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梅毒螺旋体外膜蛋白Gpd的基因型分析及其重组蛋白的免疫原性鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 构建梅毒螺旋体 (Treponemapallidum ,Tp)外膜蛋白Gpd基因的原核表达载体 ,检测其表达产物的免疫原性 ,并比较梅毒螺旋体各菌株Gpd基因序列的同源度。方法 从TpNichols株基因组模板中PCR扩增Gpd基因 ,与GenBank登录的序列做blast比较 ,定向克隆构建原核表达重组体pET2 8b( + ) -Gpd ,转入大肠杆菌ril表达菌 ,SDS -PAGE分析重组蛋白的表达 ,Western -blot检测重组蛋白的免疫原性。结果 载体上所连目的基因片段序列与GenBank登录的Nichols株Gpd基因序列完全一致 ,同其他病原性密螺旋体菌株登陆序列比较同源度为 98%~ 1 0 0 %。SDS -PAGE检测诱导产物显示有一Mr约为 41kDa的特异蛋白带 ,免疫印迹技术检测其能与梅毒阳性标准血清反应。结论 Tp原核表达重组体pET2 8b( + ) -Gpd成功构建 ,且能够在ril表达菌中融合表达 ,为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了一定的实验基础。 相似文献
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GFP-HPVl8 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体的构建与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建人乳头瘤病毒18型早期蛋白2(HPV18 E2)删除突变体N端(TAD)、C端(DBD)与增强型绿色荧光蛋白(GFP)融合蛋白的真核表达载体,为研究HPV18 E2基因与宫颈癌发生的关系提供实验基础.方法 用PCR扩增HPV18 E2 TAD、DBD基因序列,用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切pEGFP-Cl载体与TAD、DBD基因PCR产物,纯化回收后,用连接酶连接并转化大肠杆菌JM109,筛选阳性克隆,并对其进行双酶切和测序鉴定.结果 阳性克隆质粒经双酶切后,琼脂糖凝胶电泳可见4.7 kb、618 bp和243 bp附近的片段.DNA测序结果经与GenBank登录的序列做BLAST分析,显示重组质粒分别含有618 bp与243 bp的目的基因片段,无碱基错配和移码突变,读码框完全正确.结论 成功地构建了GFP-HPV18 E2删除突变体融合蛋白真核表达载体pEGFP-C1/TAD与pEGFP-C1/DBD. 相似文献
3.
目的观察单用日本血吸虫(SJ)童虫细胞(SC)和联用免疫调节剂诱生小鼠免疫保护性的效果。方法制备感染后第18dSC;实验昆明小鼠分为8组:A组(PBS)、B组(SC)、C组(IL-2)、D组(IL-2+SC)、E组(IFN-γ)、F组(IFN-γ+SC)、G组(香菇多糖)、H组(香菇多糖+SC)。腹股沟皮下间隔2w免疫1次,共3次。于末次免疫第4w攻击感染,第35d后剖杀小鼠计数虫荷及每克肝卵数(LEPG),计算减虫率和LEPG减少率。ELISA测定第2、3次免疫后及攻击前小鼠血清中特异性抗童虫可溶性抗原(SWSA)的抗体。结果保护性效果显示:与A组比较,B、C、D、E、F、G和H组的减虫率分别为43.3%、13.5%、36.1%、32.7%、46.2%、18.3%和33.7%,LEPG减少率分别为59.8%、26.6%、52.1%、47.7%、57.7%、34.0%和53.7%。各免疫调节剂与SC联合免疫组与单用SC组比较,特异性抗体水平差异无统计学意义。结论SC能诱生小鼠较明显的免疫保护性,单用IFN-γ也有一定的减虫和减卵效果,但免疫增强剂均未能显著提高SC诱生的免疫保护性效果和体液免疫应答水平。 相似文献
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目的构建人乳头瘤病毒115型(HPV16)E5蛋白真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16E5,分析E5在HeLa细胞及BALB/c小鼠肌肉组织中的表达。方法设计HPV16E5基因引物,PCR扩增E5基因。经Bam-HI、EcoR1酶切后将其连接入pcDNA3.1(+),PCR及双酶切筛选阳性克隆并测序。将构建的pcDNA3.1(+)/HPV16E5转染HeLa细胞,利用RT—PCR测定HPV16E5mRNA表达。将6只BALB/c小鼠分为3组,分别取100mgpcDNA3.1(+)/HPV16E5、100mgpcDNA3.1(+)、100mLPBS经肌肉注射小鼠,2周1次,共4次;末次接种后第14天取小鼠股四头肌制成石蜡切片,免疫组织化学法检测E5蛋白在小鼠肌肉组织中的表达。结果PCR扩增得到252bpHPV16E5基因片段,DNA测序结果显示E5基因片段正确地连入pcDNA3.1(+)。构建的pcDNA3.1(+)/HPV16E5在HeLa细胞表达大小为252bp的HPV16E5mRNA。小鼠股四头肌细胞膜被染成棕黄色。结论构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)/HPV16E5能在HeLa细胞及小鼠肌肉组织中表达HPV16E5蛋白。 相似文献
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目的表达梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0463(rTp0463)并鉴定其抗原性,为进一步探讨其在梅毒血清学诊断和免疫保护中的作用奠定基础。方法 PCR扩增Tp0463基因,构建原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0463,转化宿主菌诱导表达重组蛋白,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白,Westernblot鉴定表达产物的抗原性。结果成功构建了原核表达重组体pET-28a(+)/Tp0463,经诱导高效表达了一分子量大约为16KDa的重组蛋白,以包涵体表达形式为主,纯化蛋白的纯度>90%;Westernblot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者混合血清特异性识别。结论高效表达了rTp0463,该重组抗原有良好的抗原性。 相似文献
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一流的研究生教育是“双一流”建设的重要基础。从健全导师责权机制、深化课程体系改革、强化共享平台建设、完善培养质量评价机制等方面,探讨我校在“双一流”建设中研究生教育改革与创新的具体举措,展示了研究生培养模式改革的初步成效,为地方高校推进“双一流”建设提供有益借鉴。 相似文献
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半巢式聚合酶链反应扩增全血中梅毒螺旋体polA基因 总被引:3,自引:0,他引:3
目的探讨半巢式聚合酶链反应(PCR)扩增梅毒螺旋体(Tp)的DNA多聚酶Ⅰ基因(polA)以探讨检测全血标本中微量Tp的可行性。方法应用半巢式PCR和常规PCR分别扩增165例可疑梅毒及非梅毒患者全血中Tp的polA,与血清学方法比较,探讨半巢式PCR方法在扩增全血中Tp DNA的意义。结果待测的165例标本中,与血清学方法比较,半巢式PCR检测Tp的敏感性和特异性分别为62.7%和95.9%,两者符合率为82.4%;两种PCR方法检测结果差异有显著性(P〈0.01),半巢式PCR敏感性远高于常规PCR。结论半巢式polA PCR检测全血中Tp较常规PCR灵敏,是血清学方法诊断梅毒的有效补充,但其检测的灵敏度仍有待进一步提高。 相似文献
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目的 研究有氧运动对女大学生血清中C3与C4含量的影响。方法 从护理学院2003级学生中随机抽取30名女生分成3组,即对照组、实验1组与实验2组,后两组进行健身操有氧运动,每周分别为1次、3次,共12周。利用单向免疫扩散试验测定有氧运动前后血清中C3、C4含量。结果 实验2组C3与C4含量在运动开始后稍降低且到第6周逐渐上升,至第8周回复到运动前水平,第10周、12周含量增加,并维持在一定水平。结论 坚持运动量适中的有氧运动,能提高女大学生血清中C3与C4含量,增强机体合成补体的能力。 相似文献
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目的采用SD大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocystis Carinii pneumonia,PCP)动物模型。方法 20只SD大鼠随机分成实验组和对照组。实验组皮下注射地塞米松2.5 mg/只,每周2次,对照组不给药。8周后,分别取肺组织,印片,Giemsa染色检查卡氏肺孢子虫滋养体和包囊。酚氯仿法提取大鼠肺组织DNA,LAMP法扩增卡氏肺孢子虫DNA。结果诱导后24 d大鼠出现死亡,28 d检获PC,32 d感染阳性率为86%(13/15);LAMP扩增出卡氏肺孢子虫特异DNA。结论成功诱导SD大鼠的PCP模型。 相似文献