Ph（-）慢性骨髓增殖性疾病JAK2V617F检测技术及临床应用的进展

2005年以来多个研究组报道了在Ph(-)慢性骨髓增殖性疾病患者的外周血和骨髓中存在JAK2V617F突变, 所用的检测方法有DNA直接测序、序列特异性PCR、实时定量PCR与DNA溶链曲线分析、限制性片段长度多态性、焦磷酸测序, 兹就这些方法的原理、敏感性以及临床应用进行综述.     

急性髓系白血病FLT3基因突变研究

本研究探讨急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者中FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）基因内部串联重复突变（ITD）及第二酪氨酸激酶结构域（TKD）点突变及其临床意义。采用基因组DNA—PCR方法检测131例初发AML患者骨髓单个核细胞FLT3基因外显子14、15中ITD突变,采用基因组DNA—PCR结合限制性内切酶酶切方法检测FLT3基因外显子20中TKD点突变。结果表明：131例初治AML患者中,21例（16．0％）FLT3－ITD突变阳性,3例（2．3％）FLT3－TKD点突变阳性,无同一患者同时发生两种突变。FLT3－ITD阳性组初诊时白细胞计数（WBC）及骨髓原始细胞比例高于野生型FLT3（FLT3－wt）组。FLT3－ITD阳性组患者完全缓解（CR）率47．6％,显著低于FLT3－wt88．1％（P〈0．05）。20例M3患者中,FLT3－ITD阳性组及阴性组患者缓解率差异无统计学意义;非M3FLT3－ITD阳性组患者cR率为37．5（6／16例）,显著低于非M3FLT3－wt组患者CR率90．6％（48／53例）（P〈0．05）。阳性组患者完全缓解后14个月（2—20个月）内复发3例,复发率为50％（3／6）,高于FLT3－wt组29．2％（14／48例）。由于FLT3－TKD阳性患者仅3例,未单独进行统计学分析。结论：FLT3基因突变是AML患者中常见的突变,FLT3－ITD突变较FLT3－TKD点突变发生率高,FLT3－ITD有突变的AML患者预后差;FLT3－TKD点突变对预后的影响不明显。临床上早期FLT3基因突变检测对AML患者今后的靶向治疗及了解临床预后有重要意义。     

后疫情时代安宁疗护对晚期血液肿瘤患者生活质量及心理状态的影响

目的:探究后疫情时代安宁疗护对晚期血液肿瘤患者生活质量及心理状态的影响.方法:选取在某院进行治疗的晚期血液肿瘤患者90例,按照随机数字表法分为常规组及安宁组,每组45例.常规组患者实施常规护理,安宁组患者实施安宁疗护.比较2组患者干预前后疼痛程度[疼痛数字评价量表(NRS)评分]、生活质量[简明健康测量表(SF36)评...     

原发性浆细胞白血病肿瘤新生抗原的筛查和预测

[摘要] 目的：采用基因测序技术结合生物信息分析手段探索原发性浆细胞白血病（PCL）的肿瘤新生抗原。方法：采集1 例原发性PCL患者复发期和缓解期的外周血样本,利用基于序列分型的聚合酶链式反应进行HLA分型,利用二代测序技术对全外显子组和转录组进行测序,利用生物信息学软件NetMHCpan预测新生抗原。结果：该患者复发期外周血中发现6 个肿瘤特异的错义突变基因,分别为FRG1、MLL3、SVIL、MYOM1、ZDHHC11、RFPL4A基因;结合患者的HLA亚型,通过生物信息预测出43条新生抗原。优先选取表达水平较高的FRG1 和MLL3 基因突变所产生的20 条新生抗原,其中4 条新生抗原高度亲合患者的HLA分子,具有潜在的临床应用价值。结论：完成了1 例原发性PCL肿瘤新生抗原的筛查和预测,实践说明基于肿瘤特异的体细胞突变预测新生抗原的方法对于原发性PCL同样可行。     

IL-12-CAR-T细胞诱发细胞因子释放综合征小鼠模型的建立及观察

目的：通过构建表达IL-12的小鼠CAR-T细胞,探讨经尾静脉将其输注于小鼠体内建立细胞因子释放综合征（CRS模型的方法。方法：构建基于靶向鼠源CD19的CAR分子,包装逆转录病毒载体并感染小鼠T细胞构建mCD19-CAR-T、mCD19/IL-12-CAR-T细胞。通过构建小鼠体内胰腺癌Panc02-CD19细胞移植瘤模型,检测mCD19/IL-12-CAR-T细胞的抗肿瘤活性,ELISA法检测两种CAR-T细胞IL-12和IFN-γ分泌水平;经小鼠尾静脉输注mCD19/IL-12-CAR-T细胞构建CAR-T细胞CRS小鼠模型,流式细胞术检测小鼠血清中IL-6、MCP-1、IL-1、IL-10、TNF-α、IFN-γ等细胞因子的含量,H-E染色法观察荷瘤小鼠肝、脾、肺和肾的病理组织学变化。结果：经过培养扩增的mCD19/IL-12-CAR-T细胞能有效分泌IL-12,CAR阳性率达（56.9±5.4）%;与非靶细胞Panc02或靶细胞Panc02-CD19共培养时,均能高分泌IFN-γ。成功构建小鼠胰腺癌Panc02-CD19细胞移植瘤模型,经小鼠尾静脉注射1×106个mCD19/...     

血复生浸膏结合辨证类方对慢性再生障碍性贫血患者外周血miRNA、淋巴细胞亚群及细胞因子影响的临床观察

  目的：观察血复生浸膏结合辨证类方治疗慢性再生障碍性贫血的临床疗效及其对外周血microRNA、淋巴细胞亚群、细胞因子的影响。  方法：将60例慢性再生障碍性贫血患者随机分为治疗组与对照组,每组30例;另设正常对照组20例。对照组予常规基础治疗,治疗组在对照组治疗措施基础上加用血复生浸膏结合辨证类方。两组疗程均为6个月、随访6个月,观察临床疗效,比较外周血象指标、microRNA(miRNA-155-5p、miRNA-1260b)表达、淋巴细胞亚群(总T细胞、B细胞、NK细胞、Th细胞、Tc细胞比例及Th/Tc)水平及血浆相关细胞因子水平的变化情况。  结果：①治疗组、对照组临床总有效率分别为83.33%、53.33%;组间临床疗效比较,治疗组明显优于对照组(P<0.05)。②组间治疗后比较,Hb、WBC、Ret水平差异有统计学意义,治疗组明显高于对照组(P<0.05)。③组间治疗后比较,miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达水平差异有统计学意义,治疗组下调幅度明显强于对照组(P<0.05)。两组治疗前与正常组比较,miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达水平均明显上调(P<0.05);两组治疗后与正常组比较, miRNA-155-5p、miRNA-1260b表达水平虽有所下降,但均未达到正常水平(P<0.05)。④组间治疗后比较,NK细胞、Th细胞、Tc细胞比例及Th/Tc水平差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前与正常组比较,NK细胞、Th细胞比例及Th/Tc水平均明显不足(P<0.05),Tc细胞比例明显过高(P<0.05)。两组治疗后与正常组比较,治疗组Th/Tc水平差异有统计学意义,尚未达到正常水平(P<0.05),而NK细胞、Th细胞及Tc细胞比例与正常水平已无显著差异(P>0.05);对照组NK细胞、Th细胞、Tc细胞比例及Th/Tc水平差异有统计学意义,均未达到正常水平(P<0.05)。⑤组间治疗后比较,IFN-γ、IL-12p70、TNF-α、TGF-β1的水平差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前与正常组比较,IFN-γ、IL-12p70、TNF-α、TGF-β1的水平差异有统计学意义,IFN-γ、IL-12p70、TNF-α水平明显过高(P<0.05),TGF-β1水平明显过低(P<0.05)。两组治疗后与正常组比较,IFN-γ、TNF-α、TGF-β1的水平差异均有统计学意义,尚未达到正常水平(P<0.05),而治疗组IL-12p70无显著差异,已恢复至正常水平(P>0.05)。  结论：在西医常规治疗基础上,血复生浸膏联合辨证类方治疗再障的疗效较为满意,其调控再障免疫异常的机制可能是通过改善淋巴细胞亚群失衡、抑制造血负调控因子、下调miRNA-155-5p、miRNA-1260b的表达而实现。     

环孢菌素A对慢性再生障碍性贫血患者T-bet、GATA-3、相关信号分子、细胞因子及Th1/Th2的影响

本研究探讨转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在慢性再生障碍性贫血(CAA)免疫发病中的作用,从Th细胞失衡、转录因子及相关信号通路水平研究环孢菌素(CsA)治疗慢性AA的免疫调节机理。采用实时荧光定量PCR(real-time FQ-PCR)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达;采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平,并与正常人进行比较。结果表明:慢性AA患者PBMNC T-bet、STAT4mRNA表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、Th1/Th2比值、PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12表达均明显高于正常组(p0.01),经CsA治疗6月后,患者T-bet、STAT4表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ、IL-12表达均有所下降,但T-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ表达仍未达到正常水平,GATA-3、STAT6mRNA表达、Th2比例、IL-4表达在治疗前后与正常人比较均无明显差异(p0.05)。结论:IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及Th平衡向Th1型偏移在AA免疫异常的发病过程中起到关键的作用;CsA能通过下调IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及纠正Th1过度极化而减轻AA异常亢进的细胞免疫,解除造血抑制。     

酪氨酸激酶突变与t（8；21）急性髓系白血病

本研究探讨c—KIT、FMS样酪氨酸激酶3（FLT3）、Janus激酶2（JAK2）在伴t（8;21）的急性髓系白血病（AML）患者的突变情况,及其与患者临床表现和预后的相关性。采用普通PCR扩增技术、等位基因PCR技术、酶切及序列测定等方法,分别检测8例初发、6例复发t（8;21）AML患者FLT3、JAK2、c—KIT突变。结果表明：在2／14例（14．3％）伴t（8;21）的AML患者中检测到c—KIT突变,其中1例为c—KITD816V,另1例为c—KITD816Y突变;在1／14例（7．1％）患者中检测到FLT3-ITD突变。在14例标本中均未检测到JAK2突变。结论：酪氨酸激酶突变与t（8;21）AML具有相关性,可能提示有较高复发率及髓外浸润,预后不良。筛查c—KIT、FLT3突变等对t（8;21）AML预后判断和治疗指导可能具有重要意义。