非小细胞肺癌手术前后血清肿瘤标志物的监测意义

目的探讨在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者手术前后检测血清肿瘤标志物CA125,CEA和NSE的临床意义。方法对50例不同病理类型NSCLC患者(病例组)术前及术后7天、1个月、3个月进行血清肿瘤标志物CA125、CEA和NSE的测定,并与30例健康人群(对照组)做对照分析。结果肺腺癌患者术前CEA的阳性率明显高于鳞癌患者术前(P0.05),而CA125和NSE则差异不明显(P0.05)。病例组术前血清肿瘤标志物CA125,CEA,NSE测定值均明显高于健康对照组(P0.05)。病例组术后7天、1个月、3个月血清肿瘤标志物CA125、CEA、NSE测定值均低于术前水平且呈下降趋势。结论监测术后血清肿瘤标志物CA125、CEA、NSE对于判断肺癌手术效果以及及时掌握病情变化非常重要。     

胰岛β细胞中PP2ACα基因失活小鼠模型的建立及初步表型分析

目的 :建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,对其表型进行初步观察。方法 :通过Ins2-Cre小鼠与PP2ACα^flox/flox小鼠交配,获得胰岛β细胞特异性失活PP2ACα基因小鼠(PP2ACα^flox/fIox:Ins2-Cre)。PCR和Western blot鉴定PP2ACα基因第二外显子敲除小鼠（KO）。4月龄时行腹腔注射葡萄糖耐量试验（IPGTT）,以PP2ACα^flox/flox小鼠为对照。结果 :1PP2ACα转录本在KO小鼠短于对照小鼠;2KO小鼠胰岛中PP2AC蛋白水平较对照小鼠显著下降（P<0.05）;3IPGTT结果显示:4月龄KO小鼠30、60、120 min时血糖明显高于对照小鼠（P<0.05）。结论:成功建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,4月龄PP2ACα^flox/fIox:Ins2-Cre小鼠糖耐量受损。     

胰岛 β 细胞中 PP2Acα 基因失活小鼠模型的建立与初步表型分析

摘要 目的：建立胰岛 β 细胞特异性失活 PPAcα 基因小鼠模型,对其表型进行初步观察。方法：通过 Ins2-Cre 与 PP2Acαflox/flox 小鼠交配,获得胰岛 ? 细胞特异性失活 PP2Acα 基因小鼠 (PP2Acαflox/fIox:Ins2-Cre)。PCR 和 Western Blot 鉴定 PP2Acα 基因第二外显子敲除小鼠 (KO)。4 月龄时行腹腔注射葡萄糖耐量试验 (IPGTT),以 PP2Acαflox/flox 小鼠为对照。结果：1,PP2Acα 转录本在 KO 小鼠短于对照小鼠。2,KO 小鼠胰岛中 PP2Ac 蛋白水平较对照小鼠显著下降。3,IPGTT 结果显示：4 月龄 KO 小鼠 30 min、60 min、120 min 时血糖明显高于对照小鼠 (P<0.05)。结论：成功建立胰岛 ? 细胞特异性失活 PPAcα 基因小鼠模型,4 月龄 PP2Acαflox/fIox:Ins2-Cre 小鼠糖耐量受损。     

Prkdc和Il2rg双敲除免疫缺陷小鼠的构建和初步应用

目的：构建NOD背景免疫缺陷小鼠,作为新的人源肿瘤异种移植(patient?derived xenograft,PDX)模型。方法：利用 CRISPR/Cas9技术获得NOD背景Prkdc和Il2rg双基因敲除小鼠,通过正常繁育得到能够稳定遗传的纯合子后代(命名为NYG 小鼠),流式细胞术检测小鼠外周血免疫细胞比例,移植接种新鲜肿瘤组织,观察记录肿瘤生长状况及HE染色观察传代PDX 肿瘤形态学特点。结果：NYG小鼠外周血小鼠无成熟的T细胞、B细胞和NK细胞表达,对移植的患者肿瘤组织几乎没有排斥反应,组织病理学表型及免疫系统未见明显异常。结论：成功构建NYG小鼠免疫缺陷小鼠,为肿瘤学基础理论及应用研究提供了新的PDX动物模型。     

人PI3KCG慢病毒载体的构建及其在乳大鼠原代心肌细胞中的表达和初步功能检测

目的:构建含有人磷脂酰肌醇3-激酶p110γ(phosphatidylinositol 3-kinase,catalytic subunit gamma,PI3KCG)基因的慢病毒载体,鉴定其在乳大鼠原代心肌细胞中的表达并作初步功能检测。方法:利用同源重组的方法构建含PI3KCG基因慢病毒载体质粒,测序鉴定后采用脂质体转染法同慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24 h和48 h荧光显微镜下观察阳性对照组中的绿色荧光蛋白的表达,同时PCR法鉴定重组PI3KCG慢病毒质粒转染293T细胞成功,收集72 h病毒上清。培养乳大鼠原代心肌细胞,分为对照组,缺氧/复氧组,空载体阳性对照组,PI3KCG实验组,PI3KCG+Ly294002组5组,将含PI3KCG慢病毒载体的病毒液转染心肌细胞,检测各组的细胞培养上清中的乳酸脱氢酶浓度,观察预转染PI3KCG基因对心肌细胞缺氧/复氧过程中的保护作用。结果:成功构建含有PI3KCG基因的慢病毒载体质粒,并在293T细胞中成功表达。与缺氧/复氧组比较,PI3KCG组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶水平明显降低(P<0.01);心肌细胞的存活率、搏动频率明显升高(P<0.01)。结论:PI3KCG慢病毒载体有望成为探讨PI3K/AKT信号通路激活在防止心肌细胞缺血再灌注损伤的有效工具。     

PC12细胞缺血预处理模型的建立及一氧化氮的保护作用

目的 以PC12细胞建立体外脑缺血预处理细胞模型,探讨NO在预处理脑保护中的作用.方法 建立缺血预适应的细胞模型,随机分为四组,每组五碟细胞.正常对照组:常氧、低糖(<1g/L)2%胎牛血清DMEM培养;缺血预适应组(IPC):预先氧糖剥夺(OGD)6 h,后经复灌和OGD处理;非缺血预适应组(NIPC):常氧、低糖低血清培养6 h,后经复灌和OCD处理;一氧化氮合酶抑制剂组(L-NAME):OGD预处理前30 min加L-NAME,OGD6 h,后经复灌和OGD处理.通过细胞MTT代谢率、乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞凋亡率来评判IPC模型是否建立,生化法观察各组一氧化氮合酶(NOS)活性变化.统计分析利用单因素方差分析,两两组间均数的比较用LSD法,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 与NIPC组比较,IPC组MTT代谢率明显增高(94.9%±15.1%,P<0.05),LDH释放量减少(279.1%±28.1%,P<0.01),细胞凋亡率降低;与对照组(100.0%±13.5%)比较,NIPC组及IPC组NOS活性均升高(190.0%±14.6%,P<0.01;126.10k±10.6%,P<0.01);流式检测结果显示,对照组、IPC组、NIPC组和L-NANE组引起的细胞凋亡率分别为5.90%,8.71%,18.62%及11.73%.结论 IPC减少PC12细胞缺糖缺氧损伤后细胞的死亡与凋亡,且NO参与了此保护机制,但并非唯一因素.     

赭曲霉毒素A分析方法研究进展

赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)是1种具有多种毒性的真菌毒素[1],广泛污染粮食和饲料[2],对人类和动物的健康及农业经济发展造成严重威胁[3]。OTA的检测方法正在不断发展,从灵敏度、准确性、重现性、简易性、批量性和可视性等各方面