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1.
目的探讨体外骨髓间充质干细胞(MSCs)联合雷帕霉素对BALB/c鼠T、B淋巴细胞的免疫调节作用及可能机制。方法从5~6周龄BALB/c鼠骨髓中分离培养MSCs并鉴定其纯度。用EZ SepTM Mouse 1X分离异体BALB/c鼠脾脏淋巴细胞,分别在刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)刺激下,用MSCs和/或雷帕霉素处理,MTT法检测淋巴细胞的增殖,流式细胞术检测T、B淋巴细胞CD69、CD28和CD86的表达和T淋巴细胞凋亡情况,Real time PCR测定T淋巴细胞IL 10 mRNA、IFN γ mRNA的表达水平。结果MSCs明显抑制T、B淋巴细胞增殖,联合雷帕霉素组抑制作用更加显著(P<0.01)。MSCs可抑制T淋巴细胞的凋亡,联合雷帕霉素组较单独MSCs组抑制作用更加明显(P<0.01)。MSCs联合雷帕霉素具有协同促进IFN γ mRNA表达和协同抑制IL 10 mRNA表达的作用。单独MSCs或MSCs联合雷帕霉素对T、B淋巴细胞CD69、CD28和CD86的表达无显著影响。结论MSCs联合雷帕霉素对BALB/c鼠T、B淋巴细胞有免疫负调节作用,可能与协同抑制淋巴细胞增殖、T淋巴细胞凋亡和干预IFN γ mRNA、IL 10 mRNA表达有关。  相似文献
2.
目的:比较24周龄和32周龄NZBW F1鼠肾脏损害及脾淋巴细胞活化、凋亡的不同.方法:随机将NZBW FI鼠分为两组:24周龄组和32周龄组.用考马斯亮蓝法每周检测小鼠24 h尿蛋白量.分别在24周龄和32周龄时取小鼠肾脏组织切片PAS染色观察病理.取脾脏分离淋巴细胞,分别在刀豆球蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)刺激下,流式细胞仪检测T,B淋巴细胞的CD69,CD28和CD86的表达和T淋巴细胞的凋亡情况.结果:24周龄组NZBW FI鼠T细胞CD69,CD28表达及B细胞CD69表达均高于32周龄鼠,CD86无明显变化,T细胞凋亡率下降.32周龄组时24 h尿蛋白量明显增加,肾脏损害较24周龄组严重.结论:24周龄组与32周龄组NZBW Fl鼠相比,淋巴细胞活化增加,凋亡减少,而32周龄组肾脏损害严重,这与其自发病程有关.  相似文献
3.
目的:骨髓来源的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在骨髓微环境中参与骨髓瘤细胞的耐药性。本研究旨在通过体外实验,研究经细胞因子预处理的骨髓MSCs在与人骨髓瘤细胞株H929共培养条件下,是否影响多西环素(doxycycline,DOX)对骨髓瘤细胞株的细胞毒性作用,并初步探讨其可能的作用机制。方法:经白细胞介素(interleudin,IL)?1β或肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)?ɑ预处理的人骨髓MSCs,与H929细胞共培养,并以DOX处理细胞,分别采用CCK8法和流式细胞术(FCM),检测DOX对H929细胞增殖和凋亡的影响;采用FCM和实时荧光定量PCR(RT?qPCR)法检测IL?1β或TNF?α处理后,骨髓MSCs中血管细胞黏附分子(VCAM?1)表达;Western blot法检测在DOX存在时,不同处理的骨髓MSCs作为共培养饲养层细胞的条件下,H929细胞p?Erk1/2的变化。结果:DOX可抑制骨髓瘤细胞株H929的增殖并诱导其凋亡。人骨髓MSCs与H929共培养可以减少DOX对H929的细胞毒性作用,而经IL?1β或TNF?α预处理的人骨髓MSCs再与H929共培养,则可以进一步降低DOX的细胞毒性作用。人骨髓MSCs经IL?1β或TNF?α处理后,其VCAM?1 mRNA转录水平和蛋白表达水平均升高。经预处理的骨髓MSCs与H929共培养后,可以降低DOX对骨髓瘤细胞株p?Erk1/2的下调作用。结论:DOX在体外对骨髓瘤细胞株表现出剂量和时间依赖性的细胞毒性作用;而IL?1β和TNF?α可通过骨髓MSCs来间接拮抗DOX对H929的细胞毒性作用;IL?1β和TNF?α的这一作用机制可能与上调骨髓MSCs的VCAM?1表达与上调p?Erk1/2有关。  相似文献
4.
目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血BMP/Smads信号通路相关基因表达,了解其与OPG/RANKL相关性,探讨其在SLE骨代谢中的意义?方法:选取SLE患者26例及正常对照组20例,运用实时定量PCR方法检测两组外周血单个核细胞BMP/Smads信号通路相关基因BMP-2?Smad1?Smad5?Smad8及RANKL?OPG的表达,ELISA法定量检测血清中RANKL?OPG水平,计算OPG/RANKL比值;分析Smad1?Smad5?Smad8基因表达量与疾病活动相关指标及OPG/RANKL相关性?结果:SLE患者外周血单个核细胞OPG/RANKL系统中OPG基因mRNA表达水平较正常对照组减低 (0.002 5 ± 0.000 7 vs. 0.017 6 ± 0.006 7,P < 0.05),RANKL基因mRNA表达水平无统计学差异 (0.003 3 ± 0.001 0 vs. 0.002 4 ± 0.000 9,P > 0.05),SLE患者OPG/RANKL比值较正常对照组明显减低 (0.229 6 ± 0.071 2 vs. 0.609 5 ± 0.165 1,P < 0.01)?SLE患者Smad1?Smad8基因mRNA表达水平较正常对照组明显减低 (0.003 1 ± 0.000 4 vs. 0.006 6 ± 0.000 7;0.003 3 ± 0.000 5 vs. 0.005 6 ± 0.000 6,P < 0.01),Smad5基因mRNA表达较正常对照组减低(0.001 7 ± 0.000 3 vs. 0.004 2 ± 0.000 4,P < 0.05),SLE患者与正常对照组BMP-2基因mRNA表达水平无统计学差异(0.006 9 ± 0.002 0 vs. 0.010 5 ± 0.002 1,P > 0.05)?SLE患者组血清RANKL表达较正常对照组明显增高(P < 0.01),OPG表达在两者间无明显统计学意义(P > 0.05),SLE血清OPG/RANKL较正常对照组明显减低(P=0.006)?相关性分析显示,SLE患者Smad8 mRNA水平?OPG/RANKL均与血沉呈正相关 (P < 0.05)?OPG mRNA水平与Smad8 mRNA表达水平呈正相关P <0.01,而RANKL与Smad1 mRNA基因表达呈负相关(P < 0.01)?结论:SLE患者体内BMP/Smads系统基因表达存在异常,可能与SLE的骨代谢异常相关?  相似文献
5.
目的 评价锝(99Tc)亚甲基二磷酸盐(99Tc-MDP)治疗难治性强直性脊柱炎(AS)的临床疗效和安全性.方法 入选60例难治性AS患者根据随机数字表法分为治疗组和对照组.治疗组:原有的改善病情抗风湿药加99Tc-MDP.对照组:继续使用原有的改善病情抗风湿药.主要疗效指标:达到AS疗效评价(ASAS)20%改善程度(ASAS 20)的受试者比例.次要疗效指标:达到AS疗效缓解50% (ASAS 50)、ASAS标准中6项改善5项(ASAS5/6)、Bath AS疾病活动指数(BASDAI)改善50%(BASDAI 50)、ASAS部分缓解的受试者比例.结果 AS患者使用99Tc-MDP治疗第4周时,有30%患者达到治疗反应,16周时80%患者达到治疗反应.次要疗效标准(ASAS 5/6、BASDAI 50、ASAS 50、ASAS部分缓解)也有改善,第16周时有72.5%患者达到ASAS 5/6,55.0%患者达到BASDAI 50、42.5%患者达到ASAS50、35%患者达到ASAS部分缓解.不仅如此,在第8周时患者ESR、CRP均有所下降.而且99Tc-MDP的耐受性好,不良反应少.结论 99Tc-MDP可有效缓解难治性AS患者临床症状,降低炎症指标,为治疗难治性AS提供了一种新的选择.  相似文献
6.
目的 :多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)表现有骨破坏和骨髓微环境的异常。近来发现MM患者的骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)有多种异常。既往研究发现经肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α预处理的骨髓MSC成骨分化潜能增强。本实验进一步研究TNF-α预处理的骨髓与骨髓瘤细胞株H929共培养后,对H929的影响。方法 :骨髓MSC经TNF-α单次(T+1组)或多次预处理(T+7组)后,与H929直接共培养3 d后,收集H929细胞分别检测其集落形成能力,定量RT-PCR检测POU5F1、SOX2和NANOG基因,以及微小RAN(miRNA)-15a/16的表达水平,并与对照组比较。结果:各组H929细胞均有POU5F1、SOX2、NANOG和miRNA-15a/16的检出。与对照组和T+1组相比较,T+7组的POU5F1和SOX2基因的表达水平下降且有统计学意义(P<0.05);miRNA-15a/16表达水平均上升且有统计学意义(P<0.05);CFU数减少且有统计学意义(P<0.05)。结论:经TNF-α多次预处理的骨髓MSC与MM细胞相互作用后,抑制MM细胞作用更加明显,具体机制有待进一步研究。  相似文献
7.
目的 :探讨狼疮鼠(MRL/lpr)骨BMP/Smads信号通路表达情况。方法 :分离小鼠股骨制备组织切片,常规苏木素-伊红(HE)染色,观察骨质情况;免疫组化观察骨组织中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达;密度梯度离心法和贴壁筛选法分离培养骨髓间充质干细胞(bone marrow masenchymal stem cells,BMMSCs),细胞爬片后免疫荧光法观察BMP-2、p-Smad1/5/8蛋白表达情况;BMP-2诱导BMMSCs向成骨细胞分化,RT-PCR法检测BMMSCs ALP、Runx2基因m RNA水平,ALP染色鉴定早期成骨情况。结果:狼疮鼠骨皮质较正常鼠减少,皮质骨占骨体积比例较正常鼠减低(P<0.01);狼疮鼠股骨BMP-2表达与正常鼠无明显差别(P>0.05);细胞免疫荧光显示狼疮鼠BMMSCs BMP-2、p-Smad1/5/8表达减弱(P<0.05);狼疮鼠BMMSCs BMP-2刺激7 d后ALP活性较正常鼠减低,BMP-2刺激3 d后ALP m RNA水平较正常鼠减弱(P<0.01),Runx2 m RNA水平较正常鼠无明显差别(P>0.05)。结论 :狼疮鼠骨BMP/Smads信号通路处于抑制状态。  相似文献
8.
目的:CHOP方案是目前治疗弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)的标准方案?CD20单抗美罗华(rituximab,R)与CHOP方案联合后,R-CHOP方案的治疗效果进一步的提高?本研究着重分析治疗过程中药物的每疗程剂量?时间剂量强度等与治疗结果的关系?方法:回顾性研究经(R)-CHOP方案治疗的DLBCL初诊患者52例?分析国际预后指数(IPI)评分?CHOP方案中的强的松?环磷酰胺和阿霉素的平均每疗程剂量强度(DIPC)和平均每周剂量强度(DIPW)与疗效的关系?结果:病例的中位随诊时间为34个月(6~95个月),在经Pearson Chi-Square统计后发现,患者起病时的强的松DIPW<166.7 mg/m2?IPI评分?Ann Arbor分期(A或B)可以影响患者的完全缓解(CR)率(均P < 0.05)?在将上述与CR有关的因素进行Logistic回归分析后,发现强的松DIPW<166.7 mg/m2和IPI积分为与CR相关的独立预后因素(均P < 0.05)?对患者总生存(OS)资料进行Kaplan-Meier分析发现,经Log-rank检验后,IPI积分?阿霉素<16.7 mg/(m2?周)?环磷酰胺<250 mg/(m2?周)与DLBCL患者的OS有关?在将上述与OS有关的因素进行Cox regression分析后,发现阿霉素<16.7 mg/(m2?周)?IPI积分为与OS相关的独立预后因素(P均 < 0.05)?结论:对于用(R)-CHOP方案的初诊DLBCL患者,不但起病时的IPI积分?Ann Arbor分期(A或B)等与治疗结果相关,而且治疗因素如环磷酰胺和阿霉素的平均每周剂量强度也影响预后?在治疗过程中,应尽可能地按预定治疗方案给药?  相似文献
9.
目的:观察肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α预处理骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs)后,对其核因子(nuclear factor,NF)-κB通路以及成骨分化能力的影响?方法:实验分为BMMSCs阴性对照组(A组)?TNF-α预刺激1 d组(B组)及TNF-α预刺激7 d组(C组)?预刺激结束后,采用Western blot方法检测各组IκBα和p-IκBα蛋白水平的表达;采用RT-PCR方法检测各组BMMSCs中分泌红细胞生成素和肝细胞受体B4(erythroprotein-producing hepatocellular receptor B4,EPHB4)?胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)?骨保持素(osteoprotegerin,OPG)?白细胞介素(interleukin,IL)-7及基质金属蛋白酶(metrix metalloproteinase,MMP)-1 mRNA表达水平的变化;加成骨诱导剂诱导后,茜素红及碱性磷酸酶检测各组成骨分化能力?同时观察加用NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对TNF-α作用的影响?结果:与A组相比,B组和C组IκBα蛋白的表达水平降低(P < 0.05),p-IκBα蛋白的表达水平增高(P < 0.05);与A组相比,B组和C组的EPHB4?IGF-1?OPG mRNA表达水平上调(P < 0.05),IL-7及MMP-1 mRNA表达水平下调(P < 0.05);与A组相比,B组和C组的成骨分化能力增强,而加用NF-κB抑制剂后,B组和C组的成骨分化能力减弱?结论:体外实验表明,BMMSCs经TNF-α预处理后,可以促使BMMSCs成骨分化活性,并且多次刺激较单次刺激效果明显,其促进成骨分化效果至少部分是通过NF-κB通路介导的?  相似文献
10.
目的 :探讨脐带间充质干细胞(UC-MSC)治疗结缔组织病的安全性。方法 :80例次接受UC-MSC静脉输注治疗的结缔组织病患者作为研究对象,按不同病种、一次及多次治疗、血沉、补体进行分组,统计分析各种不良反应的发生率,并对不良反应的危险因素进行Logistic多因素回归分析,判断具有独立作用的危险因素。结果:发生不良反应36例次,发生率为45.0%(36/80);其中发热最多,占总体不良反应的58.3%(21/36),其余分别为头痛、头昏、乏力、恶心、胸闷、潮红、口干和肌肉酸痛。系统性红斑狼疮(SLE)患者中发热占42.9%,非SLE组患者中发热占17.3%,SLE组发热概率明显高于非SLE组(χ2=6.137,P=0.013)。一次治疗组有反应的例次22例(61.1%),多次治疗组有反应的例次15例(34.1%),一次治疗组不良反应发生率高于多次治疗组,两组之间比较差异具有统计学意义(χ2=5.815,P=0.016);不同年龄、性别、血沉下降和血沉正常、低补体和正常补体组别之间不良反应无明显差别。Logistic多因素回归分析显示一次输注(β=1.944,OR=6.985)、SLE是不良反应的独立危险因素(β=1.352,OR=3.863)。结论 :UC-MSC静脉输注治疗结缔组织病的的不良反应主要为发热,SLE和一次输注是不良反应的高危因素。  相似文献
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