NYGGF4基因过表达对成熟脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响

目的 探讨NYGGF4基因过表达对成熟3T3-L1脂肪细胞线粒体形态及动力学的影响.方法 以3T3-L1前体脂肪细胞为载体,建立NYGGF4基因稳定过表达细胞株,以空载质粒转染的细胞为对照,将前体脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞.采用透射电镜观察成熟脂肪细胞的线粒体形态,采用荧光定量PCR技术检测成熟脂肪细胞中线粒体融合基因(Mfn)1 mRNA、Mfn2 mRNA、线粒体动态相关基因(Drp)1 mRNA的表达水平.采用Western blot方法检测Mfn1蛋白、Mfn2蛋白、Drp1蛋白的表达水平.结果 1.电镜观察发现NYGGF4基因过表达的成熟脂肪细胞线粒体体积变小、数量明显减少,线粒体嵴断裂、减少、消失,部分线粒体肿胀,甚至呈空泡状;对照组成熟脂肪细胞的线粒体形态基本正常,线粒体嵴清晰可见,线粒体无明显肿胀、皱缩.2.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞Mfn1 mRNA及Mfn1蛋白表达水平均显著高于对照组.3.NYGGF4基因过表达成熟脂肪细胞的Mfn2 mRNA、Drp1 mRNA及相应蛋白表达水平与对照组比较差异均无统计学意义.结论 在3T3-L1成熟脂肪细胞中,NYGGF4基因过表达可导致线粒体形态发生变化、数量减少,同时上调Mfn1 mRNA和Mfn1蛋白表达水平,提示NYGGF4基因在成熟脂肪细胞中过表达能影响细胞线粒体形态及动力学.     

子痫前期患者胎盘组织AHSG基因mRNA及蛋白表达与胰岛素抵抗的关系

目的 探讨子痫前期患者胎盘兰α2-HS-糖蛋白(AHSG)基因mRNA及蛋白表达与胰岛索抵抗的关系.方法 检测36例正常是月妊娠妇女(A组)和24例轻度子痫前期患者(B组)及17例重度子痈前期患者(C组)剖宫产前空腹血及新生儿脐血AHSG、血糖、胰岛素水平,采用RTPCR、Western blot法测定胎盘纰织中AHSG基因mRNA及篮蛋白表达水平.结果 B、C组新生儿脐血AHSC-水平均显著高于A纽(P＜0.01).C组新生儿脐血胰岛索、血糖水平量著低于A组(P＜0.05).A、B、C三组胎盘组织中AHSG基因mRNA表达水平分别为0.57±0.17、0.64±0.14、1.32±0.38,C组显著高于B、A组(P＜0.05).A、B、C三组胎盘组织中AHSG蛋白表达水平分别为0.28±0.11、0.30±0.10、0.58±0.10,C组显著高于A组和B组(P＜0.05).结论 子痫前期患者新生儿脐血AHSG水平显著高于正常足月妊娠组新生儿.重度子痫前期患者胎盘组织中AHSG基因mRNA及蛋白表达水平显著增高,胰岛素抵抗在子痫前期发病中有重要作用.     

HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗小鼠乳腺癌的研究

目的:探讨HSV-TK/GCV自杀基因系统对小鼠乳腺癌细胞系MA782/5S-8102形成肿瘤的体内杀伤作用及其产生的旁观者效应。方法:体内实验分动物致瘤组、抑瘤实验组和治疗实验组。分别按实验组别要求接种5.0×106细胞/只于BALB/C小鼠的右腋窝皮下,观察各组肿瘤形成及肿瘤治疗情况并统计各组生存期。治疗结束后将标本制成石蜡切片进行病理学分析,RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中的表达情况。统计学处理采用SPSS软件进行完全随机的方差分析(ANOVA)。结果:实验结果显示小鼠成瘤率为100％。丙氧鸟苷(ganciclovir,GCV)可明显抑制MA782/5S-8102/TK细胞在BALB/C小鼠体内的肿瘤形成。经GCV治疗后,MA782/5S-8102/TK组和混合细胞组的肿瘤体积分别较对照组肿瘤体积缩小约36.7％和28.6％(均P<0.001);生存期也明显延长(P<0.001);RT-PCR检测HSV-TK基因在肿瘤组织中有表达。实验组肿瘤组织与对照组相比存在明显的病理学改变。结论:逆转录病毒可介导HSV-TK基因转入小鼠乳腺癌细胞MA782/5S-8102并获稳定表达,HSV-TK/GCV自杀基因系统在体内对乳腺癌细胞有杀伤作用,且存在明显的旁观者效应。     

hsa-miR-100的生物信息学分析

目的 对hsa-miR-100进行靶基因、功能预测等生物信息学分析,为深入研究hsa-miR-100功能提供理论和试验基础.方法 利用Pubmed检索miRNA-100相关文章,通过miRBase、NCBI、UCSC Browser等在线工具分析hsa-miR-100序列,应用miRanda、TargetScan及PicTar预测hsa-miR-100靶基因,结合已证实的靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析.结果 hsa-miR-100与多种肿瘤发生、发展有关,其序列在各物种间具有高度保守性.hsa-miR-100靶基因功能富集于基因沉默、染色质沉默、细胞生物合成负性调节等(P<0.01),涉及肿瘤信号通路、溶酶体信号通路、凋亡信号通路等信号转导通路(P<0.05).结论 hsa-miR-100可能参与肿瘤发生相关的生物学过程.     

LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响

目的观察LYRM1基因过表达对3T3-L1脂肪细胞线粒体代谢的影响。方法体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,分别构建LYRM1基因过表达细胞株(LYRM1-pcDNA3.1/myc-His B)和空载对照细胞株(pcDNA3.1/myc-His B);实时定量RT-PCR验证转染情况;RT-PCR检测诱导分化成熟后的线粒体代谢酶HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C基因表达水平。结果 RT-PCR结果证实LYRM1质粒转染成功;与空载对照组比较,LYRM1过表达组HKI,ACC,CS,CPT1和Cyc-C mRNA表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论 LYRM1基因过表达下调了3T3-L1脂肪细胞中线粒体的代谢关键酶基因表达水平,可能参与调节脂肪细胞线粒体的代谢。     

livin基因在卵巢癌细胞中的表达及其意义

摘要：目的：探讨凋亡抑制基因livin在卵巢癌细胞中的表达及其生物学意义。 方法：收集32例卵巢癌患者癌组织及相应的癌旁组织、细胞培养卵巢癌细胞系A2780,用实时荧光定量PCR和western blot分别检测组织中livin基因的mRNA和蛋白质表达;MTT法检测A2780细胞的生长率;流式细胞术检测A2780细胞的凋亡率。 结果： livin mRNA和蛋白质表达在卵巢癌组织中明显高于癌旁组织（t=6.98,P<0.01;t=5.12,P<0.01）;与对照组相比,转染livin siRNA组卵巢癌细胞的生长率显著减少（χ²=77.21,P<0.01）,细胞凋亡率呈明显增高（χ²=15.68, P<0.01）。 结论:livin在卵巢癌的发生、发展中起重要的作用,可能成为卵巢癌治疗的新分子靶点。     

中心静脉管在超声引导下经皮穿刺置管引流术中的应用

目的:探讨中心静脉管在超声引导下治疗性经皮穿刺置管引流术中的应用价值。方法:对40例住院患者41个体内间隙、脏器或腔道发生的含液性病变,行超声引导下经皮穿刺置中心静脉管引流术。结果:41例次均一次穿刺成功,无一例并发症发生。结论:超声引导下经皮穿刺置中心静脉管引流术,具有操作简便、微创、价廉、安全有效等特点,值得在临床推广应用。     

磁性隐形阿霉素脂质体的制备及其对SKOV-3细胞影响初步研究

目的制备磁性隐形阿霉素脂质体,对其理化性质及其热疗后对SKOV-3细胞的影响进行评价。方法使用pH梯度法制备磁性隐形阿霉素脂质体,通过透射电镜观察其形态,通过紫外分光光度计测试其包封率,差示扫描量热仪测定其相变温度,MTT及流式细胞仪测定凋亡率。结果不同脂质体粒径在80-150nm间,包封率达到76%,相变温度为42.3℃,MTT及流式的结果均显示热疗对SKOV-3细胞的杀伤作用显著高于对照组。结论磁性隐形阿霉素脂质体包封率较高,粒径较小,对SKOV-3具有显著影响。     

生物信息学预测has-miR-26b的作用靶标及功能

目的通过生物信息学预测hsa-miR-26b的靶基因,进一步分析其潜在功能,为其后续功能研究提供理论依据。方法用pubmed、谷歌(google)等工具检索hsa-miR-26b相关文献;用miRbase、NCBI、UCSC Browser和Promoter scan等在线工具分析hsa-miR-26b序列及所在基因组特征;用TargetScan、PicTar及miRanda预测hsa-miR-26b的靶基因;通过功能富集分析(GOanalysis)和信号转导通路富集分析(Pathway analysis),预测所得靶基因和已证实的靶标基因。结果研究证实hsa-miR-26b与神经发育、心肌肥大及各种肿瘤发生、发展有关;hsa-miR-26b位于CTDSP1基因内含子内,但可能具有与该基因不同的启动子;3种方法预测结果取交集获得可能靶标基因33个,合并已知靶标基因14个;hsa-miR-26b靶基因主要参与钠离子转运、溶酶体组织和生物形成、抑制细胞增殖、转运等生物学过程,涉及Notch、氨基糖类代谢、ABC转运子、VEGF及TGF-β等信号转导通路。结论 hsa-miR-26b的功能较为广泛,与发育、代谢等密切相关。     

对氧磷酶-1基因多态性与南京地区脑梗死发病风险的关联研究

目的探讨对氧磷酶-1(paraoxonase 1,PON1)基因多态性位点rs705381、rs854572、rs3735590、rs854571和rs662与南京地区人群脑梗死发病的相关性。方法 Massarray SNP分型技术检测并分析292例脑梗死患者和292例健康人群中上述5个多态性位点的基因型和频率分布;AU5400生化分析仪检测上述人群的常规生化指标;二元非条件Logistic回归模型分析上述位点不同基因型与脑梗死发病风险的相关性。结果血压、空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、糖化血红蛋白(Hb A1C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、C反应蛋白(CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)的表达异常与脑梗死相关(P均0.05)。PON1基因4个多态性位点(rs705381、rs854572、rs3735590和rs854571)在脑梗死患者和健康人群间的基因型频率分布差异无统计学意义(P均0.05),而脑梗死患者PON1基因rs662位点的CT(52.4%vs 41.44%,P0.05,校准OR=1.62,95%CI=1.06~2.49)和CT/TT(65.41%vs 56.16%,P0.05,校准OR=1.49,95%CI=1.00~2.25)基因型频率分布明显高于健康人群,但与上述临床指标无明显的相关性。结论 PON1基因rs662位点的多态性可能是南京地区脑梗死发病的遗传易感因素。