活性氧对肿瘤免疫检查点的调控作用及机制研究进展

免疫检查点(immune checkpoints, ICs)是一类在免疫细胞上表达的免疫抑制性分子,能调节免疫激活程度。免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors, ICIs)可阻断免疫检查点与其配体结合,抑制肿瘤免疫逃逸作用,提高免疫系统对肿瘤细胞的杀伤作用,逐渐成为肿瘤治疗的一种常规策略。然而,响应率低与耐药性的产生严重影响了免疫检查点抑制剂的临床疗效。活性氧(reactive oxygen species, ROS)是一类性质活泼的氧的电子还原产物,也是细胞代谢的天然副产物,可作为细胞间信号传递的调节分子。肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)常处于氧化应激(oxidative stress, OS)状态,即氧化系统与抗氧化系统之间的失衡状态。存在于TME中的ROS可通过调节肿瘤免疫检查点的表达及活性,影响免疫检查点与其配体之间的相互作用,进而影响免疫细胞的抗肿瘤作用。越来越多的研究表明, ROS可通过多种途径调控肿瘤免疫检查点。因此,选择合适的ROS调节剂与免疫检查点抑制剂联合用药,可为肿瘤免疫发挥协同增效作用。本文就...     

缺氧微环境下仙连解毒方抑制结直肠癌细胞增殖的作用及机制

目的 观察缺氧微环境下仙连解毒方对含溴结构域蛋白4（Brd4）诱导的核转录因子-κB（NF-κB）信号通路激活的影响,探讨其抑制结直肠癌细胞HT-29增殖的作用机制。方法 于缺氧培养箱或常氧培养箱中培养人结直肠癌细胞HT-29,给予仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L^-1）干预细胞48 h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;采用线粒体膜电位荧光探针（JC-1）检测仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L^-1）对细胞线粒体膜电位的影响,采用流式细胞术检测结直肠癌细胞HT-29凋亡情况;细胞克隆形成实验及5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EDU）法检测结直肠癌细胞HT-29细胞增殖能力;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Brd4及其下游蛋白如c-核蛋白类基因（c-Myc）、六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白1（HEXIM1）的表达水平,同时检测仙连解毒方对NF-κB信号通路相关蛋白的影响。结果 与空白组比较,仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L^-1）组均能抑制结直肠癌细胞HT-29细胞活力（P<0.05,P<0.01）,且缺氧培养下细胞半数抑制浓度（IC₅₀）>常氧培养组。与空白组比较,仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L^-1）组细胞线粒体膜电位明显下降、细胞凋亡增多（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L^-1）组细胞克隆数减少,EDU阳性细胞数减少（P<0.05,P<0.01）。Western blot结果示,与空白组比较,仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L^-1）组细胞内Brd4、c-Myc蛋白表达量均有不同程度的下降,HEXIM1表达升高（P<0.05,P<0.01）;磷酸化（p）-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）蛋白表达下调（P<0.05,P<0.01）。结论 缺氧微环境下仙连解毒方可抑制Brd4调控的结直肠癌细胞HT-29增殖,抑制NF-κB信号通路的激活可能是其机制之一。     

中药湿敷对糖尿病足溃疡患者血管介入术后疗效影响

〖H观察中药湿敷干预糖尿病足溃疡脉络瘀热证血管介入术后的临床疗效。方法 将57例糖尿病足溃疡患者随机分为治疗组和对照组,治疗组29例,对照组28例。2组均给予下肢动脉血管介入术及基础治疗,治疗组在对照组基础上给予中药湿敷创面,治疗8周后观察临床疗效。结果 治疗组、对照组临床总有效率分别为93.10%和78.57%,治疗组优于对照组（P＜0.05）。经血管介入治疗,2组踝肱比(ABI)水平均比治疗前明显减小（P＜0.01）,组间比较,P＞0.05。治疗后2组中医证候积分均有改善（P＜0.01）,治疗组明显优于对照组（P＜0.01）。2组创面面积、伤腔容积均比治疗前明显减小（P＜0.01）,治疗组改善优于对照组（P＜0.05）;治疗后2组创面愈合率组间比较,治疗组优于对照组（P＜0.05）。结论 糖尿病足溃疡患者经血管介入治疗后,血供状况得以改善,联合中药湿敷能进一步促进创面愈合,优于单纯接受血管介入治疗。     

基于毛细管电泳的同时检测三种蚊媒病毒方法的建立

目的 建立基于毛细管电泳的同时检测登革热病毒（DENV）、黄热病毒（YFV）和寨卡病毒（ZIKV）三种蚊媒病毒性传染病的技术方法。方法 通过对黄病毒属成员全长基因组多序列比对，分别针对DENV、YFV和ZIKV基因组保守区设计特异性引物，通过PCR并结合毛细管电泳对靶基因进行鉴定；通过构建基于毛细管电泳的分子靶标，对上述三种蚊媒病毒性传染病进行精准鉴定。结果 DENV、YFV和ZIKV全长基因组核苷酸一致性达50.5%以上。通过PCR并结合毛细管电泳均能精确鉴定出大小分别为79 bp、139 bp和168 bp的靶基因，具有较好检测特异性和准确性。构建的分子靶标可实现同时对上述三种蚊媒病毒性传染病精确鉴定。结论 本研究建立了以毛细管电泳为基础的同时精准鉴别上述三种蚊媒传播病毒性疾病的精准鉴定技术方法，为国境口岸、基层医疗等机构开展蚊媒传染病防控提供了新的技术支持。     

“血管-免疫交联”策略在肿瘤治疗中的研究进展

恶性肿瘤是目前威胁人类健康安全的重要原因之一,抗血管生成药物和免疫检查点抑制剂的应用为肿瘤治疗带来了希望,然而肿瘤血管与免疫微环境之间相互交错的复杂关系导致其疗效不如人意。散乱的肿瘤血管阻碍CD8⁺T细胞进入肿瘤微环境,而且肿瘤血管生成的关键驱动力VEGF干扰树突状细胞的成熟,从而抑制T细胞的启动,VEGF还诱导CD8⁺T细胞的耗竭。同时,多种先天免疫细胞和获得性免疫细胞分泌促血管生成因子,加速失控的血管生成,促进血管不成熟。因此,靶向肿瘤血管和免疫是加强肿瘤免疫治疗的一种有潜力的策略。近年来,大量研究发现运用血管与免疫相互干预的策略来进行联合抗肿瘤免疫治疗取得了很好的效果。该综述对免疫和血管交联肿瘤微环境进行总结与讨论,综述了近几年内运用血管-免疫相互干预策略治疗肿瘤的研究进展,为进一步提高肿瘤免疫治疗的疗效提供参考。     

从“三焦-营卫”气化失常角度探析肿瘤T细胞耗竭机制

为推动三焦理论、营卫理论的创新转化应用，该文试将“三焦-营卫”气化理论应用于肿瘤病论治之中，将其与T细胞耗竭机制相融合以阐述其科学内涵，并运用网络药理学与生物信息学阐发调畅“三焦-营卫”气化方抗肿瘤机制与T细胞耗竭相关性。“三焦-营卫”气化功能与人身免疫代谢功能密切，“三焦-营卫”气化体系构成了细胞内外环境免疫代谢交流体系。癌毒由伏郁三焦的秽浊杂气所生，癌毒长期伏郁三焦所致的是导致T细胞耗竭的首要因素，其与肿瘤微环境中存在的高肿瘤抗原负荷长期激活T细胞受体相关。三焦气化不利生痰聚瘀是促使T细胞耗竭的主要因素，其与免疫抑制肿瘤微环境中营养剥夺、脂质堆积、高乳酸水平相关，亦与肿瘤微环境中肿瘤相关成纤维细胞及血小板释放转化生长因子-β、上调表达程序性死亡受体-1表达相关。三焦气化不利所致的营卫损伤，与耗竭T细胞效应功能累进式丧失、细胞能量代谢紊乱等异常表现相类似。桂枝汤、升明汤、温胆汤等调畅“三焦-营卫”气化方可通过多靶点多通路以纠正T细胞耗竭发挥抗肿瘤作用，缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）可能是上述三方纠正T细胞耗竭主要通路之一。通过生物信息学手段发现HIF-1α可能是常见肿瘤中重要预后指标之一，运用调畅“三焦-营卫”气化法在临床实践中可能对改善肿瘤患者预后具有重要作用。     

新型补骨脂素PAP-1对大鼠动脉粥样硬化的影响及心脏保护作用

  目的  探讨5-(4-苯氧基丁氧基)补骨脂素(PAP-1)对大鼠动脉粥样硬化(AS)的影响及心脏保护作用。  方法  建立AS大鼠模型,随机分为对照组、模型组、PAP-1组和阿托伐他汀(AV)阳性药组。HE染色观察颈动脉形态学改变,Western blot法检测巨噬细胞清道夫受体1(MSR1)和ATP结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达,COD-PAP酶法检测血清总胆固醇(CHO)含量,ELISA法测定血清炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β含量,麦胚凝集素(WGA)染色测量心肌细胞面积,Vevo 3100高分辨动物超声影像系统观察各组大鼠左心室形态并计算心功能,Masson和免疫组织化学法检查心肌组织纤维化程度。  结果  PAP-1可以降低AS大鼠血清CHO含量和炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平;下调AS大鼠颈主动脉MSR1,上调ABCA1蛋白表达;减轻AS大鼠颈主动脉管壁增厚。此外,PAP-1可以抑制AS大鼠心肌细胞面积增大和心室壁增厚,减轻心肌组织纤维化程度。  结论  PAP-1对AS大鼠具有一定保护作用,可能与降低血清血脂和炎症因子水平,调控MSR1和ABCA1蛋白表达有关。PAP-1还对AS大鼠心脏具有保护作用,表现为改善AS大鼠心脏结构和功能异常,抑制心肌纤维化等。      

仙连解毒方对人结直肠癌细胞增殖及糖酵解的调控作用及机制

目的 观察仙连解毒方对人结直肠癌细胞HCT-116增殖及糖酵解的影响,并探讨其潜在的分子机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法测定仙连解毒方处理结直肠癌细胞HCT-116后的存活率,细胞克隆形成实验和5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EDU）细胞增殖实验检测细胞增殖能力,葡萄糖试剂盒检测仙连解毒方处理结直肠癌HCT-116细胞48 h葡萄糖摄取量的变化,乳酸试剂盒检测仙连解毒方处理结直肠癌HCT-116细胞48 h乳酸生成量的变化,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、乳酸脱氢酶（LDHA）等糖酵解相关蛋白的表达,探讨仙连解毒方对结直肠癌糖酵解过程的影响。结果 仙连解毒方对结直肠癌HCT-116细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为6.82 g·L^-1;克隆形成实验和EDU细胞增殖实验表明,与空白组比较,仙连解毒方（1.625、3.25、6.50 g·L^-1）均能明显抑制结直肠癌HCT-116细胞增殖（P<0.05,P<0.01）;葡萄糖检测和乳酸检测表明,与空白组比较,仙连解毒方（1.625、3.25、6.50 g·L^-1）能有效抑制葡萄糖摄取和乳酸生成（P<0.05,P<0.01）,且有剂量依赖性;Western blot表明,与空白组比较,仙连解毒方（1.625、3.25、6.50 g·L^-1）均能下调p-mTOR/mTOR、LDHA、GLUT1蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）,且随剂量的增加而降低。结论 仙连解毒方对结直肠癌细胞的增殖和糖酵解中的瓦博格效应（Warburg）具有明显的抑制作用,其机制可能与调控mTOR信号通路,下调LDHA、GLUT1等糖酵解过程中的关键蛋白和酶类的表达水平有关。