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目的 探讨在体外培养条件下,慢病毒载体介导的血红素加氧酶-1(HO-1)基因转染对骨髓间充质干细胞(MSC)增殖、表型及多向分化能力的影响。方法 分离培养大鼠源性骨髓MSC,利用过表达HO-1重组慢病毒载体(lenti-HO-1)将HO-1基因转染到MSC中,用荧光倒置显微镜及Western blot法分析评估转染效率。利用1.5μg/ml的嘌呤霉素筛选稳定过表达HO-1的MSC(MSC-HO-1)。用Western blot法检测MSC与MSC-HO-1内HO-1蛋白表达情况,用细胞计数法绘制MSC与MSC-HO-1的生长曲线,流式细胞仪检测MSC与MSC-HO-1表型,成骨、成脂及成软骨细胞诱导分化检测多向分化潜能变化。结果 MOI=50的 Lenti-HO-1可高效转染MSC。与MSC比较,MSC-HO-1在经过多次传代后仍能高效过表达HO-1,差异有统计学意义(P<0.05)。MSC-HO-1的增殖生长趋势、表面标志表达及多向分化潜能均与未转染的MSC相似。结论 重组慢病毒载体Lenti-HO-1可成功转染MSC并高效表达转入的基因;HO-1基因修饰对MSC增殖活性、免疫表型及多向分化潜能无显著影响。  相似文献   
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目的 构建大鼠 paralemmin-3(PALM3)基因重组慢病毒载体,探讨转染大鼠肺泡巨噬细胞系 NR8383细胞的最佳感染复数(MOI)值及目的基因 PALM3的表达情况。方法 采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增鼠 PALM3基因片段,并将其克隆到 pCV186-Cherry载体上;经 PCR及 DNA测序鉴定后,将重组质粒 pCV186-Cherry-PALM3、辅助包装质粒 pHelper 1.0与 pHelper 2.0共转染至 293T细胞进行重组慢病毒 lenti-CV186-Cherry-PALM3的包装,并用荧光标记法行滴度的测定。将不同 MOI值(0、1、10、20、50)的 lenti-CV186-Cherry-PALM3转染 NR8383细胞,依据转染效率得到最佳 MOI 值,以此 MOI 值感染 NR8383细胞,采用 Western blot 法检测目的基因的表达情况。结果 通过 PCR扩增获得了大小约 2 246 bp的目的基因片段,并成功连接到 pCV186-Cherry重组质粒上。PCR及 DNA测序结果证实重组质粒 pCV186-cherry-PALM3 携带正确的鼠 PALM3 基因并成功包装重组慢病毒颗粒。重组慢病毒 lentiCV186-Cherry-PALM3 的滴度测定为 3×108 TU/mL,感染 NR8383 的最佳 MOI 为 20,慢病毒 lenti-CV186-CherryPALM3 感染后 NR8383 细胞中 PALM3 的蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。结论 本实验成功构建了含大鼠PALM3基因的重组慢病毒载体 lenti-CV186-Cherry-PALM3,并能在 NR8383细胞中高效表达,为进一步研究 PALM3对肺泡巨噬细胞极化的影响奠定了基础。  相似文献   
3.
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目的 探讨经皮穿刺氩氦靶向冷冻治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的临床疗效,分析氩氦靶向冷冻联合化疗对肺癌局部控制及生存曲线的影响。方法 219例ⅢB和Ⅳ期NSCLC患者根据治疗情况分为单纯接受氩氦靶向冷冻治疗组(118例)和氩氦靶向冷冻联合化疗组(101例),评估治疗后近期局部控制情况及生存时间,并采用Cox回归模型对联合化疗组进行多因素生存分析。结果 单纯氩氦靶向冷冻治疗组与联合化疗组患者氩氦靶向冷冻冰球覆盖率差异比较无统计学意义(P>0.05);瘤体直径<4 cm患者较直径≥4 cm冷冻冰球覆盖率高,差异比较有统计学意义(P<0.05);氩氦靶向冷冻联合化疗组术后3个月局部有效控制情况较单纯氩氦靶向冷冻组高,差异比较有统计学意义(P<0.05);单纯氩氦靶向冷冻与联合化疗组中位生存时间分别为(15.00±1.48)个月和(20.00±2.21)个月,差异比较有统计学意义(P<0.05);对联合化疗组行多因素分析显示肿瘤大小、诊断分期及术后局部控制情况是影响远期生存率的独立危险因素(P<0.05)。结论 经皮穿刺氩氦靶向冷冻联合化疗治疗晚期NSCLC的近期局部控制情况及生存时间均优于单纯氩氦冷冻治疗;肺癌分期较早、瘤体较小及近期局部控制较好者相对预后较好。  相似文献   
5.
巨噬细胞是固有系统的单核吞噬细胞的亚群,具有高度可塑性和异质性,并且可以响应微环境信号进行表型/功能动态转换,包括具有不同功能的2个主要巨噬细胞亚群,即经典活化性巨噬细胞和选择活化性巨噬细胞。作者对巨噬细胞分型及其信号调控通路作一综述,探讨巨噬细胞转变为经典活化性巨噬细胞和选择活化性巨噬细胞的机制,以期为巨噬细胞相关性疾病的诊断和治疗提供新的策略。  相似文献   
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7.
目的 探讨骨髓间充质干细胞((bone marrow stromal cell,BMSCs)对内毒素(lipopolysaccharide, LPS)诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cellⅡ,AECⅡ)氧化应激的影响。方法 选用A549细胞代替AECⅡ,将实验分为A549组、A549+LPS组、A549-BMSC+LPS组及A549-BMSC+PBS组,即单独培养A549细胞或将BMSC与A549细胞共培养于Transwell体系,培养过夜后予LPS或等体积的PBS刺激。收集各组A549细胞样本,通过流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的表达水平,并利用化学检测试剂盒,通过分光光度计检测脂过氧化物(lipid peroxides,LPO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH)表达水平。结果 A549细胞在LPS的干预下,细胞内ROS表达水平(658.40±27.89)及其代谢产物LPO(1.46±0.15)、MDA(36.85±2.75)的水平明显升高(P<0.001),抗氧化因子SOD(13.44±3.32)、GSH(346.56±44.33)的活性明显降低(P<0.001);与A549+LPS组比较,A549-BMSC+LPS组ROS(544.61±41.30)、LPO(1.05±0.09)、MDA(10.63±0.95)的水平明显降低(P=0.001、P=0.006、P<0.001),SOD(33.41±3.59)、GSH(447.18±45.56)的活性明显升高(P=0.001、P=0.028);而与A549组比较,A549-BMSC+PBS组ROS(108.97±17.49)、LPO(0.12±0.03)、MDA(1.23±0.36)的表达水平呈下降趋势(P=0.033、P=0.004、P=0.012),SOD(68.33±8.01)、GSH(793.89±62.33)的活性进一步升高(P=0.001、P=0.002)。结论 BMSC能显著减轻LPS诱导的AECⅡ细胞的ROS生成,同时能正向调节其抗氧化的能力,可以一定程度上抑制LPS诱导的AECⅡ细胞的氧化应激反应。抑制肺泡上皮细胞氧化应激状态下ROS的产生、增强肺泡上皮细胞抗氧化的能力,或许可以成为治疗急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的新策略之一。  相似文献   
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烟雾吸入性急性肺损伤是火灾中伤员死亡的独立危险因素及死亡的主要原因。烟雾中有毒、有害化学气体和微粒引起的吸入性肺损伤是火灾后住院患者伤残的重要原因。近十年来,烟雾吸入性急性肺损伤相关的急救药物有了显著进展。  相似文献   
9.
目的分析早期肺康复训练在慢性阻塞性肺病急性加重期(acute exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease, AECOPD)患者机械通气治疗中的临床意义。 方法选择2020年5月至2021年10月在我院呼吸与危重症医学科住院治疗的72例AECOPD患者为对象,随机分为观察组37例和对照组35例,对照组采取常规抗感染、祛痰、解痉、呼吸机支持等治疗,观察组在此基础上从机械通气开始给与肢体训练、吸气肌抗阻、主动呼吸循环训练;检测两组患者PaO2、PaCO2、pH、乳酸,观察两组患者下肢静脉血栓发生率、机械通气时间、ICU平均住院时间及呼吸机相关肺炎发生率。 结果观察组下肢静脉血栓发生率(5.76% vs. 20.00%)、机械通气时间(11.40±1.32 vs. 14.46±1.86)d、ICU平均住院时间(16.15±1.93 vs. 18.55±2.34)d及呼吸机相关肺炎发生率(9.61% vs. 26.00%)优于对照组(P<0.05),观察组PaCO2第5天(44.07±11.00 vs. 52.89±5.52)mmHg和第10天(41.87±3.96 vs. 45.22±3.30)mmHg低于对照组,而pH、SaO2与PaO2高于对照组(P<0.05)。 结论对AECOPD机械通气的患者早期实施肺康复训练可显著改善血气指标,降低并发症的发生,促进早日康复具有意义。  相似文献   
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