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1.
乌鳢血清免疫球蛋白IgM的分离纯化及其兔抗血清的制备   总被引:8,自引:5,他引:3  
目的分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清。方法用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价。结果纯化了乌鳢血清免疫球蛋白,SDS-PAGE测定其重链和轻链的相对分子质量分别为78×103和27×103左右,免疫双扩散法测定兔抗乌鳢免疫球蛋白抗血清效价为1∶32。结论成功纯化了乌鳢免疫球蛋白,制备了兔抗乌鳢IgM抗血清,为研究乌鳢的免疫机制、建立乌鳢的血清学检测系统奠定了基础。  相似文献
2.
虎血清免疫球蛋白(IgG)的纯化及纯度、活性鉴定   总被引:7,自引:5,他引:2  
目的建立高纯度、高活性的虎血清IgG纯化方法。方法用饱和硫酸铵沉淀虎血清得到IgG粗品;结合Hitrap Protein A亲和层析预装柱及阴离子交换层析法对粗品IgG进一步分离纯化,采用PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法鉴定IgG纯度和免疫活性。结果80 mL虎血清亲和纯化得到84 mg IgG,阴离子交换层析纯化得到30 mg虎的IgG纯品。结论建立了简便快速、纯度高、活性好的虎血清IgG的分离纯化方法,为虎血清IgG二级抗体的制备提供了高纯度、活性好的一级抗体免疫原。  相似文献
3.
光化学法制作食蟹猴局部脑缺血模型   总被引:5,自引:2,他引:3  
目的使用光化学法构建食蟹猴局部脑缺血模型,为干细胞移植治疗提供必要的条件。方法选择8只健康成年食蟹猴,静脉注射35mg/kg体重的玫瑰红B5min后用冷光源照射大脑皮层中央前回10rain。第一次注射后10rain钟注射第二次玫瑰红B,浓度与第一次相同。照射完毕后,向颞侧移动光源发光口,在第二点照射10min。利用影像学、神经功能缺损评分和组织病理学对模型进行评价。结果动物清醒后表现出不同程度的脑缺血症状与体征。病理学检查可见明显的坏死灶。坏死灶周围脑组织水肿,神经细胞变性坏死。结论成功的将光化学法首次应用于灵长类动物,为进行与临床有重要意义的神经细胞保护研究提供了重要的工具。  相似文献
4.
cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型的建立   总被引:5,自引:5,他引:0  
目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个系的cTnTR141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnTR141W基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。病理分析显示cTnTR141W转基因小鼠心房心室明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室腔明显扩大,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数、短轴缩短率、室壁运动度明显降低。结论cTnTR141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。  相似文献
5.
长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备   总被引:5,自引:4,他引:1  
目的纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。  相似文献
6.
目的研究APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠模型老年斑形成和行为改变的动态过程。方法将转APPswe突变基因小鼠与转PSAE9基因突变小鼠杂交,PCR鉴定APPswe/PSAE9双突变转基因小鼠的基因表型,筛选阳性小鼠建立APPswe/PS/kE9双转基因C57BL/6J小鼠模型。抗邮免疫组化、改良Bieschowsky银染法、Thioflavin-S荧光分别动态检测3、4、5、6、9、12月龄APPswe/PSAE9双转基因小鼠大脑病理改变。荷兰Noldus公司EthovisionXT监测分析软件动态观察3、6、9月龄的APPswe/PSAE9双转基因小鼠Morris水迷宫行为学改变。利用SPSS16.0软件统计分析。结果建立了人APPswe/PSAE9双转基因阿尔茨海默病小鼠模型。3月龄APP/PS1双转基因小鼠大脑组织抗Aβ1—17免疫组织化学、改良Bieschowsky银染法、Thioflavin—S荧光未检测到有明显老年斑形成。4.5月龄APPswe/PSAE9双转基因小鼠大脑组织上述三种方法均可检测到老年斑。9、12月龄双转基因小鼠老年斑数量体积明显增加,出现与阿尔茨海默病患者较相似的老年斑改变。Morris水迷宫试验发现3、6、9月龄APPswe/PSAE9双转基因小鼠行为学结果与同月龄野生型小鼠有差异,说明与同月龄野生型小鼠相比出现记忆学习能力缺陷(P〈0.05)。结论成功建立了人APPswe/PSAE9双转基因小鼠阿尔茨海默病模型,为阿尔茨海默病发病机制研究和药物研发提供了有价值的动物模型。  相似文献
7.
动物与新发传染病   总被引:3,自引:0,他引:3  
从最近几年发生的SARS、高致病性禽流感等新发传染病的流行病学调查结果来看,野生动物与新发传染病密切相关。许多因素可以导致人兽共患病或新发人兽共患病的发生,如环境改变、人类和动物的密切接触、病原因子的变异、农业行为方式改变等,社会和文化因素同样起到一定作用.人类与其他动物的和平共处,维护生态平衡,是控制新发传染病的重要方面.  相似文献
8.
小檗碱对2型糖尿病ICR小鼠模型的治疗作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
张玲玲  黄澜  徐艳峰  李加美  肖冲  刘颖  秦川 《中国比较医学杂志》2010,20(1):23-27,I0006,I0007
目的比较小檗碱及小檗碱与添加剂对2型糖尿病ICR小鼠模型的降糖、降脂效果。方法100只三周龄雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、小檗碱组、小檗碱加低剂量添加剂组、小檗碱加高剂量添加剂组及二甲双胍组,以高糖高脂加尿链佐菌素诱导小鼠2型糖尿病模型,并分别以小檗碱、小檗碱加低剂量添加剂、小檗碱加高剂量每天灌胃干预治疗6周。检测血糖、血清血脂、肾功指标的变化情况;给药前后做糖耐量胰岛素耐量实验。每周量小鼠体重,动态观察小鼠体重变化。代谢笼中测量小鼠饮食水量变化。结果模型组血糖较普食组显著上升(P〈0.01),且维持较好;血脂指标CHO、HDL-c、LDL-c均较普食组升高(P〈0.05);其他各检测生化指标差异不显著。小檗碱组空腹血糖较模型组总体下降趋势明显且维持较好(P〈0.01);血脂较模型组有降低;糖耐量胰岛素耐量较模型组有改善。二甲双胍组血糖较模型组有下降趋势,血脂较模型组无显著差别。小檗碱加低剂量添加剂组较模型组血糖血脂无显著差别。小檗碱加高剂量添加剂组血糖较模型有下降趋势,血脂较模型组有下降趋势,其他各项生化指标均无差别。结论小檗碱降糖效果优于二甲双胍,小檗碱加低剂量添加剂,小檗碱加高添加剂。  相似文献
9.
目的建立SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量RT-PCR方法,测定实验动物等来源的EV71病毒RNA。方法运用EV71VP1保守区引物,优化real time RT-PCR条件,运用NASBA方法扩增EV71病毒RNA,计算拷贝数,经10倍系列稀释做出标准曲线,作为EV71病毒RNA定量检测的外标准品。结果应用Qiagen公司QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit,该标准品可精确定量到100copies/μL,PCR扩增效率达到99.5%。结论 SYBRGreenⅠ荧光染料实时定量PCR法测定EV71病毒RNA拷贝数的方法敏感性高、稳定性好,可用于EV71病毒RNA载量的定量测定。  相似文献
10.
人源化小鼠人源细胞检测方法   总被引:2,自引:2,他引:0  
目的人源化小鼠在人类疾病与再生医学研究中具有广泛应用,为获得一种理想的人源化小鼠检测方法,研究人特异性线粒体序列扩增作为人源化动物模型中人类DNA检测方法的可行性。方法设计人线粒体DNA特异性引物,并用该引物对人脐血造血干细胞嵌合体小鼠进行了检测。结果在人源化动物模型的人类DNA检测中,这种人线粒体DNA的PCR检测方法能够达到理想的特异性与灵敏性,是一种理想的嵌合体小鼠检测方法。结论获得了一种理想的人源化小鼠人源细胞检测方法。  相似文献
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