nNOS参与OGD介导的促神经干细胞增殖效应

目的：体外研究脑缺血促神经发生的机制。 方法： 体外培养神经干细胞（neural stem cells,NSCs）与海马神经元,并采用氧糖剥夺模型（oxygen and glucose deprivation, OGD）模拟在体缺血,通过RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学、酶活性测定、亚硝酸盐/硝酸盐（nitrite/nitrate,NOx） 含量测定等多种方法研究神经干细胞的生物学行为以及介导这种效应的分子机制。结果： （1）OGD通过直接和间接（神经元）作用增加神经干细胞中BrdU＋ 细胞比例。（2）OGD上调神经干细胞中神经元型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase,nNOS）并下调神经元中nNOS,且都有利于神经干细胞增殖。（3）采用nNOS基因敲除小鼠来源的神经干细胞以及神经元（用于共培养）进行实验,发现OGD并不能升高神经干细胞中BrdU＋ 细胞比例。 结论：神经干细胞和神经元中nNOS水平变化共同参与了OGD诱导的促神经干细胞增殖效应。     

脑通胶囊对急性血瘀证大鼠血液流变学和家兔血小板聚集的影响

目的 研究脑通胶囊对急性血瘀证大鼠血液流变学和家兔血小板聚集的影响.方法 经皮下注射大剂量肾上腺素加冰水冷浴造大鼠血瘀证模型,观察脑通胶囊对急性血瘀证大鼠血液流变学的影响;采用家兔血小板聚集试验,研究脑通胶囊抗血栓形成的作用.结果 脑通胶囊可明显降低急性血瘀模型大鼠血液流变学主要指标,并可明显抑制家兔血小板聚集.结论 脑通胶囊可明显改善急性血瘀证大鼠血液流变学,同时具有抗血栓形成的作用.     

脑通胶囊对脑缺血大鼠软脑膜微循环的影响

目的：探讨脑通胶囊对脑缺血大鼠软脑膜微循环的影响。方法：采用低压低灌方法复制大鼠全脑缺血模型,应用MCIP微循环图像处理系统,通过开放式颅窗观察脑通胶囊对软脑膜微循环障碍的影响。结果：脑通胶囊能扩张软脑膜微循环微血管,加快微循环血流速度。结论：脑通胶囊具有改善软脑膜微循环,抗脑缺血作用。     

氧糖剥夺引起MF-CA3通路突触传递LTD现象及其机制研究

目的:观察氧糖剥夺引起的MF-CA3通路突触传递的长时程抑制(long-term depression, LTD)现象,并探讨其分子机制?方法:选择出生后2~3周的Sprague Dawley(SD)乳大鼠,制备海马脑片,通过刺激苔藓纤维,采用膜片钳的方法记录突触后电流?氧糖剥夺15 min后,观察突触传递的变化情况?分别采用犬尿喹啉酸阻断α-氨基羟甲基恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole-propionic acid,AMPA)受体?LY341495阻断代谢型谷氨酸受体﹑BAPTA螯合细胞内钙离子,观察对LTD的可能影响?结果:①氧糖剥夺15 min能引起MF-CA3通路AMPA受体介导的突触电流减弱,产生LTD现象;②若氧糖剥夺过程中运用阻断剂阻断AMPA受体的激活,洗脱后并不影响LTD的产生,而阻断代谢型谷氨酸受体可以使AMPA受体电流的LTD现象消失;③除去外液中的钙离子或用BAPTA螯合细胞内的钙离子均能使LTD现象消失?结论:氧糖剥夺引起MF-CA3通路上AMPA受体介导的突触电流持续减弱,呈现LTD现象?这种LTD现象依赖于代谢型谷氨酸受体的激活及胞内外钙离子浓度升高,但不依赖氧糖剥夺过程中AMPA受体的激活?     

牛磺酸对氧化应激损伤的神经保护作用

目的:探讨牛磺酸对过氧化氢(H2O2)引起的神经元损伤的保护作用?方法:采用不同浓度的H2O2处理神经元,制备体外氧化应激模型,造模前24 h分别给予5?15?25 mmol/L牛磺酸预处理?采用特异性荧光探针DCFH－DA检测神经元活性氧自由基水平,检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率反映神经元损伤程度,用免疫印迹法检测脑源性营养因子(brain－derived neurotrophic factor,BDNF)及突触相关蛋白的表达水平?结果:与Control组比较,不同浓度的H2O2(25?50?100 μmol/L)均能使LDH向胞外释放增多(P < 0.05),15?25 mmol/L的牛磺酸均能减少H2O2引起的LDH的释放(P < 0.05)?100 μmol/L H2O2使神经元胞内活性氧水平升高,仅25 mmol/L的牛磺酸能抑制H2O2诱导的胞内活性氧的增多(P < 0.05)?100 μmol/L H2O2处理神经元导致BDNF?突触相关蛋白Synapsin和Spinophilin表达水平下降,给予25 mmol/L的牛磺酸能部分逆转H2O2诱导的蛋白水平的下降(P < 0.05)?结论:牛磺酸能够减轻H2O2引起的神经元损伤,具有较好的神经保护作用?     

RGD肽修饰重组高密度脂蛋白载药纳米粒的制备和表征以及肿瘤细胞对其摄取作用

目的：制备和表征RGD肽修饰的重组高密度脂蛋白（RGD—rHDL）载药纳米粒,考察肿瘤细胞对其摄取作用。方法：合成RGD与载脂蛋白AI（ApoAI）的偶联物（RGD—ApoAI）,并以藤黄酸（GA）作为模型药物,采用薄膜分散法制得GA脂质体（LP—GA）,再将RGD—ApoAI与LP—GA共孵育,制备载有GA的RGD—rHDL纳米粒（RGD—rHDL—GA）;随后,对RGD—rHDL—GA进行表征,且采用荧光标记示踪法,通过RGD—rHDL-香豆素-6来考察人肝癌细胞HepG2对载药RGD—rHDL纳米粒的摄取作用。结果：制备的RGD—rHDL—GA呈现规则圆整的类球形,粒径分布均一[（110,70±3．25）nm],Zeta电位为（-39．21±0．10）mV,包封率为（92．20±0．28）％,载药量为（9．03±0．75）％,且其体外释药缓慢,稳定性良好;RGD—rHDL-香豆素-6的肿瘤细胞摄取率明显高于rHDL-香豆素-6。结论：rHDL经RGD修饰后可有效促进所载药物进入肿瘤细胞,提高其肿瘤靶向性。     

脑卒中前敲减HDAC2改善光照脑缺血模型小鼠的行为学缺陷

目的：探讨脑卒中前蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)对于光诱导血栓形成性脑缺血模型小鼠行为学缺陷的作用。方法：通过微量给药系统将腺相关病毒AAV-CAG-EGFP-Cre(2 μL)注射至HDAC2flox/flox鼠的运动皮层用以敲减HDAC2,通过免疫荧光以及免疫印迹(Western blot)分析确证病毒AAV-CAG-EGFP-Cre与对照病毒AAV-CAG-EGFP的表达。7 d后进行光诱导血栓形成性脑缺血造模,并于造模前第3天以及造模后第8天采用网格实验和圆筒实验分别检测造模前后AAV-CAG-EGFP-Cre组与AAV-CAG-EGFP组行为学的改变。结果：病毒AAV-CAG-EGFP-Cre相较于对照AAV-CAG-EGFP能特异性地敲减HDAC2,免疫荧光表现为GFP与HDAC2双阳性细胞数减少,Western blot显示针孔周围区HDAC2表达水平降低(P＜0.05)。脑缺血前后的行为学检测表明病毒干预后,HDAC2的下调对缺血前行为学无影响,但显著降低了脑缺血后网格实验的失足率(P＜0.001)与圆筒实验的不对称指数(P＜0.001),促进了行为学改善。结论：脑卒中前通过重组病毒敲减HDAC2,可以改善脑卒中后小鼠行为学缺陷。     

抗Eppin抗体抑制人精子活性运动及相关机制

目的：阐明抗附睾蛋白酶抑制剂（ Eppin ）抗体抑制人精子动力及分析相关机制。方法：将正常男性精子经过percoll分选后分为7组：空白对照组,抗体对照组与40μg · ml -1抗兔多克隆抗体孵育,其余5组分别与不同浓度抗Eppin抗体（浓度分别为2.5、5、10、20和40μg · ml -1）共同孵育4 h后进行精子动力测定,线粒体膜电位（Δψ）、ATP浓度及电镜镜检检测。结果：随着抗Eppin抗体浓度的增加,精子活力下降并呈浓度依赖趋势;当抗Eppin抗体浓度超过5μg · ml-1,精子Δψ及产生ATP浓度显著下降（ P＜0.05）;部分精子线粒体正常环形结构发生异常改变,亚线粒体膜变薄甚至消失。结论：抗Eppin抗体与人精子共孵育后精子线粒体功能及超微结构异常,导致精子活性运动显著下降。     

前胡丙素对两肾两夹肾性高血压大鼠心脏重构及心功能的影响

目的研究前胡丙素长期灌胃给药对两肾两夹肾性高血压大鼠心脏、心功能及左室顺应性的影响。方法制作两肾两夹肾性高血压大鼠模型,前胡丙素20 mg.kg-1.d-1,连续灌胃给药9 wk,用离体大鼠工作心脏灌流法检测心功能及左室顺应性,W oessner等报道的方法测定心肌组织羟脯氨酸含量。结果与假手术对照组相比,肾性高血压左室肥厚(LVH)组大鼠CF/HWW和CO/HWW降低29.2%和38.5%,LVSP、-dp/dtm ax分别降低22.8%和43.2%;LV-EDP和T值增高172.9%和187.1%,LVEDP-V曲线左移上抬,左室肌胶原含量增加38.9%。前胡丙素组CF/HWW和CO/HWW比LVH组分别增加23.5%和37.2%,LVSP值和-dp/dtm ax负值较LVH组增加16.0%和42.7%,LVEDP和T值降低38.9%和39.0%,左室LVEDP-V曲线接近正常组水平,左室肌胶原含量降低18.9%,其作用与硝苯地平相似。结论前胡丙素可明显改善两肾两夹肾性高血压大鼠心脏舒张功能,改善心肌顺应性,同时也可改善心脏收缩功能,其作用可能是通过扩张冠状动脉,改善心肌缺血,降低心肌胶原含量而实现。