hsa-miR-1908上游启动子区的生物信息学分析

目的利用各种生物信息学工具预测hsa-miR-1908上游启动子功能,以进一步研究其在人脂肪细胞中的转录调控机制。方法应用Ensemble数据库获取hsa-miR-1908上游启动子序列,利用多种在线相关软件预测出甲基化部位和转录因子结合部位。结果获取hsa-miR-1908上游启动子序列全长1 458 bp。miR-1908启动子序列中CpG岛位于(438~756)bp、(836~937)bp、(979~1374)bp处,CpG岛的存在会抑制miR-1908启动子的转录。miR-1908有15个转录因子的结合位点。结论 miRNA启动子相关生物信息学的研究,提高对启动子的研究效率,为进一步研究miR-1908的转录调控机制提供了重要的信息。     

Visfatin:一种新的脂肪细胞因子

Visfatin是新近发现的由内脏脂肪组织分泌的一种脂肪细胞因子。它能够通过与胰岛素受体结合激活胰岛素信号通路降低血糖，并具有促进脂肪细胞分化、脂质合成与积聚等生物学活性。深入探讨其作用机制可能为进一步认识代谢性疾病的发病机制及临床防治提供一个新的思路。目前有关visfatin的研究尚存在很大争议，该文就近几年的研究进展及相关争议进行简单综述。     

胰岛素诱导Zucker肥胖大鼠肾小球系膜细胞核因子-κB活性的变化

目的 研究胰岛素(INS)对体外培养的Zucker大鼠肾小球系膜细胞(GMC)核因子κB(NF-κB)活化的影响,以及INS诱导的NF-κB活性的变化与Zucker大鼠年龄(即病程)以及基因型的相关性。方法 (1)分别取Zucker肥胖大鼠(3月龄和10月龄)和Zucker瘦型大鼠(3月龄和10月龄)4组大鼠的GMCs(O_(3m),O_(10m),L_(3m),L_(10m))进行传代培养。(2)凝胶迁移率实验(EMSA)和超迁移率实验(GSA)检测不同浓度及不同时相INS对Zucker大鼠肾小球系膜细胞NF-κB活性的影响,以及NF-κB二聚体中p50和p65成分的变化。(3)应用Western印迹检测胞浆和胞核内NF-κB p65水平。结果 (1)INS诱导后,4组GMC内NF-κB活性均较对照组明显增强(F=219.65,P<0.01);(2)随着INS刺激浓度增加和时间的延长,GMC内NF-κB活性相应增强,0.5 mg/L的INS刺激24h时,NF-κB活性强度达最高峰;INS刺激浓度升为5 mg/L,则15h达最高峰;(3)INS主要激活NF-κB二聚体成份中的p65;(4)O_(3m)组NF-κB的活性显著高于O_(10m)组(P<0.01),L_(3m)组NF-κB的活性显著高于L_(10m)组(P<0.01),O_(3m)组显著高于L_(3m)组(P<0.01),O_(10m)组显著高于L_(10m)组(P<0.01)。(5)INS可呈剂量依赖性地降低胞浆内的p65的蛋白水平和上调胞核内p65水平。结论 INS可诱导Zucker大鼠GMC内NF-κB活化,其活化方     

Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶3酶活性的影响及其抗凋亡作用

目的 研究Par-4基因沉默对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)中Smac基因表达和半胱氨酸蛋白水解酶(Caspase)3酶活性的影响及其抗凋亡作用.方法 原代培养hBMSC.谷氨酸诱导hBMSC凋亡.设计和合成两对针对Par-4基因mRNA的小RNA干扰(siRNA)序列(Par-4-SiRNA-1、2),构建真核细胞表达载体,用脂质体介导转染hBMSC,利用G418筛选稳定表达细胞株.实时荧光定量PCR法检测Par-4 mRNA表达水平.流式细胞术测定细胞凋亡百分率.Western印迹测定Smac蛋白表达量.比色法测定Caspase-3酶的活性.结果 设计的Par-4-SiRNA-1、2可显著诱导hBMSC中Par-4基因沉默,Par-4 mRNA水平分别被降低88%、67%,谷氨酸诱导hBMSC凋亡,凋亡百分率为(58.9±8.9)%.Par-4-SiRNA-1可显著拮抗谷氨酸的诱导凋亡作用,凋亡百分率降为(37.2±6.3)%(F=58.26,P＜0.01).Par-4-SiRNA-1对谷氨酸诱导的hBMSC中Smac蛋白表达上调(P＜0.01)和Caspase-3酶活性上调(P＜0.01)有显著的抑制作用(P＜0.01).结论 Par-4基因沉默能拮抗谷氰酸对hBMSC凋亡的诱导作用.其机制可能与Smac基因表达和Caspase-3酶活性被抑制有关.     

Lipoxin A4受体样蛋白基因转染增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子诱导的人肺成纤维细胞增殖

目的克隆Lipoxin A4受体样蛋白(LRLP)基因,并转染人肺成纤维细胞(HLF).观察其增强Lipoxin A4拮抗结缔组织生长因子(CTGF)诱导的细胞增殖作用.方法构建LRLP与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的真核表达载体pEGFP/LRLP,并转染HLF,用G418筛选稳定表达融合基因的细胞克隆株HLF/LRLP.用10 nmol/L Lipoxin A4预处理HLF和HLF/LRLP细胞30 min后,加入1 μg/mlCTGF诱导细胞增殖.MTT法检测细胞增殖抑制率.流式细胞术检测细胞周期.Western blot检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达量.凝胶迁移率改变试验检测信号转导子和转录激活子3(STAT3)的DNA结合力.结果 (1)成功建立稳定表达LRLP和GFP融合基因的HLF/LRLP细胞株.(2) 1 μg/ml CTGF刺激24 h,可显著诱导HLF增殖.Lipoxin A4预处理对其有抑制作用,10 nmol/L Lipoxin A4对HLF/LRLP的细胞增殖抑制率显著高于对HLF细胞的增殖抑制率(P<0.05).(3)与未转染和空载体转染的HLF相比,10 nmol/L Lipoxin A4诱导更多的HLF/LRLP细胞生长停滞在G0/G1期(P<0.05).(4) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的细胞周期蛋白D1表达上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).(5) 10 nmol/L Lipoxin A4拮抗CTGF诱导的STAT3 DNA结合力上调,并且对HLF/LRLP细胞的拮抗作用强于对HLF细胞(P<0.05).结论 LRLP基因转染,增强Lipoxin A4 拮抗CTGF诱导的人肺成纤维细胞增殖.     

白细胞介素8-251位点基因多态性与呼吸道合胞病毒毛细支气管炎及毛细支气管炎后婴幼儿喘息的关系

目的探讨IL-8启动子-251A／T基因多态性与呼吸道合胞病毒（RSV）致毛细支气管炎（简称毛支）及毛支后婴幼儿喘息的相关性。方法应用聚合酶链反应．限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术检测320例RSV毛支患者及272例正常对照者IL-8基因-251A／T多态性,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清IL-8、IgE浓度。并对人组的毛支患儿随访3年,记录婴幼儿毛支后喘息再发的情况。结果（1）RSV毛支组和对照组IL-8-251位A等位基因频率分别为45．6％、37．7％,两组问比较差异有统计学意义（P〈0．05）;（2）基因型TT、AT、AA的毛支患儿血清IL-8浓度分别为（17±6）ng／L、（21±7）ng／L、（24±9）ng／L,三种基因型间比较差异有统计学意义（P〈0．01）;（3）RSV毛支后喘息组和未再喘息组IL-8-251位A等位基因频率分别为54．6％、35．8％,两组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论IL-8启动子-251A／T基因多态性与RSV毛支易感性相关,且携带IL-8-251A等位基因的患儿在RSV毛支后更容易出现喘息。     

miR-146b靶标预测及功能分析

目的 通过对miR-146b进行系统的生物信息学分析,预测miR-146b的靶基因及其功能.方法 应用miRBase获取并分析miR-146b的序列特征;应用TargetScan、PicTar及miRanda预测miR-146b的靶基因,进行功能注释和信号转导通路分析;应用PubMed、Google等信息搜索工具综述miR-146b已有功能研究.结果 miR-146b在各物种之间具有高度保守性.功能注释显示预测靶基因主要富集于促细胞增殖、转录调控、调控细胞分化等生物学过程.信号转导通路分析显示预测靶基因显著富集于白血病、ErbB信号通路、促分裂原活化的蛋白激酶通路等.结论 生物信息学分析提示,miR-146b可能与细胞分化、代谢密切相关.     

地塞米松与倍他米松对大鼠胎肺形态发育影响的对比

目的 比较产前小剂量应用地塞米松、倍他米松对大鼠胎肺形态发育的影响.方法 15只孕鼠随机分成对照组、地塞米松治疗1 d组、3 d组和倍他米松治疗1 d组及3 d组,每组3只.地塞米松及倍他米松3 d组分别于妊娠第16、17、18天连续腹腔注射地塞米松或倍他米松,剂量为0.2 mg/(kg·d);地塞米松及倍他米松1 d组于妊娠第16、17天腹腔注射4 m1生理盐水,妊娠第18天给予相应剂量药物.对照组大鼠于妊娠第16、17、18天连续注射4 ml生理盐水.光镜及电镜观察各组孕鼠的胎仔肺组织形态发育变化. 结果 (1)与对照组相比,倍他米松3 d、1 d组及地塞米松3 d组肺泡结构发育较为成熟.(2)倍他米松3 d组的肺泡间隔为(23.38±7.77)μm,地塞米松3 d组为(30.82±5.32)μm,倍他米松1 d组为(33.37±9.30)μm,均小于对照组[(71.15±48.72)μm](P＜0.01);倍他米松1 d组的呼吸膜周径为(43.24±18.20)μm、肺泡表面积为(412.71±298.45)μm2,倍他米松3 d组分别为(61.22±23.58)μm和(780.23±428.34)μm2,地塞米松3 d组分别为(40.31±15.20)μm和(471.08±324.63)μm2,均大于对照组[分别为(32.06±11.40)μm和(285.70土175.77)μm2](P＜0.01);倍他米松1 d组与地塞米松1 d组相比肺泡间隔薄,呼吸膜周径及肺泡表面积增大(P＜0.01).倍他米松3 d组与地塞米松3 d组相比肺泡间隔薄(P＜0.01),呼吸膜周径及肺泡表面积增大(P＜0.01).(3)透射电镜观察发现,倍他米松1 d、3 d及地塞米松3 d组肺泡Ⅱ型上皮细胞内可见板层小体,以倍他米松和地塞米松3 d组改变最为明显,而对照组未见板层小体.结论 小剂量地塞米松、倍他米松均能促进胎肺发育,但倍他米松效果更好.     

儿童生长发育及其障碍

讨论内容 :①婴儿喂养、泥糊状食物添加 ;②儿童肥胖的内分泌因素 ;③单纯性肥胖的诊断及饮食运动治疗 ;④婴儿食物过敏 ;⑤小儿厌食症 ;⑥儿童意外伤害 ;⑦家庭环境对儿童身心发育的影响 ;⑧儿童体格生长的评估与监测 ;⑨生长迟缓的诊断及其影响因素 ;⑩学龄前儿童乳腺、生殖器发育中的一些问题 ; 铅、汞、镉对儿童生长发育的影响。     

脑缺血缺氧后大鼠外周血淋巴细胞热休克蛋白70的表达

目的 研究大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马区脑组织病理学损伤变化和外周血单个核细胞的热休克蛋白(HSP)70的表达.方法 建立大鼠脑缺氧缺血模型,苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察脑组织病理学损伤的变化,采用流式细胞术(FCM)检测外周血淋巴细胞HSP70.结果 在缺氧缺性脑损伤后, 外周血淋巴细胞的HSP70水平迅速升高,24 h达到高峰51.05±2.27,其后逐渐降低14.13±1.04至正常水平(P＜0.01),与脑组织病理损伤的时序变化相一致.结论 运用FCM检测外周血淋巴细胞HSP70水平可以作为反映缺氧缺血后脑损伤的辅助指标.