紫外线通过诱导TNF-α胞内聚集间接调控VEGF分泌表达

目的 探讨紫外线(UVB)反应中TNF-α在介导VEGF诱导表达中的作用.方法 采用TNF-α特异性shRNA转染小鼠成纤维细胞(MEFs)并建立稳定细胞株;RT-PCR方法验证TNF-α shRNA的有效性;荧光素酶报道分析系统检测vegf基因启动子活性;ELISA方法检测VEGF的分泌表达水平.结果 本课题组构建的TNF-α shRNA能够有效抑制UVB刺激作用下TNF-α的诱导表达;同样条件下,UVB诱导vegf基因启动子活性上调趋势被TNF-α shRNA显著抑制;同时VEGF的胞外分泌表达水平明显下降.结论 UVB反应中TNF-α可间接介导VEGF的诱导表达.     

槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷对游离脂肪酸诱导HepG2细胞脂肪变性的作用

探讨槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(quercetin-3-O-β-D-glucuronide,Q3GA)对游离脂肪酸诱导的人源肝癌细胞HepG2细胞脂质蓄积的甘油三酯调节和氧化应激的作用及其可能的相关机制。采用油红染色检测Q3GA对游离脂肪酸诱导的HepG2细胞中脂滴含量的影响,并同时检测其对甘油三酯和胆固醇的作用。DCFH-DA法检测Q3GA对HepG2细胞脂质蓄积引起的活性氧(ROS)的变化;硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法分别测定丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。RT-PCR分析脂肪酸氧化相关的基因过氧化物酶体增殖物受体(PPARα)、肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT1A)、中链酰基辅酶A脱氢酶(MCAD)、细胞色素P450 4A11(CYP4A11)、乙酰辅酶A氧化酶(ACO)的表达情况。实验结果显示,Q3GA可剂量依赖性降低FFA诱导的HepG2细胞脂质蓄积和甘油三酯的含量,但未降低胆固醇的含量。同时可改善脂肪酸氧化引起ROS,MDA的升高以及SOD的降低。另外,Q3GA在一定浓度下可上调脂肪酸β氧化相关基因PPARα、CPT1A、MCAD的表达,而对CYP4A11和ACO的表达没有促进作用。综上所述,Q3GA可抵抗脂肪酸氧化引发肝细胞的氧化应激损伤,保护HepG2细胞,降低游离脂肪酸诱导HepG2细胞脂质蓄积和甘油三酯的含量,其调节机制可能与其对HepG2细胞中游离脂肪酸氧化有关。     

多指标正交试验优选葛根素聚乙二醇衍生化合成工艺

目的 优选葛根素聚乙二醇（PEG-PUE）衍生化的合成工艺条件。方法 以PEG-PUE的质量分数、载药量、收率为评价指标,采用HPLC法对PEG-PUE衍生化过程中PEG与PUE物质的量的比例、催化剂DMAP的用量、反应时间进行优选。结果 PEG-PUE衍生化的最佳合成工艺条件是PEG-EDC-PUE-DMAP物质的量的比例为1∶1.2∶1.2∶0.3,反应时间为12 h。结论 优选的PEG-PUE衍生化合成工艺条件合理,操作可行。     

中药抗糖尿病研究进展

糖尿病是一类因胰岛素分泌不足、胰岛素作用低下或胰岛素抵抗引起的糖代谢紊乱,继发脂肪和蛋白质代谢障碍的疾病。其发病率呈逐年上升趋势,近年来中药治疗糖尿病取得较大进展,本文对抗糖尿病的中药单体、单味中药、中药有效部位和中药复方制剂做了综述。     

糖原磷酸化酶抑制剂积雪草酸对糖代谢的影响

目的:研究积雪草酸(AA)对糖原磷酸化酶的抑制作用及其对HepG2细胞的葡萄糖消耗作用,最后研究其对小鼠糖代谢的影响,初步探讨其降糖机制。方法:体外检测AA对糖原磷酸化酶抑制作用和对HepG2细胞培养基中的葡萄糖消耗水平的影响。体内小鼠实验,采用灌胃AA7 d,以皮下注射肾上腺素造成高血糖模型,并与正常组一起测定静脉血糖和肝糖原含量。结果:AA具有抑制糖原磷酸化酶活性,其IC50为12.1μmol/L,AA能增加HepG2细胞对培养基中葡萄糖的消耗,并且可显著拮抗肾上腺素引起的血糖升高,对抗肾上腺素引起的肝糖原降解。结论:AA具有降血糖作用,机制与其抑制肝糖原分解有关。     

一种新型马鹿茸多肽纯化、鉴定及体外降血糖活性

从马鹿茸干品中分离具有降血糖活性的多肽。以新疆塔里木马鹿茸干品为原料,粉碎后经醋酸-醋酸钠(pH 3.5)缓冲液浸提,再经醇沉、超滤、离子交换色谱、凝胶过滤色谱和反相色谱纯化多肽,并对该多肽进行MALDI TOF/MS相对分子质量检测和LC-MS/MS鉴定。MTT法检测促胰岛β细胞增殖和STZ损伤后修复能力以及建立肝细胞胰岛素耐受模型检测该多肽促肝细胞葡萄糖消耗量活性。结果表明,分离纯化得到的多肽CAP经MALDI-TOF/MS检测,其相对分子质量为6 804,LC-MS/MS及相关数据库比对发现,CAP为一种新的肽。CAP能显著促胰岛β细胞的增殖和STZ损伤后的修复,并能显著增加肝细胞的葡萄糖摄入量。     

雷公藤甲素对人肝细胞L-02氧化损伤的初步研究

目的 研究雷公藤甲素对正常人肝细胞株L-02细胞凋亡和活性氧生成的影响.方法 体外培养L-02细胞,MTT法检测雷公藤甲素对L-02细胞的毒性作用,H2DCFH-DA探针流式细胞仪检测细胞中ROS生成量,并测定细胞SOD活性、MDA含量及LDH释放量的变化.结果 雷公藤甲素诱导L-02细胞中ROS生成,且随时间的延长而增多,至12h时达峰值(P＜0.01);同时,雷公藤甲素也能诱导细胞中MDA含量及LDH释放量的增加,诱导SOD活性的降低.结论 雷公藤甲素体外诱导人正常肝细胞L-02细胞凋亡可能与其促进活性氧生成有关.     

多替泊芬-光动力疗法肿瘤抑制效应的实验研究

目的观察多替泊芬-光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对肿瘤生长的抑制作用。方法 (1)体外杀伤效应实验,肿瘤细胞加药后孵育3h,采用波长627.8nm、功率密度20mW/cm2的激光照射300s,应用磺酰罗丹明B蛋白染色法(sulforhodamine B,SRB)检测多替泊芬对人口腔鳞癌细胞KB、人结肠腺癌细胞HCT-116、人胃腺癌细胞MKN-45、人宫颈上皮鳞癌细胞HELA、人食管癌细胞Eca-109、人膀胱癌细胞T-24等6株人实体瘤细胞增殖生长的抑制作用。(2)在体抗肿瘤效应实验,荷瘤裸小鼠单次静脉注射多替泊芬后1h,采用波长627.8nm、功率密度120mW/cm2的激光照射肿瘤30min,检测多替泊芬-PDT对裸小鼠人鳞癌KB、人胃腺癌MKN-28、人结肠腺癌HCT-116三种移植肿瘤的生长抑制作用。结果多替泊芬光动力治疗对6株人实体瘤细胞生长抑制的IC50为0.14～0.20μM;加药无激光照射时,对人实体瘤细胞无生长抑制作用。多替泊芬光动力疗法对人鳞癌KB、人胃腺癌MKN-28和人结肠腺癌HCT-116三种裸小鼠移植瘤有明显的生长抑制作用,该作用与药物剂量相关,10mg/kg多替泊芬光动力治疗后第24天上述三种移植瘤的相对肿瘤增值率分别为13.8%、11.7%、14.2%。结论多替泊芬-光动力疗法对本实验的6株人实体瘤细胞、三种实体瘤均有显著生长抑制作用,有较好的临床应用前景。     

β-榄香烯抗凝血溶血栓活性研究

目的：研究β-榄香烯体外抗凝血与溶血栓活性以及体内抗凝血,抗血小板聚集作用,为探讨β-榄香烯活血化瘀药效提供参考。方法：采用新西兰兔体外抗凝血法、血浆复钙时间实验及体外血栓法、全血块法研究β-榄香烯的体外抗凝血、溶血栓作用;采用皮下注射盐酸肾上腺素和冰水刺激复制大鼠急性寒凝血瘀证模型,通过观察凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）以及二磷酸腺苷（Adenosine diphosphate,ADP）和花生四烯酸（Arachidonic acid,AA）诱导血小板最大聚集率,研究β-榄香烯口服制剂对血瘀大鼠体内凝血功能的影响。结果：β-榄香烯各剂量组均能延长新西兰兔血浆复钙时间（P〈0.05）,加快体外血栓及全血凝块的溶解（P〈0.05）;β-榄香烯口服制剂高剂量组延长寒凝血瘀大鼠的凝血酶原时间（PT）（P〈0.05）,β-榄香烯口服制剂各剂量组延长寒凝血瘀大鼠的凝血酶时间（TT）（P〈0.01）,且对ADP和AA诱导的血小板最大聚集率有显著的抑制作用（P〈0.01）。结论：β-榄香烯具有抗凝血和溶血栓的作用。     

提高中药注射剂安全性的技术策略

中药注射剂的安全性问题受到业界和公众的广泛关注,提高中药注射剂安全性是目前较为紧迫的产业问题。本文从技术层面分析影响中药注射剂安全性的物质基础入手,针对共性问题,对提高蛋白质、缩合鞣质、树脂、多糖、核酸、草酸盐、钾离子等有关物质质控标准,增加安全性检查阳性率提出了具体的技术策略。最后针对中药注射剂安全性问题的特点,对生产提出相关工艺建议。