PPARγ激动剂干预对激活星形胶质细胞Jaggedl的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动荆眦格列酮干预对激活星形胶质细胞产生Jaggedl的影响.方法 采用脂多糖(LPS)刺激纯化的星形胶质细胞,将不同梯度浓度毗格列酮(0.01,0.1,1.0,10.0μm)和转化生长因子β1(10 ng/ml)共刺激星形胶质细胞6h,提取细胞RNA.结果 吡格列酮呈浓度依存性抑制LPS激活星形胶质细胞中Jaggedl的mRNA表达(P<0.05).结论 吡格列酮抑制星形胶质细胞Jaggedl的产生,Jaggedl/Notch通路的激活可能随之减弱,有利于多发性硬化的髓鞘修复.     

热毒宁抗呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)作用体外实验研究

目的:研究中草药热毒宁注射液对呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)的抑制作用.方法:以病毒唑为阳性对照药,采用细胞培养技术,观察不同药物浓度及不同给药方式下RSV攻击后各组Hep-2细胞的病变效应(CPE),在此基础上采用MTT比色法,测定各组细胞的病毒抑制率.以CPE法计算药物的半数中毒浓度TC50,分别以CPE法及MTT法计算药物的半数有效浓度EC50及治疗指数TI,比较不同药物浓度及不同给药方式下热毒宁对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用效果.结果:热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为3.972g/L.预防给药方式、细胞外直接灭活及治疗给药方式均有抗RSV作用,其抗RSV的半数有效浓度(EC50)分别为0.428、1.160、1.189 g/L,治疗指数TI分别为9.28、3.42和 3.34,热毒宁对RSV的抑制作用存在着明显的量效反应关系.结论:热毒宁对RSV有直接灭活作用,对RSV侵入Hep-2细胞有阻断作用,对RSV在Hep-2细胞内增殖有抑制作用,相同浓度下,以预防作用更显著.     

逆转录病毒介导Fcy::Fur融合基因联合5-FC治疗胶质瘤的体内试验研究

目的构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒,用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究。方法扩增Fcy::Fur基因并构建Fcy::Fur基因重组逆转录病毒载体;载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建裸鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC,观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡。结果PCR法扩增出全长Fcy::Fur基因,经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体,载体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×106CFU/mL的逆转录病毒;转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC,转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制。FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体。结论AdE1CMVCD与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据。     

小鼠脑内星形胶质细胞体外培养方法的优化

目的： 优化小鼠脑内星形胶质细胞的体外培养方法,为星形胶质细胞的功能研究奠定实验基础。 方法： 取新生0～1 d的C57BL/6乳鼠大脑皮质,胰酶消化结合机械吹打方法,分离皮质细胞,制成细胞悬液并差速贴壁处理,待细胞接种24 h轻柔换液,以后每隔2～3 d换液,且每次换液前手动振荡洗涤2次,传代3次后,行胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）免疫细胞化学染色及免疫荧光染色鉴定。 结果： 经过原代及传代培养,获得形态典型、纯度在95%以上的星形胶质细胞。结论： 优化后的体外培养星形胶质细胞方法,稳定有效,操作简便易行,并可获得高纯度的星形胶质细胞。     

转化生长因子β1诱导星形胶质细胞产生Jaggedl的初步探讨

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对激活星形胶质细胞产生Jagged1基因的影响。方法对脂多糖(LPS)激活的星形胶质细胞,给予TGF-β1培养24 h,提取星形胶质细胞mRNA,观察各个时间点(0、6、12及24 h)Jagged1 mRNA的水平。结果 TGF-β1促进星形胶质细胞产生Jagged1 mRNA,并随培养时间的延长,星形胶质细胞中Jagged1 mRNA水平逐渐衰减(P<0.05)。结论 TGF-β1能使激活的星形胶质细胞产生Jagged1 mRNA,可能通过Jagged1/Notch通路的激活导致髓鞘修复障碍。     

热毒宁注射液对人鼻病毒(N_(36))的体外抑制作用

目的：研究中草药热毒宁注射液对人鼻病毒（HRV，N36）的抑制作用。方法：以利巴韦林为阳性对照药，采用细胞培养技术及MTT比色法，观察在热毒宁干预下，人胚胎上皮细胞的病变效应（CPE）及吸收度值（A），计算各组细胞的病毒抑制率。比较不同药物剂量及不同给药方式下热毒宁对HRV的抑制作用效果。结果：热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为5．873g／L。预防、直接灭活及治疗给药方式下，CPE法测定的半数有效浓度EC50分别为0．576、0.836及0．640g／L，治疗指数（TI）分别为10．20、7．03及9、18；MTT法测定的EC50分别为0．551、2.310及1．230g／L，TI分别为10．66、2．54及4．78。结论：热毒宁对HRV（N36）有直接灭活及抑制增殖作用，对其感染靶细胞有阻断作用，且呈明显量效关系。热毒宁对HRV（N36）的抑制作用，以预防给药更明显。     

热毒宁注射液对腺病毒-3的体外抑制作用

目的:研究中草药热毒宁注射液对腺病毒-3(ADV_3)的抑制作用。方法:以阿昔洛韦为阳性对照药,采用细胞培养技术及MTT比色法,观察在热毒宁干预下,转染腺病毒E1A基因人胚肾上皮细胞(293细胞)的细胞病变效应(CPE)及光密度值(D),计算各组细胞的病毒抑制率。比较不同药物剂量及不同给药方式下热毒宁对ADV_3的抑制作用效果。结果:热毒宁注射液半数中毒浓度TC_(50)为15.58 g·L~(-1)。预防、直接灭活及治疗给药方式下,CPE法测定的半数有效浓度EC_(50)分别为1.452、1.321、1.193 g·L~(-1),治疗指数TI分别为10.73、11.79、13.06;MTT法测定的EC_(50)分别为2.356、1.494、1.144g·L~(-1),TI分别为6.61、10.43和13.62。结论:热毒宁对ADV_3有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,且呈明显量效关系。热毒宁对ADV_3的抑制作用,以预防给药更明显。     

人类疱疹病毒6型与口腔鳞癌发生的相关性研究及临床意义

目的研究人类疱疹病毒6型(HHV-6)感染与口腔鳞癌发生的相关性及其临床意义。方法运用巢式PCR技术,检测82例口腔鳞癌、25例癌前病变及40例正常对照人群唾液、血液、组织中HHV-6感染情况。结果正常对照组、癌前病变组、鳞癌组HHV-6在唾液中的检出率分别为45.0%、56.0%、72.0%,在血液中的检出率分别为22.5%、48.0%、57.3%,总阳性率为47.5%、56.0%、80.5%,趋势差异均具统计学意义(P<0.05);3组HHV-6检出率唾液普遍高于血液,在正常组和鳞癌组中差异具统计学意义(P<0.05)。鳞癌组癌组织中HHV-6检出率(78.95%)显著大于癌旁正常组织(10.53%),具统计学意义(P<0.01);随着鳞癌分化程度的降低,HHV-6的阳性率有下降的趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论唾液腺是HHV-6长期潜伏和增殖的部位,唾液是其主要的传播媒介;HHV-6的激活/再感染发生在黏膜病变的早期,其感染与口腔鳞癌的发生存在相关性,可能直接参与了细胞癌变的过程。     

川芎嗪防治被动型Hermann肾炎的实验研究

目的：探讨川芎嗪对SD大鼠被动型Hermarm肾炎(PHN)的蛋白尿、血肌酐、血栓素A2(TxA2)、前列环素I2(PGI2)的代谢产物——6-Keto-PGF1α及肾脏病变的影响。方法：给大鼠静脉注射兔抗鼠肾小管上皮抗原(Tub—Ag)的抗血清建立PHN模型，此后，每两天给大鼠腹腔注射川芎嗪直到第五周止。在此期间，定期用磺基水杨酸、苦味酸和放射免疫法分别测定大鼠蛋白尿、血肌酐、TxA2和6-Keto—PGF1α的含量，另用光镜、电镜和直接免疫荧光染色(兔IgG和鼠IgG)对其肾脏病理学变化进行检查。结果：用川芎嗪处理的PHN大鼠，其尿蛋白、血肌酐、尿液中TxA2和肾组织病变均较未处理的PHN大鼠明显减少或减轻i而尿液中的6-Keto-PGFlα则较未处理的PHN大鼠有所提高。结论：川芎嗪能减轻PHN大鼠的蛋白尿、血肌酐、TxA2和肾脏病变。提高6-Keto—PGF1α的水平。上述结果提示：川芎嗪能改善PHN大鼠TxA2和PGI2平衡，可用于膜性肾小球肾炎的防治。     

热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用

目的:研究中草药热毒宁注射液对流感病毒FM_1的抑制作用。方法:以利巴韦林为阳性对照药,采用细胞培养技术及四氮唑蓝(MTT)比色法,观察在热毒宁干预下,受FM_1感染的犬肾传代细胞(MDCK细胞)的病变效应(CPE)及光密度值(D),计算各组细胞的病毒抑制率。比较不同药物剂量及3种不同给药方式(预防给药、直接灭活及治疗给药)下热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用。结果:热毒宁注射液半数中毒浓度(TC_(50))为10.11g·L~(-1)。预防给药、直接灭活及治疗给药方式下,CPE法测得其抗流感病毒FM_1的半数有效浓度(EC_(50))分别为0.625、0.725、0.629 g·L~(-1),治疗指数(TI)分别为16.17、13.94、16.07;MTT比色法测得其抗流感病毒FM_1的EC_(50)分别为1.135、0.770、0.661 g·L~(-1),TI分别为8.91、13.12和15.29。3种方式给药,MTT法测定时,热毒宁对流感病毒FM_1的抑制作用无差异;CPE法测定时,热毒宁浓度在0.812 51 g·L~(-1)及以上对流感病毒FM_1的抑制作用无差异。结论:热毒宁对流感病毒FM_1有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,且呈明显量效关系。