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1.
目的:探讨辛伐他汀(simvastatin)预处理对Pringle手法肝细胞癌切除术后肝功能的影响及其机制。方法:73例肝细胞癌患者随机分为对照组(n=35)和Simvastatin组(simvastatin预处理,n=38,患者术前3 d按20 mg/d口服simvastatin)。分别于手术开腹后和关腹前收集部分肝组织作为标本,于术前和术后第1天采集患者血清。测定血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)和白蛋白(albumin,ALB)以评估肝细胞损伤;逆转录聚合酶链反应(RT?PCR)分析炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)?1、IL?6、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,INOS)及肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)?α水平。试剂盒检测血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;Western blot检测内质网应激蛋白(C/EBP?homologous protein,CHOP)水平。结果:Simvastatin组术后第1天血清ALT、AST和TBIL水平显著低于对照组(P < 0.05);RT?PCR提示Simvastatin组IL?1、IL?6、INOS及TNF?α水平较对照组明显降低(P < 0.05)。Simvastatin组血清MDA水平明显低于对照组(P < 0.05);SOD水平显著高于对照组(P < 0.05)。Western blot显示Simvastatin组CHOP表达水平较对照组减少。结论:对于肝细胞癌患者,辛伐他汀预处理可有效缓解Pringle手法肝部分切除术后的肝功能损伤,机制可能与抑制氧化应激和内质网应激水平有关。  相似文献   
2.
目的:探讨PKM2对肝癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响及其机制。方法:定量PCR、Western blot和免疫组化检测肝癌组织及肝癌细胞系(HepG2、Hep3B、Huh7和SMMC?7721)PKM2的表达;采用小干扰RNA(siRNA)抑制肝癌细胞PKM2表达,分析其对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响,并研究PKM2 siRNA对Hippo信号通路的影响。结果:定量PCR、Western blot和免疫组化显示PKM2在肝癌组织表达较癌旁组织表达明显升高,在肝癌细胞较肝细胞(L02)中表达明显升高;PKM2 siRNA可有效抑制肝癌细胞增殖、侵袭和迁移,进一步证实肝癌细胞中Hippo信号通路被抑制,PKM2 siRNA可有效提高Hippo信号通路活性,且抑制Hippo信号活性能明显逆转PKM2 siRNA抑制肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。结论:PKM2可能通过抑制LATS1和YAP磷酸化,进而抑制Hippo信号通路,促进肝癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。  相似文献   
3.
目的应用腺相关病毒(AAV)-规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9(CRISPR/Cas9)系统体外实验研究基因治疗威尔森氏症(WD)。方法选用2月龄雄性Toxic milk(TX)小鼠作WD模型,设计小向导RNA(sgRNA)并构建含有CRISPR元件的AAV载体质粒命名为pAAV-sgRNA1、2、3,制备AAV,病毒滴度达1~4×1013 GC/ml;感染WD肝细胞,72 h后提取基因组DNA,聚合酶链反应(PCR)后测序检测基因编辑效率,筛选出其中活性最高者sgRNA1,构建相应的同源修复模板(HT)质粒命名为pAAV-HT,应用AAV-sgRNA1和AAV-HT共感染WD肝细胞,测序和T7E1酶切检测模板修复效率;用HT特异性引物行PCR,验证HT掺入。组间比较采用Student’s t检验。结果Sanger测序结果显示,sgRNA1在体外有最高的编辑效率[(20.2±2.3)%],与sgRNA2、3比较[(3.1±1.3)%、(14.6±2.0)%],差异有统计学意义(P<0.05)。进一步用HT进行基因修正,能检出特异性修正后的ATP7B基因;二代测序测序显示修复率为(7.9±2.7)%。结论AAV-CRISPR系统在体外可以达到较高编辑效率和修复效率。  相似文献   
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