRP有明显促进增殖作用,以200 ml/L浓度PRP效果最好,更高浓度促进作用反而减低.细胞迁移效果中,各浓度组均比阴性对照组效果好,尤其是100 ml/L的效果最佳.对于碱性磷酸酶活性,也具有明显的促进作用,以300 ml/L的效果最佳.结论:PRP在一定浓度范围内对人PDLFs功能有明显促进效果,但是在更高浓度下,这种促进效果反而减低.