双抗原夹心ELISA法检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶抗体

目的：建立检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase GliT,TR）特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,同时对其临床应用进行评价。方法：利用基因工程技术制备重组TR作为包被抗原和酶标记抗原,采用棋盘滴定法优化双抗原夹心ELISA法的反应条件,并考察ELISA法的敏感性、特异性以及重复性。用双抗原夹心ELISA法测定273例住院患者（侵袭性曲霉病50例、侵袭性念珠菌病46例、念珠菌定植82例、细菌感染95例）以及200例健康人血清,并与实验室前期建立的间接ELISA法检测TR抗体的结果进行比较。结果：双抗原夹心ELISA法工作条件为TR抗原包被浓度为1.0 μg/mL,酶标抗原1∶500稀释;封闭液含50 g/L脱脂奶粉溶液的PBS?T,待测血清稀释度为1∶100。患者血清检测结果显示,高、中、低3份血清批内变异系数（CV）分别为11.2%、11.8%和12.3%;不同批次重复测定6次,其批间CV分别为10.9%、12.1%和13.5%。重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为94.4%。通过ROC曲线确定吸光度的cut?off值为0.126。检测侵袭性曲霉病的敏感性和特异性分别为80.0%（40/50）和95.5%（404/423）,敏感性高于检测TR抗体的间接ELISA法（83.3% vs. 72.2%）。结论：建立了双抗原夹心ELISA法检测烟曲霉TR特异性抗体,可提高侵袭性曲霉病的诊断率,具有临床应用价值。