骨形成蛋白信号分子在小鼠椎间盘发育中的表达

目的:探索促进成骨相关的骨形成蛋白(BMP)-2、-4、-6、-7、-9以及抑制成骨作用的BMP-3在小鼠不同年龄段椎间盘中表达情况,为椎间盘发育过程中BMP信号途径的研究奠定重要基础.方法:解剖获取出生后1d、3d、1周、1个月、3个月、6个月龄小鼠的椎间盘及胸腰椎脊柱.RT-PCR检测BMP-2、-3、-4、-6、-7、-9在生后不同年龄段小鼠椎间盘的表达情况,免疫印迹及免疫组织化学验证在RT-PCR中有明显表达差异的BMP-3、-6.结果:RT-PCR结果显示BMP-2、-7、-9的表达在小鼠椎间盘组织中有一定的基础表达,但随着年龄增大没有明显的变化趋势,而BMP-3和BMP-6的表达整体呈现出下降的趋势,BMP-4在椎间盘中无表达,免疫印迹及免疫组织化学结果也证实BMP-3和BMP-6随着小鼠椎间盘的发育表达降低.结论:正常小鼠脊柱,随着年龄的增加,椎间盘中BMP-2、-7、-9的表达无明显变化趋势,各年龄段都维持着一定量的表达,BMP-3和BMP-6的表达整体呈现出下降的趋势,具有明显成骨作用的BMP-4则没有表达.     

3-D多孔结构的小肠黏膜下组织在兔膀胱再生中的应用

目的 探讨3-D多孔结构的小肠黏膜下组织(small intestine submucosa,SIS)在新西兰大白兔膀胱再生中的应用.方法 用物理及化学方法制备具有3-D多孔结构的SIS.将24只雄性新西兰大白兔随机分为3组(n=8),分别行膀胱半切术建立膀胱缺损模型,使用3种不同处理的SIS进行膀胱重建.A组:未经过氧乙酸(peroxyacetic acid,PAA)处理的SIS组;B组:PAA处理的SIS组;C组:PAA处理后100％胎牛血清浸润的SIS组.3组在术前及术后4周测定膀胱容量,并于术后4周取材,行大体观察及组织学检测,评估膀胱再生情况.结果 应用SIS行兔膀胱重建术后4周,3组再生膀胱组织与周围组织粘连依次降低,结石率分别为33.3％、28.6％、14.31％.与术前自身比较,术后4周3组膀胱最大容量均缩小且依次增加,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).术后组织学检测示3组膀胱上皮细胞均有再生,与A组比较,B、C组的上皮再生更好,边缘区和中心区无明显差异.3组膀胱平滑肌的再生均不理想,但边缘区平滑肌再生较中心区多;在边缘区和中心区,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).3组在边缘区和中心区的再生血管面积依次增加,3组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 经PPA及胎牛血清处理后3-D多孔结构的SIS,具有良好的促进膀胱组织再生能力,是一种比较理想的修复支架材料.     

骨形态发生蛋白-7对胚胎小鼠髓核细胞成骨分化和Notch信号表达的影响

目的：探索骨形态发生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7,BMP-7）诱导胚胎小鼠椎间盘髓核细胞（nucleus pulposus,NP）的成骨分化及对经典Notch信号通路的调控作用。方法：重组腺病毒BMP-7（recombinant adenovirus-mediated bone mor－phogenetic protein-7,Ad-BMP-7）、绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,Ad-GFP）在HEK293细胞中扩增,感染NP细胞。实验分为BMP-7组（n=3）、GFP组（n=3）、空白组（n=3）。RT-PCR检测BMP-7的mRNA水平表达;Real-time PCR检测成骨指标骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）以及经典Notch信号通路分子的mRNA表达水平;Western blot检测成骨转录因子Runx2和OPN的蛋白表达水平;采用碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）读数和ALP染色检测ALP活性。结果：Ad-BMP-7和Ad-GFP在HEK293细胞中高滴度的扩增。NP细胞中BMP-7的基础表达很低,Ad-BMP-7感染NP细胞可高表达BMP-7,并明显提高OPN、OPG的mRNA水平表达（OPN：BMP-7组21.16±0.45,GFP组1.00±0.07,空白组2.84±1.27,F=613.815,P=0.000,BMP-7组与GFP组、空白组比较均P=0.000;OPG：BMP-7组2.05±0.37,GFP组1.00±0.06,空白组1.22±0.36,F=10.046,P=0.012,BMP-7组与GFP组比较P=0.016,与空白组比较P=0.047）,成骨转录因子Runx2及OPN的蛋白表达水平也均高于对照组,特异性成骨指标ALP的活性明显增强,ALP染色呈紫蓝色,明显高于对照组（BMP-7组222 676.8±7 643.2,GFP组31 455.5±4 930.6,空白组42 407.3±10 926.8,F=513.417,P=0.000,BMP-7组与GFP组、空白组比较均P=0.000）。Ad-BMP-7感染3 d可促进Notch信号通路Notch-1、Notch-2、Jag-1、Hey-1的mRNA水平表达增高（Notch-1：BMP-7组5.90±0.66,GFP组2.83±0.32,空白组1.00±0.05,F=94.574,P=0.002,BMP-7组与GFP组比较P=0.003,与空白组比较P=0.004;Notch-2：BMP-7组150.35±11.78,GFP组1.94±0.46,空白组1.01±0.19,F=318.962,P=0.001,BMP-7组与GFP组、空白组比较均P=0.000;Jag-1：BMP-7组7.97±0.00,GFP组2.22±0.71,空白组1.00±0.00,F=166.476,P=0.001,BMP-7组与GFP、空白组比较均P=0.000;Hey-1：BMP-7组11.23±0.4,GFP组0.42±0.04,空白组1.00±0.10,F=1 082.054,P=0.000,BMP-7组与GFP组、空白组比较均P=0.000）,但第7天回复到基础表达水平,其余信号分子表达无明显差异。结论：腺病毒介导的BMP-7可诱导NP细胞成骨分化,可能与Notch信号通路部分分子的一过性上调相关。     

分泌性卷曲相关蛋白3影响小鼠胚胎肝干细胞体外成熟分化的实验研究

目的 检测不同发育阶段的肝组织中Wnt信号拮抗因子分泌性卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related protein,SFRP)的表达,并探讨SFRP3对胚胎肝干细胞体外成熟分化的影响.方法 分离胚胎12.5 d至出生后4周共9个阶段的小鼠肝组织,RT-PCR检测5种SFRPs在肝组织及胚胎肝干细胞...     

壳聚糖和油酸钠修饰的超顺磁性四氧化三铁纳米粒子的细胞毒性

目的 研究壳聚糖和油酸钠修饰的超顺磁性四氧化三铁纳米粒子（superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs）的细胞毒性,为临床应用提供实验依据。方法 用透射电子显微镜对壳聚糖SPIONs和油酸钠SPIONs进行形态学观察;用10 μg/mL的壳聚糖SPIONs和油酸钠SPIONs悬液处理体外培养的人肺腺癌细胞A549,普鲁士蓝染色观察2种SPIONs在细胞内的分布;用不同浓度（0、25、50、100和200 μg/mL）的2种SPIONs分别处理A549细胞,MTT法测定细胞生长活性;2种SPIONs染毒A549细胞48 h时,测定上清液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性;DAPI染色法观察细胞凋亡情况。结果 （1）2种SPIONs均呈类球形结晶,粒径20~30 nm,此时四氧化三铁纳米粒子之间的热振动能足以克服磁吸引力而呈现超顺磁性。（2）普鲁士蓝染色显示细胞内可见蓝色沉着,说明2种SPIONs均可进入A549细胞内。（3）MTT检测结果显示壳聚糖SPIONs对细胞生长几乎无抑制,而200 μg/mL 油酸钠SPIONs在48 h和72 h时对细胞有明显的抑制作用（P<0.05）。（4）200 μg/mL壳聚糖SPIONs染毒细胞的上清液中LDH活性稍高于对照组（P<0.05）,而100 μg/mL和200 μg/mL油酸钠SPIONs染毒细胞的上清液中LDH活性均高于对照组（P<0.05）,同时也高于相同浓度壳聚糖SPIONs染毒组（P<0.05）。（5）DAPI凋亡检测显示,壳聚糖SPIONs染毒细胞与对照组间差异无统计学意义,而油酸钠SPIONs染毒细胞发生明显的细胞核皱缩及胞核碎裂现象,且细胞凋亡率高于对照组（P<0.05）。结论 壳聚糖SPIONs与油酸钠SPIONs相比具有较低的细胞毒性。     

弹性髓内钉固定治疗儿童下肢长管状骨骨折

目的 探讨弹性髓内钉(titanium elastic nails,TENs)固定治疗儿童下肢长管状骨骨折的疗效. 方法 2004年6月-2010年10月在C形臂X线机监视下采用TENs治疗儿童下肢长管状骨骨折患者278例,其中男181例,女97例;年龄3～14岁,平均7.6岁.股骨骨折162例,其中35例采用切开复位内固定,其余均采用闭合复位.胫骨骨折116例,均采用闭合复位内固定,术后支具固定3～4周.平均住院7d.272例于术后半年内取出内固定,242例获得1年以上的随访,并继续观察肢体长度和患儿髋膝关节活动以及步态情况. 结果 所有患者随访6～66个月,平均33个月.骨折均愈合,无严重并发症发生.术后无一例出现感染、延迟愈合、骨折不愈合、TENs折断、骨骺损伤等并发症.有10例于术后3～4个月出现钉尾红肿而提前拔钉.19例出现双下肢＜1.0 cm不等长,无明显跛行,下肢各关节功能无异常.根据Flynn评价标准,优良率达到100％. 结论 TENs固定治疗儿童下肢长管状骨骨折具有稳定性好、愈合快、切口小、复位满意、不破坏骨膜、利于骨折愈合、住院时间短、并发症少等特点,是治疗儿童下肢长管状骨的理想方法之一.