靶向瘦素基因的siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的 通过构建慢病毒介导的靶向瘦素基因的小干扰RNA(siRNA),探讨瘦素对A549细胞增殖和凋亡的影响.方法 建立siRNA-a组、siRNA-b组及其各自阴性对照组和空白对照组(A549)5组细胞,分别于荧光显微镜下观察细胞5d和11d的生长情况.噻唑蓝(MTT)比色法测定空白对照组、siRNA-a组及其阴性对照组细胞1～6 d的生长情况,绘制生长曲线,比较各组细胞增殖差异.流式细胞仪分析各组细胞凋亡率,观察瘦素的siRNA对A549细胞凋亡的影响.RT-PCR和Western bloting方法检测各组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平.结果 siRNA-a细胞镜下形态基本正常,5d后荧光效率仍较高,感染稳定,但生长较阴性对照组及空白对照组细胞缓慢.siRNA-b细胞感染48 h后,镜下见细胞肿胀、变形,空泡出现,5d后见多量细胞碎片,凋亡小体形成,呈现凋亡状态,11d后可见细胞碎片,已近完全凋亡.MTT实验siRNA-a组细胞从第3天起生长比其他各组均缓慢(P＜0.01).流式细胞仪检测细胞凋亡率结果:siRNA-a组、siRNA-b组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组.RT-PCR和Western bloting结果 显示干扰组细胞瘦素mRNA和蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组明显下调.结论 慢病毒介导的siRNA能下调肺腺癌A549细胞瘦素基因的表达,从而抑制A549细胞增殖,促进其凋亡.由此可见,瘦素的siRNA有望成为肺腺癌基因治疗的新手段.     

儿童5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶C677T多态性与神经管畸形易感性关系的研究

目的采用Meta分析的方法,探索5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)和神经管畸形(NTDs)之间的关系。方法在中国知网和Pubmed等国内外数据库中,根据检索标准,收集儿童MTHFR C677T多态性与NTDs相关的文献,应用Stata 11.0软件对各文献进行数据分析。结果共9篇文献符合纳入标准。分析后发现,在TT/CC、CT+TT/CC和TT/CT+TT遗传模式下,OR值分别为1.78(95%CI1.12,2.81)、1.28(95%CI1.07,1.55)和1.73(95%CI 1.07,2.78)。结论 MTHFRC677T多态性与NTDs之间存在显著关联。儿童MTHFR基因C677T多态性是神经管畸形发病的一个危险因素。     

高校大型仪器的科学管理与高效运行

针对我国高校大型仪器开放共享平台的建设和运行管理中出现的问题,从平台建设?制度建设?实验队伍建设以及保证仪器高效运行几个方面进行分析?为高校进一步提高大型仪器的开放共享,实现高效运行,提高为教学科研服务的水平提供理论支持?     

氧化应激下黑素细胞自噬相关基因差异表达分析

目的 探讨过氧化氢(H2O2)对黑素细胞自噬的影响及可能的调节机制.方法 取对数生长期健康人黑素细胞,分为空白对照组(不予任何处理)、阳性对照组(100 nmol/L西罗莫司处理)和实验组(体积分数为10-7～10-3的H2O2处理),处理4h后,使用CCK8法、流式细胞仪分别检测各组黑素细胞活性及凋亡率.吖啶橙染色检测自噬小泡,透射电镜下观察自噬小体,Western印迹检测自噬特异性蛋白Beclin 1、微管相关蛋白轻链3B(LC3B).最后采用包含84个自噬相关基因的RT2 Profiler PCR Array筛选自噬相关的差异表达基因.结果 黑素细胞分别经10-3、5×104、10-4、5×10-5、10-5、5×10-6、10-6H2O2处理后,细胞增殖活性及凋亡率与空白对照组相比差异均有统计学意义(F值分别为286.95、301.23,均P＜0.05),且随H2O2体积分数升高,增殖活性降低,凋亡率升高.除5×l0-6 H2O2组分别与10 5、10-6 H2O2组间相比细胞凋亡率差异无统计学意义外,上述各H2O2组间两两比较,黑素细胞增殖活性及凋亡率差异均有统计学意义(P＜0.05).吖啶橙染色及电镜观察发现,10-5 H2O2、10-6 H2O2和西罗莫司处理的黑素细胞中有自噬小体形成.Western印迹显示,10-5H2O2、10-6H2O2和西罗莫司组黑素细胞Beclin 1表达量和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比率均较空白对照组显著升高(P＜0.05).RT2 Profiler PCR Array结果显示,与空白对照组相比,10-5 H2O2组、10-6H2O2组和西罗莫司组中ATG12、ATG3、ULK1、PIK3CG、PTEN、PIK3C3表达均显著上调,EIF2AK3表达显著下调;10-5 H2O2组和西罗莫司组mTOR表达显著下调,ULK2表达显著上调;10-6H2O2组mTOR表达未发生明显改变,AMPK、JNK1表达显著上调.结论 体积分数为10-5和10-6的H2O2均能有效诱导黑素细胞自噬,可能与影响相关信号分子表达相关.     

非小细胞肺癌组织磷酸化蛋白p27和钙网蛋白的水平研究

目的 探讨非小细胞肺癌组织磷酸化蛋白p27和钙网蛋白（CRT）的水平及其临床意义.方法 采用免疫印迹法（Western blot）检测72例非小细胞肺癌组织及对应癌旁正常组织的p27和CRT蛋白水平,分析其蛋白水平与临床病理特征的关系.结果 非小细胞肺癌组织中p27水平低于癌旁正常组织,而CRT水平却高于癌旁正常组织（P＜0.05）,两种蛋白在不同TNM分期及淋巴结转移情况上的分布差异有统计学意义（P＜0.05）,且ⅢA（TNM分期）和有淋巴结转移的p27水平较低,而CRT水平较高,且总体上p27和CRT的蛋白水平呈负相关（r=-0.663,P＜0.05）.结论 非小细胞肺癌中p27水平较低,CRT水平较高,且与TNM分期及淋巴结转移有关.     

HPLC-MS法研究氯雷他定片人体相对生物利用度及药代动力学

目的:建立准确高灵敏的HPIC-MS法测定氯雷他定在血浆中的浓度,以研究氯雷他定片在健康华人志愿受试者中的药代动力学和相对生物利用度。方法:对20例健康华人男性志愿受试者进行二交叉试验,随机单剂量口服氯雷他定(20 mg)试验或参比片后,按设定时间采集肘静脉血;分取血浆1.0 mL,经0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液0.1 mL碱化和5 mL乙酸乙酯萃取处理;采用Zorbax-Ext-ODS柱,甲醇-乙腈-2.0％醋酸溶液(62:10:28)流动相,HPLC-MS内标(地西泮,[MH]+,m/z=285)法选择性正离子检测法测定氯雷他定([MH]+,m/z=383)血浆浓度。结果:HPLC-MS法测定血浆中氯雷他定的最低检测限为0.1 ng·mL-1,在0.2-20 ng·mL-1范围内线性关系良好;萃取绝对回收率为79.3％-84.0％;血药浓度测定日内、日间RSD均小于:15％。测得口服氯雷他定(20 mg)试验和参比片后的主要药代动力学参数Cmax(ng·mL-1)分别为8.3±3.7和6.8±5.4;Tmax(h)分别为1.3±0.6和1.3士0.4;tl/2(h)分别为4.6±1.4和5.1±1.4;AUCO→∞(ng·h·mL-1)分别为28.4±21.2和25.6±16.2,相对生物利用度F为(112.9±24.7)％。结论:建立的HPLC-MS方法灵敏、准确,测定结果可靠;统计分析表明氯雷他定试验和参比片生物等效。     

胆甾醇基γ-聚谷氨酸载紫杉醇自组装纳米胶束的制备与性能

本文采用两亲性胆甾醇基γ-聚谷氨酸纳米胶束(γ-PGA-graft-CH NMs)负载紫杉醇(PTX),考察了该胶束体系的载药性能与体内外特性。研究结果表明,γ-PGA-graft-CH NMs对PTX体现了良好的负载性能,最佳药载比为1/10,载药量达26.9%±0.8%,包封率88.6%±1.7%,对应载药纳米胶束(PTX/NMs)的粒径为(343.5±7.3)nm;体外释药结果显示,PTX/NMs能延缓PTX的释放,并具有p H敏感的释药特性和较低的细胞毒性;药代动力学研究表明,PTX/NMs在小鼠体内的消除半衰期(t1/2β)、血药浓度–时间曲线下面积(AUC)均明显大于PTX/聚氧乙烯蓖麻油注射剂(PTX/PCO),并具有较低的清除率(CL);PTX/NMs在肝脏和瘤体分布高于PTX/PCO,且对荷瘤小鼠具有良好的抑瘤效果。本研究针对将γ-PGA-graft-CH NMs用于抗肿瘤给药系统奠定了一定的基础。     

强直性脊柱炎湿热痹阻证血清差异蛋白组学研究

目的应用蛋白质组学双向电泳和质谱技术,开展强直性脊柱炎湿热痹阻证证候学研究。方法对强直性脊柱炎湿热痹阻证、寒湿痹阻证、正常对照共3组各30例血清,分别进行双向凝胶电泳,软件分析获取湿热痹阻证组和其他2组的差异蛋白质点,二级质谱鉴定获得差异蛋白。应用Western blot验证差异蛋白。结果获得7个湿热痹阻证的共同差异蛋白点,经质谱鉴定和SwissProt数据库检索,获得Fibulin-1、二肽基肽酶1、激肽原1、白细胞介素17F突变型、甘露糖结合蛋白C等5个强直性脊柱炎湿热痹阻证差异蛋白,涉及胞外基质蛋白、蛋白酶类、凝血因子、细胞因子、转运蛋白等。Western blot验证甘露糖结合蛋白C的表达结果与蛋白组学检测结果一致。结论这些蛋白可能涉及强直性脊柱炎湿热痹阻证的发病和病理过程,为进一步研究湿热痹阻证实质提供了依据。     

医学研究生大型仪器使用及方法学课程设置及教学体会

分析了在医学研究生中开设大型仪器使用及方法学课程的意义,总结了在教学实践中获得的心得,着重阐述了在教学内容的选择、教学及确立考核形式中的经验,并就进一步优化教学体系的设想进行了讨论,为培养高素质医学人才的科研和创新能力提供了支持.     

年龄相关性黄斑变性血浆蛋白质组学初步研究

目的 应用比较蛋白质组学技术,从蛋白质水平初步探讨年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,AMD)的发病机静.方法 门诊确诊湿性AMD组患者13例(18眼)、干性AMD组患者11例(17眼),6名健康志愿者作为对照组.采集外周血,用双向凝胶电泳结合质谱分析、生物信息学分析方法对各组患者血浆蛋白进行比较蛋白质组学分析.结果 正常对照组、干性AMD组、湿性AMD组中各样品图谱蛋白点平均匹配率分别为91.5％、92.2％、92.9％.发现有219个蛋白质斑点在3组凝胶中差异有统计学意义,获得有效鉴定及临床意义的蛋白质共28种.湿性AMD存在明显的补体激活、细胞生长因子相对高表达、细胞增生作用增强、抗损伤功能降低,而代谢障碍及抗氧化功能降低在干性及湿性AMD均存在.炎症损伤及由此触发的细胞增生在湿性AMD的发病过程中起了重要作用.结论 AMD患者血浆蛋白表达的改变,有助于阐明AMD发病机制,还可能作为AMD的治疗靶点,对早期诊断和治疗有意义.