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1.
目的:探讨人胰腺星状细胞的两种新分离方法?方法:通过酶消化-密度梯度离心法进行静止态的人正常胰腺星状细胞的分离,分离获得的细胞在含10%FBS的DMEM/F12继续培养?通过组织块外植法获得激活态的人肿瘤相关胰腺星状细胞(CaPSCs),分离获得的细胞在含20%FBS的DMEM/F12继续培养?结果:通过方法改良,1 g人正常胰腺组织能够获得(0.5~5.0)×106个星状细胞,细胞活率约为90%?使用新的组织块外植法后,组织块不易掉落,细胞爬出时间显著缩短,约5~10 d即可获得CaPSCs?所有细胞贴壁良好,细胞倍增时间约为24 h?正常胰腺星状细胞(normal pancreatic stellate cells,NPSCs)培养早期形态符合典型静止态星状细胞特征,细胞为多边形或圆形,内含丰富脂滴,在荧光显微镜下可观察到320 nm激发波长下的蓝绿色自发荧光?NPSCs培养晚期和CaPSCs呈多触角状,胞内无脂滴,细胞增殖速度明显快于静止态细胞?激活态的细胞均表达α-SMA?Desmin?vimentin?GFAP等胰腺星状细胞特征性标记?结论:新的原代培养方法能够满足静止态和激活态两种状态胰腺星状细胞的分离培养,同时能够增加细胞得率?缩短分离培养时间,所获得细胞的活性和纯度符合进一步实验的要求,为胰腺星状细胞的相关研究提供了便利?  相似文献
2.
目的:研究核型VASH2在人胚胎组织增殖中的功能?方法:免疫荧光分析VASH2蛋白在人胚肾细胞293T的表达水平和细胞中的表达部位?利用免疫组化法分析VASH2在多种胚胎组织中的的表达水平?MTT法检测核型VASH2对293T细胞活性的影响,流式细胞仪检测细胞周期?结果:通过免疫荧光试验发现VASH2蛋白分胞浆型及胞核型2型?胞核型VASH2除了在已经发育完善的心脏组织中阴性表达或弱表达,在其他胚胎组织中显著高表达?核型VASH2的表达与胚胎细胞核分裂指数明显正相关 (r = 0.826,P < 0.01)?转染核型VASH2可促进293T细胞的生长;转染核型VASH2细胞的G2+S期较空白组及干扰组增加,差异有显著性 (P < 0.05)?结论:VASH2分为胞浆型及核型,核型VASH2具有促进胚胎细胞增殖的作用?  相似文献
3.
目的:利用Cas9/RNA system gene targeting技术高效构建Vash2基因敲除小鼠模型?方法:根据Vash2基因序列,设计2对Vsah2基因的单链向导RNA(single-guide RNA,sgRNA)引物序列并克隆进入pU57-T7-GDNA载体?利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA?将体外转录的gRNA/Cas9 mRNA显微注射入小鼠受精卵,通过PCR和基因测序对Vash2移码突变进行检测和鉴定?繁育Vash2基因敲除小鼠并分析后代突变情况?结果:顺利构建表达sgRNA载体并体外转录,成功将有活性的sgRNA和Cas9 mRNA直接注射入受精卵?基因测序鉴定获得5只F0代初建鼠?选取5号鼠与野生型鼠回交,得到F1代鼠,再相互交配得到F2代鼠?PCR显示F2代鼠Vash2基因移码突变,成功建立Vash2基因敲除小鼠模型并传代繁育? 结论:通过Cas9/RNA systemgene targeting技术可以成功制备Vash2基因敲除鼠模型,是用于Vash2研究的有效工具?  相似文献
4.
目的:分析6例多发性内分泌肿瘤1型(MEN1)患者及其家系成员的临床特点,研究MEN1基因突变特征?方法:收集患者及家系成员的临床资料,提取6例患者及其各自家系成员(共13例)外周血DNA,对MEN1基因编码区9个外显子进行PCR扩增,产物直接测序?结果:家系1中2例患者和2例家系成员MEN1基因第10外显子存在杂合突变c.1378C>T,家系2中1例患者MEN1基因第2外显子存在杂合突变c.80C>G,家系3中先证者及其母亲MEN1基因第9外显子存在杂合突变c.1225T>C,其余人员均未发现突变?其中MEN1基因突变c.80C>G和c.1225T>C为新发现的突变类型,c.1378C>T为已知突变类型?结论:MEN1基因突变分析有助于MEN 1患者早期诊断及其亲属的筛查?本研究发现2种新的MEN1突变类型能增加研究者对于MEN1遗传学特征的认识?  相似文献
5.
目的:探讨缺氧状态下胰腺星状细胞的单核细胞趋化因子7(C-C motif chemokine ligand 7,CCL7)表达情况及其对胰腺癌侵袭的影响。方法:通过组织块外植法获得人肿瘤相关胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs),于常氧(20% O2)、缺氧(1% O2)下培养,并通过人趋化因子抗体芯片技术分析其上清液中多种趋化因子的表达差异;通过加入不同浓度外源性人重组蛋白CCL7(0、1、10/100 ng/mL)研究趋化因子CCL7与胰腺癌细胞侵袭之间的浓度依赖关系;使用慢病毒转染、Transwell等技术着重分析缺氧PSCs过表达的CCL7促胰腺癌侵袭的作用。结果:相较于常氧培养PSCs,缺氧培养PSCs的条件培养基可显著增强胰腺癌侵袭能力(P<0.05);缺氧培养下PSCs上清液中CCL7相较于常氧培养显著高表达(fold change=2.38);外源性重组CCL7蛋白(0、1、10/100 ng/mL)可显著增加胰腺癌细胞(Miapaca-2、Colo357)侵袭能力,且呈浓度依赖关系。流式细胞术检测CCL7受体(CCR1、CCR2、CCR3、CCR5)表达,显示胰腺癌细胞(Miapaca-2、Colo357)仅有CCR5高表达。Western blot印迹显示,缺氧诱导PSCs高表达CCL7并促胰腺癌侵袭的过程中存在EMT改变,即E-cadherin表达下降,Vimentin、N-cadherin表达上升。结论:缺氧可诱导PSCs高表达CCL7,并通过CCL7/CCR5轴促进胰腺癌细胞迁移和侵袭,其机制可能与诱导胰腺癌上皮间质化有关。  相似文献
6.
目的:检测PARP14在胰腺癌中的表达及意义,并探讨其对胰腺癌细胞生物学功能的影响。方法:利用人类肿瘤相关的基因表达汇编(gene expression omnibus, GEO)和癌症基因组图谱(the cancer genome atlas, TCGA)中的胰腺癌基因表达谱数据,分析PARP14在胰腺癌及癌旁中的表达差异,并进一步通过TCGA数据库分析PARP14表达量与总体生存期和无病生存期的关系(Kaplan-Meier法和Log-rank检验)。在人胰腺癌细胞株BXPC-3和CFPAC-1中干扰PARP14后,分别通过CCK8增殖实验和集落形成实验检测其对胰腺癌细胞增殖能力的影响。结果:GEO数据显示PARP14在胰腺癌组织中的表达显著高于其在癌旁组织中的表达,差异具有统计学意义(P<0.001)。TCGA数据表明胰腺癌中高表达PARP14组患者的总体生存期显著低于低表达组的患者(P<0.05)。体外实验表明,干扰PARP14后,胰腺癌细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。结论:PARP14在胰腺癌中高表达并与预后负相关,且其高表达与胰腺癌细胞增殖能力相关,PARP14可能成为胰腺癌预后预测及治疗的靶点。  相似文献
7.
目的:研究胰岛素对人胰腺癌细胞侵袭与迁移的作用及其可能机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测胰腺癌细胞株胰岛素受体(insulin receptor,IR)的表达。CCK8检测不同浓度胰岛素刺激下胰腺癌细胞的活性并确定其最适浓度;适宜浓度胰岛素刺激下,CCK8检测胰腺癌细胞增殖能力的改变;通过Transwell实验,检测胰岛素刺激条件下胰腺癌细胞侵袭与迁移能力的变化;Western blot检验胰岛素刺激后胰腺癌细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloprotease,MMP)-2、7、9的表达变化。结果:胰腺癌细胞株PANC-1和Miapaca-2的IR表达相对高(P<0.05);胰岛素浓度为100 nmol/L时,对上述两细胞活性影响最大(P<0.05);胰岛素能明显促进PANC-1和Miapaca-2的增殖、迁移与侵袭(P<0.05);胰岛素刺激后胰腺癌细胞迁移与侵袭的改变可能与其MMP-2、7、9的表达增加相关(P<0.05)。结论:胰岛素可能通过增强MMP-2、7、9表达促进胰腺癌细胞株PANC-1和Miapaca-2的迁移及侵袭。  相似文献
8.
9.
目的:探讨术中先行肠腔分流(mesocaval shunt,MCS)辅助的联合血管切除的胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy with venous reconstruction,PDVR)(MCS-PDVR)的优势及可行性?方法:对本中心2014年5月—2016年5月期间实施MCS-PDVR的7例胰腺癌患者的临床资料作回顾性分析?结果:本组患者均成功实施MCS-PDVR,血管切除长度为4.0~7.0 cm,门静脉阻断时间为60~80 min,均无小肠淤血坏死,术后患者肝功能基本恢复正常,无肝性脑病发生,仅1例出现A级胰瘘,均无严重胰瘘?腹腔出血及血栓形成等严重并发症;2例术后7个月因肿瘤复发死亡,5例随访中,随访时间6~14个月,无复发迹象?结论:MCS-PDVR作为严重侵犯肠系膜上静脉和(或)门静脉的晚期胰腺癌的一种手术方式不仅安全可行,而且可以提高手术切除率,达到 R0切除,延长患者的生存时间?  相似文献
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