结缔组织生长因子对胰腺癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨结缔组织生长因子(CTGF)在胰腺癌中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和转移的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(PCR)和免疫组化方法,分别检测胰腺癌细胞株PANC-1和50例胰腺癌组织中CTGF的表达.采用重组腺病毒介导的CTGF转染PANC-1细胞使CTGF高表达,以RNA干扰方法使CTGF表达缺失,分别通过四甲基偶氮唑蓝(MMT)法、划痕实验、体外侵袭实验观察PANC-1细胞增殖和转移能力的变化.结果 实时定量PCR和免疫组化检测均显示,CTGF在PANC-1细胞及胰腺癌组织中高表达.CTGF转染后,CTGF转染组PANC-1细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显增强,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为34个,比空载体对照组(11个)明显增多.干扰CTGF后,siCTGF转染组细胞比空载体对照组增殖能力和修补划痕能力明显降低,200倍显微镜视野下的穿膜细胞数为6个,比空载体对照组(15个)明显减少.结论 CTGF在胰腺癌中高表达,其表达的高低对胰腺癌细胞的增殖和转移有显著影响.     

微型腹腔镜治疗小儿腹股沟斜疝的探讨

小儿腹股沟斜疝治疗的主要方法是疝囊高位结扎，从最初的传统开刀方式到现今广泛应用的腹腔镜方式，经历了从怀疑、争论、认可到流行的不同阶段，但仍需进一步探索和完善，力求完美。     

儿童肝移植术后供体生活质量分析

目的 调查儿童活体肝移植术后供体的生活质量情况并探讨影响其生活质量的主要因素.方法 采用简明健康调查问卷(SF-36),对2005年1月至2014年12月在四川大学华西医院和重庆医科大学附属儿童医院实施的86例儿童活体肝移植供体进行了生活质量调查.所有纳入供体为不带肝中静脉的左半肝或左外叶切除者,且无重大并发症,能够较好应用汉语沟通者.将调查结果与普通人群生活质量进行比较,并对可能影响生活质量的因素进行分析探讨.结果 共发放符合调查要求的问卷80例,有效回收问卷71例(88.7％).男24例,女47例,平均年龄(29.4±8.0)岁.胆道闭锁患儿供体35例,代谢性肝病患儿供体15例,原发性肝硬化患儿供体11例,肝肿瘤及其他疾病患儿供体10例.移植供体主要为受体父母.总体上,肝移植供体术后生活质量水平在各维度与普通人群没有明显的差异(P＞0.05);胆道闭锁患儿供体在精神健康维度得分优于非胆道闭锁患儿供体(P=0.029);全自费医疗患儿供体在总体健康方面得分明显低于具有医疗保险患儿的供体(P=0.033);供体手术2年后在生理功能(P=0.038)及躯体疼痛(P=0.040)维度得分较术后2年内明显增高;应用主成分分析将生活质量8个维度综合为1个维度,结果提示术后时间是影响肝移植供体术后生活质量的首要因素(P=0.037).结论 儿童肝移植供体术后生活质量状况良好,术后时间、受体原发病和受体医疗形式是影响供体生活质量的主要因素.     

2种麻醉方式对小儿腹腔镜手术应激反应的干预

目的 探讨有效调控腹腔镜手术患儿围手术期应激反应的麻醉方式.方法 1～3岁ASA Ⅰ-Ⅱ腹腔镜手术患儿40例,按随机数宁表法分为全麻组(GA组)和全麻复合硬膜外阻滞组(GEA组),各20例.术中监测HR、MAP、SpO2、PrrCO2、并于麻醉前5 min(T0)、气腹前5 min(T1)、气腹开始后5 min(T2)、气腹开始后30 min(T3)、气腹结束后30min(T4)及气腹结束后24 h(T5),抽血测肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、IL-6及IL-10浓度.结果 ①与T0比较全麻组HR、MAP在T2、T3、T4时显著升高;GEA组内比较差异无统计学意义(P>0.05),2组间比较差异有统计学意义(t=4.749,t=10.349,t=13.632,t=10.051,P<0.01).② E、NE均随手术进行逐渐升高,T5时E仍高于T0时,GEA组NET5时已明显下降.GEA组在T2、T3、T4、T5各时点E和NE含量均明显低于GA组,差异有统计学意义(P<0.05).③2组IL-6水平与T0时比较,T2、T3、T4时升高,T5时开始下降,差异有统计学意义(P<0.05),组间比较差异无统计学意义(P>0.05).2组IL-10随手术时间升高与T0相比差异有统计学意义(P<0.05),且GEA组较GA组T3～T5时增高有统计学意义(P<0.05).结论 小儿腹腔镜手术可致明显的应激反应,全麻复合硬膜外阻滞麻醉方式较全麻具有改善血流动力学、患儿苏醒快且有效抑制应激反应程度的优势.     

CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞在大鼠肝移植天然免疫耐受模型中的作用

目的 通过采用流式细胞技术对比分析研究,大鼠肝移植免疫耐受模型中CD4+CD25+Foxp3+T+reg细胞亚群的分布变化来研究揭示CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞亚群在移植免疫耐受过程中发挥的重要作用.方法 通过改良的Kamada"二袖套法"建立两种不同种属大鼠的免疫耐受和急性免疫排斥模型,再通过流式细胞技术检测两个模型大鼠CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞亚群分布有无区别.主要观察指标:两组肝移植大鼠的存活率比较,应用常规HE染色法观察移植肝组织病理学变化,检测CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞亚群在两组大鼠,肝脏、外周血、胸腺和脾脏总单核细胞数中所占的百分比.RT-PCR检测移植肝脏Foxp3 mRNA的表达水平.结果 耐受组大鼠可以不服用任何免疫抑制药物而长期存活(>2个月),且排斥组大鼠最多只能存活7～10d,免疫耐受组在肝脏、外周血、脾脏和胸腺单核细胞中CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞亚群所占的比例明显高于排斥组(P<0.05),且在移植肝脏中,免疫耐受组的Foxp3 mRNA表达含量明显高于排斥组.结论 在LEW→DA的大鼠免疫耐受模型中,CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞亚群细胞数量和比例明显升高,提示CD4+CD25+Foxp3+T-reg细胞亚群在移植免疫耐受过程中发挥着重要作用,从而为我们临床诱导免疫耐受提供一条新的思路.我们可以通过体外扩增抗原特异性的天然存在的调节性T细胞来抑制效应T细胞的激活和扩增,从而帮助诱导移植免疫耐受和抑制移植物排斥.     

载药微泡逆转恶性肿瘤多药耐药的研究进展

恶性肿瘤是严重威胁人类生命健康的重大疾病,化学药物在恶性肿瘤治疗中起着重要的作用。尽管新的抗癌药物和化疗方案不断推出,临床治疗仍达不到理想的预期效果。究其原因,肿瘤对化疗药物产生耐药性是严重影响治疗效果的重大难题,直接影响化疗的成败。     

Ad-EGFP-MDR1转染对小鼠骨髓细胞的影响

目的：通过研究Ad-EGFP-MDR1转染的骨髓细胞的细胞周期,凋亡相关蛋白表达和增殖分化有无改变,探讨基因修饰的骨髓细胞用于治疗的可行性。方法：用重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染小鼠骨髓细胞,采用体外集落培养观察转染骨髓细胞与未转染细胞的增殖能力。采用免疫印迹检测两组细胞有无凋亡相关蛋白Bax、Caspase-9、p53的表达差异。使用流式细胞仪检测两组细胞的细胞周期有无差异。通过锥虫蓝拒染率判断细胞存活情况。结果：与对照组骨髓细胞比较,转染Ad-EGFP-MDR1的骨髓细胞体外集落形成差异无统计学意义。在转染的骨髓细胞和对照细胞中均未检测到凋亡相关基因Bax,Caspase-9,p53的表达,转染骨髓细胞与未转染对照骨髓细胞比较细胞周期差异无统计学意义（P>0.05）。锥虫蓝染色两组细胞的拒染率差异无统计学意义（P>0.05）。结论：骨髓细胞转染重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1后其细胞凋亡相关基因,细胞增殖分化能力及细胞活性无明显变化,有利于进一步开展基因修饰骨髓细胞体内回输和体内安全性检测。     

超声微泡造影剂促腺病毒介导MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的作用机制及安全性研究

目的 探讨超声微泡造影剂促进以腺病毒为载体介导的多药耐药基因1(MDR1)体外转染兔骨髓单个核细胞的作用机制和安全性.方法 根据是否加入超声微泡造影剂和进行超声辐照将分选的兔骨髓单个核细胞分为常规培养组(A)、腺病毒转染组(B)、腺病毒转染+超声辐照组(C)、腺病毒微泡造影剂转染组(D)和腺病毒微泡造影剂转染+超声辐照组(E).不同实验因素处理后,采用流式细胞仪检测各组细胞外源性MDR1基因的转染率,同时观测转染后不同时间各组细胞体外扩增情况;台盼蓝拒染法计数各组细胞的存活率;分别用扫描电镜和透射电镜观察超声辐照后细胞超微结构的改变.结果 流式细胞仪检测各组细胞MDR1基因的转染率分别为0.39%土0.11%、5.03%±0.35%、4.93%±0.38%、5.25%±0.80%,19.93%±1.51%,E组明显高于其余4组(P＜0.05);试验各组细胞在转染后不同时期体外增殖情况差异无统计学意义(P＞0.05),各组细胞存活率差异亦无统计学意义(P＞0.05);一定强度的超声辐照后,骨髓单个核细胞胞膜出现一过性的小孔,细胞器发生可逆性肿胀改变.结论 超声微泡造影剂可使兔骨髓单个核细胞通透性暂时性提高,促进腺病毒载体介导的MDR1基因转染;同时不会对细胞的增殖能力、存活率及超微结构造成严重的不可逆损害,证明其是一种安全可行的基因转移新方法.     

诱导血红素加氧酶-1高表达对大鼠减体积肝移植生存的影响

目的为了明确血红素加氧酶-1的高表达对大鼠减体积肝移植生存的影响,进而探索出一条有效地防止小体积移植肝缺血再灌注损伤的方法。方法利用分子生物学方法构建携带有HO-1基因的重组腺病毒Ad5-HO-1,对供体进行预处理,并观察Ad5-HO-1对大鼠小体积移植肝缺血再灌注损伤的保护作用。结果Ad5-HO-1组与对照组相比较ALT水平有显著降低(P＜0．05)；术后2 h内门静脉血流流量有明显增加(P＜0．05)；HO-1酶活性测定显示Ad5-HO-1组酶活性为(5．34±0．41)×10~(-3)mmol·mg~(-1)·mm~(-1),较对照组明显为高(P＜0．05)；RT-PCR和免疫组化检测HO-1、TNF-α、Bcl-2、Bax表达,证实Ad5-HO-1组中HO-1、Bcl-2的表达是增高的,而Bax、TNF-α表达是降低的(P＜0．05)；Ad5-HO-1组在1、7、21d的生存率分别为100%、85．7%、71．4%,而对照生理盐水组在1、7、21 d的生存率分别为66．7%、16．7%、16．7%(P＜0．05)。结论Ad5-HO-1的应用能够显著地增加术后2 h内门静脉血流,有利于受体术后肝功能的恢复,从而改善大鼠移植术后的生存结果。实验结果提示HO-1的高表达在防止和减轻小肝移植物缺血再灌注损伤的过程中扮演着重要的角色,进而为临床上防止小肝移植物缺血再灌注损伤提供了一条新的思路和方法。     

ATRA耐药基因HA117相关蛋白在四种恶性肿瘤的表达及临床意义

目的探讨ATRA耐药基因HA117相关蛋白在肠腺癌、肺癌、乳腺癌及神经母细胞瘤组织中的表达特点及临床意义。方法以肠腺癌标本20例、肺癌标本23例、乳腺癌标本21例以及神经母细胞瘤标本20例手术切除组织为实验组;以巨结肠手术切除扩张段近切H缘的正常结肠组织10例、手术切除的肺癌癌旁组织9例、乳腺癌癌旁组织11例及神经母细胞瘤瘤旁组织14例为对照组;应用免疫组化S-P法检测HA117蛋白在上述组织切片中的表达,并结合临床资料进行回顾性分析。结果HA117在肠腺癌、肺癌、乳腺癌以及神经母细胞瘤组织中阳性表达明显高于非癌组织,差异具有统计学意义（P〈0．05）;HA117蛋白的阳性表达与肠腺癌、肺癌及乳腺癌患者的肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移无明显相关性（P〉0．05）,与神经母细胞瘤的病理分型和淋巴结转移有显著相关性（P〈0．05）。结论HA117蛋白在肠腺癌、肺癌、乳腺癌以及神经母细胞瘤组织的高表达提示这四种恶性实体肿瘤对ATRA具有较强的耐药性。