活体肝移植相关技术的改进和探讨

目的　探讨活体肝移植手术 (LDLT)若干技术的改进方法。方法　回顾分析 16例活体肝移植 ,对活体肝移植关键手术的相关技术进行总结。主要技术包括 :在以包含肝中静脉为特点的扩大左半肝切取技术的基础上 ,同时采用肝静脉、腔静脉联合扩大成型吻合技术重建流出道 ;综合显微外科、自体血管移植、血管搭桥及动脉成形等相关技术行肝动脉重建 ;端 端吻合重建胆道。结果　受体的平均手术时间为 (13 2 6± 3 48)h ,平均术中出血为 (3 2 10± 2 967)ml,平均冷缺血时间为 (2 1± 2 0 )h ,平均移植物重量 /受体体重 (GRWR)为 (1 3 9± 0 49) %。供体的平均手术时间为 (5 9± 1 6)h ,平均失血量为 (12 10± 710 )ml,平均移植物重量 (4 2 9± 168)g。术后随访 1～ 2 2个月 ,未见流出道、肝静脉梗阻的相关并发症 ;肝动脉栓塞发生率为 12 5 % ;未见胆道相关并发症。结论　LDLT中GRBW应不低于 0 85 %。联合扩大成型吻合技术重建流出道和综合显微外科、自体血管移植、血管搭桥及动脉成形等相关技术行肝动脉重建是对活体肝移植技术的重要改进     

c-myc在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义

目的检测肝细胞肝癌中c-myc蛋白表达情况,研究其与肝癌临床特征的关系,探讨c-myc在肝细胞癌(HCC)发生、发展及转移中的作用。方法采用免疫组织化学技术检测59例肝癌组织及癌旁非癌组织中c-myc蛋白的表达。结果59例肝癌组织中35例c-myc呈阳性表达,阳性率为59.3%。肿瘤组织表达阳性率高于癌旁非癌组织(P<0.05)。c-myc的表达与肝癌的发病年龄,性别,肿瘤大小,分化程度无关(P均>0.05),而与肝癌的转移有关(P<0.05)。应用Kaplan-Meier法制作累积生存曲线并经Log-Rank检验结果显示,c-myc表达阳性与阴性组患者术后累积生存率有显著性差异(P=0.0039)。结论c-myc在肝细胞肝癌中的表达能促进肝癌的发生发展,HCC患者c-myc表达阳性者预后不良,应密切随访。     

抗病毒治疗在伴高滴度HBV-DNA原发性肝癌术后复发中的作用

目的:评价拉米夫定抗病毒治疗伴高滴度HBV-DNA肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)术后的临床疗效?方法:93例伴高滴度HBV-DNA HCC术后患者随机分治疗组与对照组?43例对照组采用单纯手术切除,50例治疗组采用口服拉米夫定(LAM) 100 mg/d?采用SPSS13.0软件进行统计分析,Kaplan-Meier法计算无瘤生存率,Log-rank法进行组间差异分析?结果:所有病例均获随访,期间肿瘤复发73例(78.49%),死亡65例(69.89%)?单纯手术切除组和手术切除联合抗病毒治疗组1?3?5年的无瘤存活率分别为:76.74%?44.19%?13.95%和88.25%?69.78%?28.73%,两组之间差异有统计学意义(P = 0.014 3)?结论:肝癌根治术后抗病毒治疗能降低肿瘤复发率, 对术前 HBV-DNA高水平复制肝癌患者,宜尽早联合抗病毒治疗?     

肝脏移植术后肺部感染危险因素分析及护理

目的:通过对肝移植术后发生肺部感染的危险因素进行分析,探讨有针对性的管理方式。方法:使用自行设计的调查表,对73例肝移植中有肺部感染的患者进行回顾性因素分析。结果:术前或术后大量胸腹水、肾功能异常、术后呼吸机使用时间≥2 d、术中或术后大出血、术后肺水肿、营养方式、手术前后不具备积极的应对机制等均与术后肺部感染相关。结论:明确相关危险因素,在手术前后有目的的预防或及时加强管理,能使肝移植术后肺部感染率大大降低,提高手术成功率。     

输注转染人IL-10基因的骨髓间充质干细胞延长异种肝移植大鼠存活时间

目的 探讨人白细胞介素10(hlL-10)修饰的豚鼠骨髓间充质干细胞(hIL-10-MSCs)输注对异种肝移植大鼠存活的影响及其可能机制.方法 以携带hIL-10基因的慢病毒(hIL-10/LOX-ewGFP)为载体构建hIL-10-MSCs.以豚鼠为供者,Wistar大鼠为受者,制作非协调性异种原位肝移植模型,将受者随机分成3组,每组60只:空白对照组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射生理盐水和地塞米松1次;MSCs组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射MSCs和地塞米松1次;hIL-10-MSCs组大鼠术前3天和术后1天各静脉注射hIL-10-MSCs和地塞米松1次.记录供者手术时间、供肝冷缺血时间、受者手术时间、肝上下腔静脉(SVC)吻合时间、无肝期及受者存活时间,测定术后各组受者血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,酶联免疫吸附试验法测定各组受者移植肝组织中自细胞介素2(IL-2)、IL-4、hIL-10、IL-12、IL-15、IL-18和TGF-β1的含量,逆转录聚合酶链反应法检测各组受者移植肝组织中上述各细胞因子mRNA的表达.结果 hIL-10-MSCs组受者存活时间为(72.0±5.5)h,空白对照组和MSCs组受者的存活时间分别为(29.0±2.2)h和(48.0±4.6)h,前者明显长于后二者,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.05).hIL-10-MSCs组移植肝组织中IL-4和TGF-β1mRNA的表达明显高于空白对照组和MSCs组(P<0.05,P<0.05),而IL-2、IL-12、IL-15、IL-18 mRNA的表达明显低于空白对照组和MSCs组(P<0.05,P<0.05),hIL-10-MSCs组肝组织中hIL-10 mRNA的表达明显高于空白对照组和MSCs组.结论 静脉输注hIL-10-MSCs可延长异种肝移植大鼠的存活时间,其机制可能与hIL-10-MSCs抑制IL-2、IL-12、IL-15、IL-18等细胞因子的表达,促进IL-4和TGF-β1的表达有关.     

hIL-10基因修饰的骨髓间充质干细胞的体外免疫抑制作用

目的研究hlL．10基因修饰的骨髓间充质干细胞（mesenchymalstarecell,MSC）对异种混合T淋巴细胞增殖的影响。方法反转录PCR克隆hlL-10基因并构建慢病毒hlL-10／pLOX—CWgfp,然后将hIL．IO／pLOX—CWgfp转入豚鼠MSC内;ELISA法测定hIL-10基因修饰的MSC（hlL-10-MSC）培养上清液内hIL-10含量;CCK-8法检测hIL-10-MSC和其培养上清液对体外混合淋巴细胞培养的影响。结果hIL-10．MSC培养上清液的hIL-10水平明显高于未转染hIL-10者（P〈0．05）;hIL-10-MSC能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应（P〈0．05）;加入IL-2能逆转MSC的抑制作用（P〈0．05）;hIL-10-MSC培养上清液能抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应（P〈0．05）。结论hIL-10-MSC和其培养上清液对混合异种淋巴细胞培养有显著的抑制作用。     

尾静脉液压法注射转hIL-10在大鼠肝组织中的表达

目的：采用尾静脉液压法注射SB转座元(sleeping beauty transposon)系统转人类白细胞介素10(human interleukin-10,hIL-10)在大鼠肝组织中的表达．方法：采用Ringers溶液20mL经尾静脉10-12 s内快速注射．实验分组：Rinzers 20mL对照组、DOTAP 100μg空白组、DOTAP 100μg pT-hIL-10 50μg转基因组、pT-hIL-10 50μg pCMV-SB 5μg共注射组(每组n=6)．尾静脉注射后采血检测肝功能和转基因组血清中hIL-10的表达．RT-PCR法检测转基因组术后7,14d肝组织中hIL-10 mRNA的表达．结果：尾静脉注射后1,4,7d Ringers 20mL组、DOTAP组、DOTAP pT-hIL-10组、pT- hIL-10 pCMv-SB共注射组ALT水平分别为：4339±602,13516±535,6576±347,4451±465；984±125,4087±600,2117±243,1158±130；592±85,2339±300,1384±165,40±663nkat/L．DOTAP pT-hIL-10组、pT- hIL-10 pCMV-SB共注射组术后1,4,7,14d血清hIL-10浓度分别为：818．3±24．9,640．7±20．6,441．3±25．4,322．3±15．4和1008．3±65．8,820．8±20．9,675．8±31．6,438．2±26．0μg/L,两组相比有显著差异(P＜0．01)．转座元转基因组2wk后仍有hIL-10 mRNA表达,高于DOTAP转基因组．结论：尾静脉液压法注射转hIL-10可在大鼠肝组织中较长时间表达,联合SB转座元系统转hIL-10可提高转基因的效率．     

肝癌中Ang-2的表达及其临床意义

目的探讨血管生成素2(Ang-2)与肿瘤的血管发生、入侵/转移能力和肝癌(HCC)预后之间的关系。方法采用免疫组织化学的方法检测Ang-2在肝癌、癌旁和正常肝组织中的表达。结果106例患者中,肝癌组织Ang2表达阳性的例数为63例(59.4%),Ang-2表达阳性的患者和表达阴性患者相比,很多方面有统计学差异(P<0.01),包括更低的组织学分期、门静脉侵犯(69.1%)等。Ang-2阳性表达的患者预后较差。结论肝癌Ang-2的表达和HCC的血管新生、入侵、恶性程度及疾病预后有关。     

骨髓间充质干细胞对异种T淋巴细胞增殖的影响及其机制

目的 研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对异种混合T淋巴细胞增殖的影响及其机制.方法 采用密度梯度离心法分离豚鼠MSCs;免疫组织化学法检测MSCs膜表面CD45和CD44的表达;流式细胞术检测MSCs周期;CCK-8法检测和绘制MSCs的生长曲线;观察MSCs和其培养上清对体外异种淋巴细胞混合培养的影响.结果 MSCs膜表面CD45表达阴性、CD44表达阳性;分析MSCs周期显示,MSCs中20%左右处于S期、G2期和M期,其余80%左右均处于G0期和G1期.MSCs和其培养上清均能明显抑制异种T淋巴细胞混合培养的增殖反应(P<0.05),加入白细胞介素2(IL-2)能逆转MSCs的抑制作用(P<0.05).结论 MSCS的鉴定可根据细胞形态.膜表面标志物来确定.MSCS及其培养上清对异种淋巴细胞混合培养的增殖反应有显著的抑制作用.     

肝素结合的类表皮生长因子促进大鼠减体积肝移植术后移植肝细胞的再生

目的 探讨肝素结合的类表皮生长因子（heparin binding epidermal growth factor—like growth factor，HB-EGF）对大鼠减体积肝移植术后肝细胞再生的促进作用。方法 采用改良“二袖套法”建立大鼠原位减体积肝移植模型，分为实验组和对照组，术后即刻经尾静脉分别给予HB-EGF（500μg／kg）和相同体积的生理盐水，2次／d。2组分别在术后第6h、2d、4d及7d随机挑取5只大鼠处死，称取移植物湿重，采血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）及白蛋白（Alb），流式细胞仪检测移植肝细胞的增殖活性，免疫组织化学法检测移植肝Ki-67的表达情况。结果术后第6h、2d和4d，实验组移植物湿重较对照组相应时相明显增加（P〈0．05）；术后第6h、2d、4d和7d，实验组血清ALT水平较对照组相应时相明显降低（P〈0．05），而第4和7d时Alb水平较对照组相应时相明显增高（P〈0．05）；术后第2和4d时，实验组的移植肝细胞增殖指数和Ki-67表达较对照组高（2d：P〈0．01；4d：P〈0．05）。结论 大鼠原位减体积肝移植术后使用HB-EGF能够明显促进移植肝细胞的再生。