高氧肺损伤新生小鼠肺组织中GM15886和HIPK1的表达研究

目的：探讨长链非编码RNA（long non?coding RNA,lncRNA）GM15886在高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）肺组织中表达水平的变化,及其可能的作用机制。方法：选取BPD模型小鼠肺组织lncRNA基因芯片中高表达的GM15886进行验证,应用IntaRNA、Multi Experiment Matrix和Ensemble数据库预测其靶基因;将64只新出生C57BL/6J小鼠随机分为高氧组和空气组,每组各32只;高氧组新生小鼠置于95％高氧环境下,空气组暴露于空气环境下,分别于生后第0、3、5、7天处死小鼠取肺组织,HE染色评价肺组织病理变化;采用qPCR检测GM15886和同源结构域相互作用蛋白激酶1（homeodomain?interacting protein kinase 1,HIPK1）表达水平;免疫组化检测HIPK1表达情况。结果：IntaRNA预测GM15886碱基序列能够和HIPK1第2个外显子碱基序列完全结合。qPCR示高氧组第3、5、7天GM15886表达量升高,分别为1.91±0.28、2.12±0.38、2.35±0.43,与第0天相比,差异均具有统计学意义（P均＜0.05）;HIPK1在第3、5、7天相对表达量分别为1.16±0.33、0.92±0.31、3.12±0.46,第7天表达量高于第0、3、5天（P均＜0.05）;HIPK1免疫组化表现与RNA表达的结果相对应。结论：随着高氧暴露时间的延长,肺组织GM15886表达量增加;GM15886可能靶向HIPK1参与BPD的发病机制。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合骨髓间充质干细胞对高氧暴露新生大鼠肺损伤的干预作用

目的 探讨重组鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage-colony stimulating factor,GM-CSF)联合大鼠骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对高氧暴露新生大鼠肺损伤的影响.方法 采用贴壁选择法分离、培养、扩增人鼠骨髓来源MSCs,并以4',6二脒基-2-苯吲哚(4',6-diamidino-2.phenylindole,DAPI)进行标记,注射前以PBS按要求剂最予以稀释;3日龄清洁级SD新生大鼠32只,置于95%氧环境下7 d后,随机(随机数字法)分为4组,每组8只;高氧+GM-CSF组+MSCs组(A),高氧+GM-CSF组(B),高氧+MSCs组(C),高氧对照组(D);A,B组大鼠于模型结束后皮下注射GM-GSF 9μg/kg,A组同时还予腹腔注射5×10~4MSCs;C组予模型后腹腔注射5×10~4 MSCs,D组仅注射相同容积的PBS,于注射后72 h(13日龄)处死全部动物,肺组织病理学检测辐射状肺泡计数(radical alveolar counts,RAC);EIASA法检测肺组织匀浆TNF-α,IL-β含量;免疫组化检测肺组织端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcrip tase,TERT)积分;荧光显微镜观察DAPI阳性细胞分布情况.结果 (1)四组在RAC(P<0.01)、肺组织匀浆TNRα(P<0.01),IL-β(P<0.01)水平等方面差异均有统计学意义;与D组相比,A,B,c三组RAC值增加(P<0.05),TNF-α,IL-β水平下降(P<0.05);A组与B、A组与C组差异也均有统汁学意义(P<0.05).(2)四组在TERT积分差异也有统计学意义(P<0.01);A,B组明显增高(P<0.05);而C,D两组间差异均无统计学意义(P>0.05).(3)免疫荧光显微镜下A,C组可见DAPI阳性细胞,分别为(6.23±1.88),(5.10±0.91)(P<0.05).结论 GM-CSF、MSCs对高氧暴露可引致新生大鼠肺损伤均具有保护作用,涉及多种作用机制,联合治疗具有协同作用.     

极低出生体重儿早期静脉营养的临床研究

目的 研究极低出生体重儿对早期静脉营养的耐受情况和疗效.方法 32例极低出生体重儿随机分为2组:经典静脉营养组(CPN)和实验静脉营养组(EPN).CPN组生后24～48 h内仅给予5%～10%葡萄糖,之后加6%小儿氨基酸和20%脂肪乳,氨基酸从1.0 g/(kg·d)开始每口递增0.5 g/(kg·d),直至3.0 g/(kg·d);脂肪乳选用含中长链脂肪酸,从0.5 g/(kg·d)开始每日递增0.5 g/(kg·d),直至3.0 g/(kg·d).EPN组生后24 h内起即予6%小儿氨基酸2.4 g/(kg·d)和脂肪乳2.4 g/(kg·d),72 h内均增至3.0 g/(kg·d),即达到足量静脉营养.1周内每天计算总热卡包括胃肠内和胃肠外热卡,检测入院72 h内和1周后监测血脂、胆红素、肾功能、血碳酸氢盐、血糖等生化指标.并记录体质量最大丢失,计算1周后可以部分胃肠营养的患儿百分比、恢复出生体质量时间和达到完全胃肠营养时间等指标.结果 与CPN组相比,EPN组的总能量摄入以及胃肠外提供热卡在生后前5 d明显增高,1周内体质量丢失较少,恢复出生体重时间和恢复完全胃肠营养时间缩短,且末增加代谢性酸中毒、脂质代谢紊乱、高胆红素血症以及肾功能损伤等并发症.结论 极低出生体重儿早期可以耐受较大剂量的静脉营养,且有一定的临床效应.     

支气管肺发育不良患儿血清sRAGE检测的临床价值

目的:研究新生儿支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)血清可溶性晚期糖基化终末产物受体(soluble Receptor for advanced glycation end products,sRAGE)检测的意义?方法:选取新生儿重症监护病房住院BPD患儿45例(轻?中?重组分别为10?16?19例),在病程的不同时期以ELISA法检测血清中sRAGE水平,同时选取匹配非BPD患儿作为对照组?结果:与对照组相比,BPD组血清sRAGE水平明显增高;BPD组中,sRAGE在轻?中?重组间差异也有显著性(F = 149.97,P < 0.01)?结论:血清sRAGE可作为BPD的诊断和病情轻重评估的敏感指标?     

人骨髓来源间充质干细胞对新生大鼠高氧肺损伤干预作用的研究

目的 研究人骨髓来源间充质干细胞对新生大鼠高氧肺损伤的干预作用.方法 采用贴壁选择法分离、培养、扩增hMSCs,并予BrdU进行标记;32只3日龄SD大鼠随机分为A、B、、C、D4组,每组8只;A组:高氧暴露+hMSCs注射组,B组:空气暴露+hMSCs注射组,C组:高氧暴露对照组,D组:空气暴露对照组.A、C组:高氧(95%)暴露后7 d,腹腔分别注射含5×105 MSC的磷酸盐缓冲液(PBS)、单纯的PBS 50 μl,B、D组:空气暴露后7 d,腹腔分别注射含5×105 hMSCs的PBS、单纯的PBS 50 μl.注射后3 d处死全部动物取肺组织,ELASA法检测肺组织匀浆TNFα、TGFβ1水平;免疫组织化学方法检查肺组织BrdU积分情况,HE染色观察肺组织学形态学结构,做辐射状肺泡计数(RAC);RT-PCR方法检测各组肺组织Alu序列表达情况.结果 (1)A、B、C、D 4组TNFα水平分别为142.933±24.017,79.033±11.573,224.088±41.915,76.500±10.373(F=59.970,P=0.000);而TGFβ1水平分别为1726.484±91.086,1530.359±173.441,2047.717±152.057,1515.777±131.049(F=24.977,P=0.000).(2)RAC值分别为11.145±1.331,13.941±0.985,9.595±0.672,14.819±1.080(F=43.234,P=0.000).(3)RT-PCR检测显示A、B组均有Alu序列表达,而C、D组均未见Alu序列表达.免疫组织化学显示A、B组均有BrdU阳性染色细胞,BrdU积分分别为0.230±0.026,0.190±0.015,t=3.769,P=0.002;C、D组均未见阳性染色细胞.结论 新生大鼠腹腔注射hMSC后肺组织有hMSCs定植,且与暴露的条件相关;hMSCs可改善新生大鼠因高氧引致的肺组织损伤.     

高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠肺组织中lncRNA表达谱的变化

目的:分析长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)在高氧诱导支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasi,BPD)小鼠模型肺中表达谱的变化?方法:构建高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠模型,利用lncRNA芯片技术检测正常小鼠肺及BPD小鼠肺组织中lncRNA表达谱的变化,经过对原始数据进行预处理,筛选出差异表达的lncRNA?结果:与对照组相比,模型组差异表达的lncRNA(差异倍数≥2倍且P < 0.05)共1 769条,其中882条上调,887条下调;5倍以上上调的共140条,下调的共71条;10倍以上上调的共28条,下调的有2条?结论:高氧诱导BPD发生时,肺组织中lncRNA的表达谱发生了显著变化;这些差异表达的lncRNA,可能参与了BPD发生?发展过程?     

晚期糖基化终末产物受体与肺发育及肺损伤

晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end,RAGE)是细胞表面分子免疫球蛋白超家族的成员之一.作为模式识别受体,它可与多种不同的配体结合.在正常生理状态下,RAGE在大多数组织中一般呈低水平表达,病理状态下其表达上调;而在肺部的Ⅰ型上皮细胞有较高水平的基础表达,表明其在肺上皮细胞的增殖和分化及保持肺内环境稳态中起重要作用.RAGE在肺部的正常表达遭到破坏可导致多种肺部疾病,如急慢性肺损伤等.它的可溶性形式sRAGE,作为一种诱饵受体,已被证实可作为肺泡Ⅰ型上皮细胞损伤的重要标志物,说明RAGE在肺的生物学行为中起着重要的作用,并且可能成为肺损伤性疾病治疗的靶点.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对高氧暴露新生大鼠的影响

目的探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对高氧引起的新生大鼠肺损伤的干预作用。方法 32只大鼠随机均分为四组:95%氧浓度+GM-CSF 9μg/kg(A)组、GM-CSF9μg/kg(B)组、95%氧浓度+生理盐水(C)组和生理盐水(D)组。7d后计算肺湿质量与干质量比(W/D),检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数量、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)及白细胞介素8(IL-8)水平,RT-PCR检测肺组织中MCP-1mRNA表达,HE染色进行肺损伤病理评分。结果与C、D组相比,A、B组肺损伤评分及W/D、BALF中白细胞和中性粒细胞计数、MCP-1及IL-8水平、MCP-1mRNA表达均明显增加(P<0.05);除MCP-1水平及其mRNA表达外,A组上述各指标与B组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GM-CSF对高氧暴露引起的新生大鼠肺损伤具有保护作用,这可能与损伤部位炎症反应受抑制有关。     

低氧诱导因子对胃食管反流小儿并发反流性食管炎的诊断作用

目的研究低氧诱导因子对胃食管反流小儿并发反流性食管炎的诊断作用。方法选取我院2015年4月至2016年4月收治的43例胃食管反流并发反流性食管炎患儿纳入研究对象,设为A组;另外选取43例体检健康儿童纳入研究对象,设为B组。对比两组基础资料:性别、年龄、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)及实验室指标[低氧诱导因子2α(HIF-2α)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)],另外利用ROC曲线分析HIF-2α、HIF-1α、PPAR-γ诊断小儿胃食管反流并发反流性食管炎的价值。结果两组性别、年龄、SBP、DBP对比差异无统计学意义(P 0. 05),A组HIF-2α、HIF-1α、PPAR-γ水平显著高于B组,差异有统计学意义(P 0. 05); HIF-2α、HIF-1α、PPAR-γ的ROC曲线下面积分别为0. 969、0. 947、0. 951。结论胃食管反流并发反流性食管炎患儿体内HIF-2α、HIF-1α、PPAR-γ水平呈高表达,经ROC分析HIF-2α、HIF-1α、PPAR-γ检测可能为该疾病的诊断提供帮助,临床诊断中应重视。     

人脐带间充质干细胞对急性肺损伤大鼠的血清炎性因子及肺组织TRB3 mRNA表达

为了研究人脐带间充质干细胞对急性肺损伤大鼠的血清炎性因子及肺组织TRB3 mRNA表达的影响。我们将60只成年SD大鼠分组造模后,治疗组予以气管内滴注人脐带间充质干细胞悬液治疗。用ELISA法测定三组肺组织白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TGF-α)水平,实时荧光定量PCR检测肺组织TRB3 mRNA表达量,称量计算大鼠肺组织湿/干质量比。研究发现应用干细胞治疗后,肺组织内IL-6、IL-10、TGF-α水平显著降低,TRB3 mRNA表达量也降低,肺组织湿/干质量降低,水肿明显缓解。说明人脐带间充质干细胞可有效降低急性肺损伤大鼠的血清炎性因子及肺组织TRB3 mRNA表达水平,并减少肺组织湿/干质量比。