去粘膜游离小肠段内自体脾组织移植实验研究和临床应用

本实验将犬自体脾组织移植于游离空肠段内,6月后处死取出移植脾组织进行大体形态学:光镜和电镜观察,结果显示:移植脾组织存活良好,再生明显,其重量为原移植重量的129.6%,组织形态学及超微结构与对照组无明显差异,经临床应用证明此方法是自体脾移植的理想方法。     

三种不同冷冻保护剂对小鼠附睾冷冻效果的比较

目的 探讨三种不同冷冻保护剂对C57BL/6J小鼠附睾冷冻的效果。方法 性成熟并交配过的6-8周龄C57BL/6J雄鼠附睾，分别用3种不同冷冻保护剂二甲基亚砜 (DMSO)、丙二醇 (PROH)、R18S3进行玻璃化冷冻、复苏和精子采集，观察比较三个实验组的复苏精子形态、存活率以及生殖能力。结果 三组冷冻复苏分离后的精子形态完整，具有镰刀头状结构；荧光染色后PROH组精子存活率为 (88.17±3.43)%，明显高于DMSO组：(61.17±10.65)% 和R18S3组(16.83±6.49)%（P<0.05）；经辅助体外受精后均具有受精能力。获得的胚胎移植后可得到正常子代小鼠 (DMSO : PROH : R18S3 = 13 : 8 : 17）。结论 3种冷冻保护剂均适用于C57BL/6J小鼠附睾冷冻，但PROH冷冻效果较好。     

三种冷冻保护剂对新生小鼠睾丸组织冷冻效果的比较

目的探讨三种不同冷冻保护剂对新生C57BL／6J小鼠睾丸冷冻的效果。方法5日龄C57BL／6J雄鼠睾丸组织,分别用3种不同冷冻保护剂（二甲基亚砜〈dimethyl sulfoxide,DMSO〉、丙二醇〈propylene Glycol,PROH〉、EFS20／40）进行玻璃化冷冻。复苏冷冻后的睾丸组织,每组一部分进行组织学分析,另一部分进行组织移植,移植后检测关键基因表达水平以及卵胞质内单精注射,并设相应对照组。结果3个实验组睾丸组织形态改变与对照组相比均具有显著性差异（P〈0．01）,其中EFS组分值最低即改变最小;原位移植8周后组织块生长发育,存活率分别为DMSO组16．7％、PROH组13．3％、EFS组23．3％,存在成熟精子;睾丸组织特异性基因pgk-2和TESK1正常表达;卵胞质内单精注射表明移植后睾丸内精子均具有受精能力,胚胎移植后可得到正常子代小鼠（DMSO：PROH：EFS=5：2：8）。结论3种冷冻保护剂均能良好保存睾丸组织结构和功能。其中,EFS方法保存的睾丸组织形态改变最小、功能完善更适于睾丸组织的冷冻。     

生长抑素与免疫

神经免疫内分泌学是近年来迅速发展起来的一门边缘学科。生长抑素是一种脑肠肽，它不仅广泛存在中枢神经系统和胃肠道，在淋巴器官中也有分布。近年来发现，生长抑素除抑制脑垂体中生长激素的释放外对免疫反应也有广泛的抑制作用。本文从以下几个方面概述了生长抑素对免疫反应的影响，如对T淋巴细胞的分化、细胞因子的产生及对免疫球蛋白产生和类转换的影响等。此外，本文还介绍了生长抑素对肿瘤的作用。     

环磷酰胺诱导大鼠外周血淋巴细胞染色体畸变的量效关系

染色体畸变已广泛用于检测潜在的致突变物和致癌物。环磷酰胺常作为染色体畸变的阳性对照物,但环磷酰胺诱导染色体畸变的量效关系未见报道。作者选用不同剂量的环磷酰胺诱导大鼠外周血淋巴细胞染色体畸变,经统计处理,分析其量效关系,试图为环磷酰胺在遗传毒性的研究中提供资料。也为染色体畸变试验的设计提供阳性对照物环磷酰胺的参考数据。     

胚胎牌细胞不同移植途径对小鼠接种性肉瘤生长和自然杀伤细胞活性的影响

分别于肌肉、腹腔、周围静脉、门静脉对荷瘤小鼠移植胚胎牌细胞，并于移植后30天、60天分别测定瘤体积抑制率和自然杀伤细胞（NK细胞）活性。结果显示：上述4种移植途径在移植后30天均能明显抑制移植性肿瘤生长，NK细胞活性显著升高（P＜0．01）。但移植后60天，仅门静脉组对肿瘤生长保持良好的抑制状态，NK细胞活性保持较高水平，证明经门静脉移植是牌细胞移植最好的途径。     

流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析

目的 获得JEV E蛋白基因并使其在E．coli中高效表达，以研究其抗原活性，为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法 根据已发表的JEV SA-14-14-2减毒株序列，设计一对特异性引物，通过RT—PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段，并将其克隆入pET-32a( )表达载体中，构建重组融合表达载体pET—E，转化大肠杆菌BL21(DE3)后，利用IPTG诱导获得高效表达。结果 扩增的E蛋白基因片段长1113bp，编码371个氨基酸残基，该基因片段与国内发表的减毒株SA14—14—2碱基序列同源性为100％。表达产物分子量约为62kD，经Western blotting分析表明表达产物具有较好的抗原性。结论 通过序列分析表明，我国的JEV SA-14-14-2减毒株未发生基因突变。表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据。     

鸡传染性支气管炎病毒中国流行株免疫原基因的分子克隆与基因分型

从我国华中、华东、华南、华北、东北及西北等地分离鸡传染性支气管炎病毒流行株，经病毒的病原性、形态结构、理化特性、病毒抗原的特异性检测、组织嗜性、结构多肽及血清型分析等多方面的鉴定，对来源于我国不同地区的流行毒株免疫原Ｓ１基因进行了分子克隆及基因分型；ＲＴ－ＰＣＲ扩增病毒Ｓ１基因，将Ｓ１基因５′和３′端分别进行分子修饰之后插入克隆载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／ＨｉｎｄⅢ位点，在Ｅｃｏｌｉ中实现了目的基因的克隆；利用英国病毒株Ｓ１全基因核酸探针与流行株Ｓ１基因的重组克隆质粒分子杂交及目的基因５′端高变区核苷酸序列分析鉴定后，采用ＨａｅⅢ、ＰＶＵⅡ和ＸｂａⅠ等限制性核酸内切酶酶切分析不同流行株Ｓ１基因ｃＤＮＡ。结果表明，我国流行的鸡传染性支气管炎病毒分为６个主要的基因型；试验发现除与Ｍ４１和澳大利亚Ｔ株相近基因型毒株之外，我国流行的毒株存在明显的分子水平的变异，这与病毒血清型鉴定的结果一致，鸡传染性支气管炎病毒中国流行毒株免疫原基因Ｓ１的分子克隆及基因分型为该病毒分子流行病学及病毒遗传变异的主要分子基础的深入研究奠定了基础。     

慢性镉接触大鼠免疫细胞活性和免疫介质变化探讨

目的研究镉(Cd)致大鼠血中几种免疫介质、脾脏淋巴细胞转化和NK细胞活性变化,探讨慢性Cd接触对大鼠免疫介质释放和免疫细胞活性的影响。方法选择健康SD雌性成年大鼠54只,随机分成对照组,低剂量氯化镉组,高剂量氯化镉组。对照组每天给予普通全价饲料,低、高Cd组分别饲喂含镉2和10 mg/kg的全价饲料,连续9周。分别在第3、6和9周采集血样和脾脏进行分析。结果在整个实验期内,Cd诱导血浆环磷酸腺苷(cAMP)水平升高,且第3周高Cd组及第9周低Cd组与对照组差异显著;Cd接触大鼠血浆NO均升高,且高Cd组显著高于对照组(P<0.05);Cd诱导血浆白细胞介素-2(IL-2)水平下降、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平上升,但与对照组差异不明显。慢性Cd接触大鼠脾脏淋巴细胞转化刺激指数均显著低于对照组,NK细胞活性随剂量增加和时间的延长而明显下降。结论慢性Cd接触诱导大鼠免疫细胞活性抑制,一些免疫介质发生紊乱和较大变化可能在介导免疫细胞功能活动低下发生过程中有重要作用。