下一代诊断病理学

随着人类基因组测序、生物大数据信息分析、分子病理检测和人工智能辅助病理诊断等技术进步及其应用, 临床医学发展迈向精准诊疗时代。这一时代背景下, 传统诊断病理学迎来前所未有的历史机遇, 正在向"下一代诊断病理学(next-generation diagnostic pathology)"迈进。下一代诊断病理学以病理形态和临床信息为诊断基础, 以分子检测与生物信息分析、智慧制样与流程质控、智能诊断与远程会诊、病灶活体可视化与"无创"病理诊断等创新前沿交叉技术为主要特征, 以多组学和跨尺度整合诊断为病理报告内容, 实现对疾病的"最后诊断", 并预测疾病演进和结局、建议治疗方案和评估治疗反应, 形成新的疾病诊断"金标准"。未来, 需要激发病理学科创新活力, 加快下一代诊断病理学成熟和应用, 重塑病理学科理论和技术体系, 发挥诊断病理学在疾病"防、诊、治、养"等过程中的重要作用, 促进临床医学进一步发展, 服务健康中国战略。     

外周血单个核细胞内人类免疫缺陷病毒DNA和RNA定量对病毒转录活性的区分

目的基于人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中HIV-1总DNA和RNA定量检测结果对感染细胞内病毒的转录活性进行区分。方法采集2017年10月至2018年12月于哈尔滨医科大学附属第四医院感染科就诊的HIV-1感染者血液样本,分离PBMCs细胞,采用PCR荧光探针法对PBMCs细胞内HIV-1总DNA和RNA进行定量检测,并计算两者比值(Ratio)。根据Ratio值筛选出HIV-1转录活跃组样本和相对非活跃组样本,另外选择健康人PBMCs样本作为对照组。对3组样本进行基因转录组表达谱检测以及人口特征差异性检验,并对基因表达谱检测结果进行主成分分析以验证对3组样本病毒转录活性区分的准确性。结果从60例感染HIV-1患者的PBMCs样本中筛选出HIV-1转录活跃组样本(10例)和相对非活跃组样本(11例),另外选择6例健康人PBMCs样本作为对照组。其中转录活跃组样本Ratio值为165.2~738.93,平均为(339.27±189.68);相对非活跃组Ratio值为4.67~42.39,平均为(17.65±11.78)。转录活跃组和相对非活跃组样本间的CD4+T细胞计数(P=0.049)和Ratio值(P<0.001)差异均具有统计学意义;3组样本年龄(P=0.989)和性别(P=0.650)分布差异无统计学意义。对3组样本的PBMCs基因表达谱主成分分析结果显示:对照组与HIV-1感染者(包括转录活跃组和相对非活跃组)间区分明显。转录活跃组和相对非活跃组间有部分样本重合,同时结果也显示当HIV-1感染者的CD4+T淋巴细胞计数与健康人无显著差异时,其细胞内的基因表达与健康人接近。结论基于HIV-1总DNA和RNA定量检测结果及两者间比值可以较好地区分PBMCs内病毒转录活性。HIV-1感染细胞内部病毒的不同转录激活状况可导致其基因表达谱的异质性。     

ε-聚赖氨酸对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌USA300的作用机制

摘要：目的 研究ε-聚赖氨酸(ε-polylysine，ε-PL)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)标准菌株USA300的抑菌作用及其机制。方法 依据CLSI微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration, MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration, MBC)；绘制24 h内不同浓度ε-PL作用后USA300菌株时 间-抑菌曲线；SYBR Green I/PI检测ε-PL处理后USA300的生存情况；测定ε-PL处理后菌液电导率、胞外ATP含量、可溶性蛋白 含量的变化；利用扫描电镜(scanning electron microscopy，SEM)观察ε-PL对USA300形态的影响。结果 ε-PL对USA300的MIC、 MBC分别为5.12和10.24 mg/mL。ε-PL处理后细菌死/活比例，菌液电导率，胞外ATP含量，胞外可溶性蛋白含量均增加，表明菌 膜破损；经SEM进一步确证。结论 ε-PL对USA300生长有良好的抑制作用，且与ε-PL浓度呈正相关。ε-PL处理后细胞膜结构破 坏、通透性改变，导致细胞内容物大量渗出，其抑菌机制可能与破坏细菌菌体结构有关。     

经阴道单孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术的应用

目的经阴道单孔腹腔镜手术是新兴的经自然腔道内镜手术之一，它具有无体表瘢痕、术后疼痛减轻等特点，它在妇科领域的应用越来越广泛。本文旨在探究经阴道单孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术的手术技巧及应用难点。 方法选取广州医科大学附属第三医院1例子宫肌瘤病例，逐步讲解经阴道单孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术的手术步骤及方法，演示手术技巧。 结果手术顺利完成，术中出血量少，术后病理提示坏死性肌瘤。患者的左下腹疼痛得到了缓解。术后随访3个月，患者恢复良好，无并发症。 结论经阴道单孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术是可行的，可以有效地清除病灶。但该术式对手术医师的技术提出了更高的要求，学习曲线延长，并且需要远期随访及进一步研究来评估其安全性。     

小鼠肝再生过程中MnSOD作用的初步研究

目的：研究肝切除术后小鼠肝再生过程中锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的表达及其活性的变化，探讨MnSOD在肝再生中的作用。方法：采用经典小鼠肝切除模型，将38只雄性BALB/c小鼠，随机分为30%肝切除组（30% PH组）18只，70%肝切除组（70% PH组）18只，以及对照组2只。2个肝切除组分别于术后6 h和1、2、3、5、7 d这6个时间点随机各抽取3只小鼠处死，对照组小鼠在行假手术后即处死。取肝组织，制备冰冻切片使用DHE染色法在激光共聚焦显微镜下检测活性氧（ROS）水平，实时荧光定量PCR检测小鼠肝组织中MnSOD mRNA表达水平，Western blot检测小鼠肝组织中MnSOD蛋白的表达水平，采用MnSOD试剂盒检测小鼠肝组织中的MnSOD活性。结果：肝切除术后，与对照组相比，30% PH组小鼠肝组织ROS水平在术后6 h和1 d增加，MnSOD mRNA表达水平增加（P < 0.05），MnSOD蛋白含量无显著变化（P > 0.05）；MnSOD的活性在术后第1和2天较高，第3和5天较低，第7天恢复。70% PH组小鼠肝组织ROS水平在术后第1~5天均升高，MnSOD mRNA的水平先下降后逐渐恢复，MnSOD的蛋白含量降低，MnSOD的活性在术后第6小时和1天增加，第2~7天均处于降低状态（P均 < 0.05）。结论：在肝切除术后小鼠的肝再生过程迅速启动，尤其是在70% PH后肝细胞迅速增殖，并在术后一段时间逐渐恢复到静息状态，其机制可能与MnSOD含量和活性的下调从而导致ROS升高有关。     

基于行为转变理论培训对医护人员多重耐药菌防控实践的影响

目的探讨基于行为转变理论培训对神经外科医护人员多重耐药菌防控行为的影响。方法选取某三级甲等综合医院神经外科医护人员45人,对其实施基于行为转变理论的多重耐药菌防控培训,培训前、培训后第1个月、培训后第2个月分别采用多重耐药菌防控行为阶段调查表、多重耐药菌防控实践现状调查问卷进行评价。结果培训后第1个月、第2个月医护人员多重耐药菌防控行为得分显著高于培训前,医护人员多重耐药菌防控行为处于行动阶段、维持阶段比例显著高于培训前,差异有统计学意义(均P0.05)。结论基于行为转变理论的培训有助于提高神经外科医护人员多重耐药菌防控措施的依从性,有利于促进防控行为向维持阶段的转变,促进多重耐药菌防控行为的落实,以预防医院感染。