采用重叠PCR构建高灵敏度酵母细胞传感器评估遗传毒性化合物

采用重叠PCR（overlap PCR）方法构建了pdr5与snq2基因敲除组件,研究了pdr5、snq2基因突变对酵母细胞传感器评估遗传毒性的影响。考察了野生型、pdr5单基因突变、snq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器暴露于系列浓度甲磺酸甲酯（MMS）、甲磺酸乙酯（EMS）、顺铂、4-硝基喹啉-N-氧化物（4NOQ）、5-氟尿嘧啶（5-FU）、羟基脲、水杨酸和葡萄糖溶液24 h后的细胞生长抑制情况与16 h后的荧光诱导情况。研究结果表明,overlap PCR方法能够高效率构建基因突变酵母细胞传感器;snq2单基因突变与pdr5、snq2双基因突变细胞传感器检测遗传毒性的准确度为100%,高于野生型与pdr5单基因突变细胞传感器（87.5%）;pdr5、snq2双基因突变酵母细胞传感器表现出最高的遗传毒性检测灵敏度,为构建高准确度与灵敏度的酵母细胞传感器提供了思路与方法,为酵母细胞膜转运蛋白基因pdr5与snq2的进一步功能研究奠定了基础。     

核磁共振氢谱法(~1H-NMR)测定西他沙星标准物质的含量

目的建立核磁共振氢谱法测定西他沙星标准物质的绝对含量。方法采用Bruker AVANCE-500型和AVANCE-300型仪器,分别以盐酸吉西他滨和齐多夫定为内标,西他沙星中质子信号在δ8.69,δ7.76,δ3.43和δ3.14,盐酸吉西他滨质子信号在δ8.12,δ6.21和δ6.02,齐多夫定中质子信号在δ7.61和δ6.01作为定量峰,0.5 mL DMSO-d6∶氚代盐酸(DCl,44.8mg·L-1)=4∶1为溶剂,测定条件为:探头温度303K,谱宽11.0,中心频率4.9,脉冲序列为zg 30°,延迟时间20s,采样次数32次,窗函数0.3Hz。结果在此条件下,样品与内标盐酸吉西他滨及齐多夫定的定量峰分离良好,进样精密度及重复性较好,线性范围宽,样品与内标盐酸吉西他滨和齐多夫定质量比分别在0.354 9~1.343 9和0.312 4~1.189 2范围内,其线性拟合方程分别为:Y=1.440 9X+0.017 8(r=1.000 0,n=5),Y=1.634 6X+0.008 5(r=0.999 9,n=5)。结果西他沙星的含量分别为99.26%(RSD为0.06%)和99.22%(RSD为0.17%)。结论该方法准确、专属、简便、快速,适用于该药物标准物质的绝对含量测定。     

药物杂质研究方法最新进展

药物杂质是反映药物质量的重要指标,其研究也贯穿着药物研发、生产以及销售的整个过程。随着分析仪器技术的不断发展,药物中杂质的研究技术以及杂质研究方法也在不断地更新。本文从药物杂质来源、杂质研究方法以及基因毒性杂质研究等方面重点讨论了分析技术的最新进展以及基因毒性杂质的确定方法,为药物分析工作者在杂质研究时提供技术上的参考。     

碳纳米粒的制备及其用于氯霉素的测定

首次以柠檬酸为碳源、甘氨酸为修饰剂,通过高温热解法一步合成修饰碳纳米粒。经过正丁醇萃取纯化,碳纳米粒的粒径更加均一,荧光强度更大,且性能得到了改善。最终制得的碳纳米粒呈棕黄色,在380 nm激发波长下,最大发射波长出现在480 nm附近,其荧光量子产率高达47%。氯霉素对碳纳米粒的荧光具有显著的猝灭效应,并呈现一定的规律性,据此建立了对氯霉素含量测定的新方法。该方法简便快捷,易于操作,线性关系良好(r=0.999 7),回收率在99%~101%(RSD=0.3%),显示了碳纳米粒在药物检测方面的潜在应用前景。     

SPE-UPLC法测定养血清脑颗粒中的芍药苷含量

目的:采用SPE-UPLC法分析养血清脑颗粒中芍药苷的含量。方法:采用C18固相萃取柱去除养血清脑颗粒中的基质,超高效液相色谱法测定芍药苷含量。采用Acquity BEHC18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,乙腈-水(25∶75)为流动相,检测波长为230 nm,流速为0.2 mL.min-1,柱温40℃。结果:SPE-UPLC法测得芍药苷浓度在5.0～80.0μg.mL-1范围内与其峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.4%(RSD=2.83%)。结论:该方法准确、简便并能有效去除药物基质保护色谱柱,可用于该制剂的质量控制。     

大鼠脑组织中抑郁症相关生化物质分析方法的建立及应用

目的建立大鼠脑组织中与抑郁症相关的生化物质的高效液相色谱-荧光分析方法,研究脑组织不同部位中相关生化物质的分布及差异。方法采用反相离子对液相色谱法,对脑组织样本前处理方法进行了考察,优化了色谱分离分析条件。将所建立的方法应用于大鼠纹状体、下丘脑、海马及皮层等不同脑组织样本的分析。结果本方法实现了对大鼠脑组织样本中多种生化物质的基线分离;经鉴别,其中7种物质与单胺递质系统密切相关。大鼠脑组织不同部位中与抑郁症相关生化物质的种类及量的分布存在一定差异。结论本文建立的分析方法专属、灵敏,可为中药复方药效及作用机制研究提供重要信息。     

栀子厚朴汤配伍变化对柚皮素与橙皮素药代动力学的影响

研究大鼠灌胃给予枳实、枳实-栀子、枳实-厚朴和栀子厚朴汤4种配伍汤剂后柚皮素与橙皮素在血浆中的药代动力学。将SD大鼠随机分为4组,分别灌胃枳实、枳实-栀子、枳实-厚朴、栀子厚朴汤剂10.83 mL/kg,采用HPLC法测定各汤剂给药后的血药浓度,计算药代动力学参数。结果表明4种不同配伍方给药后,柚皮素与橙皮素的药代动力学参数有差异。栀子厚朴汤不同配伍对柚皮素与橙皮素在大鼠血浆中的药代动力学存在不同的影响。栀子或厚朴能够延缓柚皮素与橙皮素的达峰时间;厚朴能够显著地增加橙皮素的AUC_0-24h;枳实、栀子、厚朴3味药材共同配伍应用时减少了柚皮素与橙皮素的达峰时间,使柚皮素的AUC_0-24h降低,同时使橙皮素的AUC_0-24h增加,但增加程度低于枳实-厚朴组。实验结果显示药材配伍对相同成分的药代动力学行为有影响。     

奥替拉西钾血药和尿药浓度的测定及其药代动力学和药物蓄积性评价

本实验建立了人血浆及尿液中奥替拉西钾（potassium oxonate,Oxo）的LC-MS/MS测定方法,研究单次及多次给药替吉奥胶囊（S-1）后,Oxo在晚期胃癌患者体内的药代动力学特征,并评价多次给药后Oxo在人体内的药物蓄积情况。12名晚期胃癌患者分别按体表面积（BSA）口服S-1：单次给药,受试者于早餐后给药60 mg;多次给药,连续28d,每天2次,于早餐后给药60mg;晚餐后给药60 mg（BSA≥1.5m ²）或40 mg（1.25m ² 2）。采用LC-MS/MS法分别测定血浆及尿液中Oxo药物浓度,计算其药代动力学参数,评价其药代动力学特征和药物蓄积现象。血浆及尿液中Oxo测定的线性范围为分别为2~400 ng/mL,0.02~10 μg/mL。单次给药后 c_max为（110.5±100.8）ng/mL,t_1/2为（3.4±1.4）h,t_max为（2.2 ±0.7）h,36 h内有（1.7±1.2）%的Oxo以原型方式从尿中排出;多次给药后,稳态平均血药浓度c_ss-av为（36.89±29.35）ng/mL,稳态血药浓度波动度(DF)为2.4±0.8,经统计分析,多次给药28 d后Oxo在胃癌患者体内药代动力学特征与单次给药相比并未发生变化,多次给药后未产生药物蓄积现象。与文献数据对照,Oxo在中国晚期胃癌患者与国外患者体内的药代动力学参数基本一致。     

高灵敏度焦磷酸测序平台的建立及应用研究

焦测序技术是一种基于生物发光法测定焦磷酸盐的测序技术,在进行DNA序列分析时不需要电泳和荧光标记,定量性能好,结果准确,可实现自动化。但其应用过程中存在3个技术瓶颈：一是测序试剂灵敏度低、成本高;二是测定仪器价格昂贵;三是测序模板制备过程繁琐。本课题组针对这些技术瓶颈,提出了一整套解决方案,包括高灵敏度焦测序反应试剂的研制、小型便携式焦测序仪的研制、测序模板的制备方法研究等。建立的高灵敏度微型化焦测序平台在分子诊断的各个领域得到了充分的应用,如细菌病毒转基因成分等的序列测定、单核苷酸多态性测定、拷贝数变异测定、基因突变位点测定、microRNA测定、基因表达量测定和药物基因组学研究,具有测序灵敏度高、仪器体积小、成本低、操作简便快速等优点,应用前景广阔。本文详细介绍了本课题组在提高焦磷酸测序反应灵敏度、简化测序过程、改进测序仪器和拓展焦磷酸测序应用范畴所做的系列创新性工作。