肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因对人乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA (siRNA)对乳腺癌细胞黏附和侵袭力的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP4基因siRNA转染乳腺癌细胞,分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力.结果 人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-35、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株TROP-2 mRNA分别是1.362±0.057、2.207±0.056、2.997±0.052、0.136±0.045、0.122±0.025、0.194±0.028和2.706±0.039,以MCF-7细胞最高;以TROP-2 siRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;黏附实验结果显示,5、10、20 nmol/L siRNA组黏附率分别为(52.9±2.5)％、(25.6±2.3)％、(12.8±2.2)％(P＜0.01);Transwell实验结果显示,5、10和20 mol/L siRNA组穿过滤膜的细胞分别为78±17、39±15、19±16,而对照组分别为136±25、139±21(P＜0.01).结论 TROP-2基因在乳腺癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞黏附和侵袭能力.     

PLK1基因siRNA的构建及对甲状腺未分化癌细胞增殖和凋亡的影响

目的构建保罗样激酶-1（PLK1）基因小干扰RNA（siRNA）,并观察其对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法设计合成5个PLK1siRNA（S1、S2、S3、S4、S5）,转染人甲状腺癌ARO细胞后,采用实时定量RT—PCR方法筛选下凋PLK1mRNA效果最好的siRNA;然后以该siRNA转染ARO细胞后,分别以实时定量RT—PCR和Western blot检测各组细胞PLK1基因表达情况;以MTT法检测对各组细胞增殖的影响;分别以caspase-3活性和TUNEL方法明确甲状腺癌细胞凋亡情况。结果5个siRNA均明显下调PLK1mRNA水平,以S4效果最好,抑制率达91．5％。MTT结果显示,S4siRNA转染对甲状腺癌细胞增殖均有明显的抑制作用,且呈浓度和时间依赖性（P〈0．05）。与对照组比较,S4siRNA转染组癌细胞caspase-3活性明显升高,且呈浓度和时间依赖性（r=0．919;r=0．957）;TUNEL结果显示,S4 siRNA转染组出现明显的凋亡现象,且呈浓度依赖性（r=0．932）。结论PLK1基因在甲状腺未分化癌细胞增殖中具有重要的调控作用。PLK1 siRNA转染可明显抑制癌细胞增殖,诱导凋亡是其重要机制之一。     

VEGF基因沉默对胰腺癌细胞化疗敏感性和Akt信号通路的影响

目的 观察靶向血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对胰腺癌BxPC3细胞化疗药物敏感性的影响,并探讨其可能机制.方法 将培养后的BxPC3细胞分为单纯BxPC3细胞组、脂质体处理组、错配siRNA转染组和VEGFsiRNA转染组.以5、10、20、100、200 nmol/L的VEGF siRNA转染BxPC3细胞.采用实时定量RT-PCR和ELASA法检测细胞VEGF mRNA和蛋白的表达;MTT法检测吉西他滨对各组细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测BxPC3细胞Akt蛋白的磷酸化.结果 VEGF siRNA转染后,BxPC3细胞VEGF mRNA和蛋白呈浓度和时间依赖性明显下调,但对BxPC3细胞的增殖无明显影响.用0.2 μmol/L吉西他滨处理细胞48 h后,BxPC3细胞组、错配siRNA组及5、10、20 nmol/L siRNA组细胞的生长抑制率分别为(16.9±0.3)%、(17.3±0.3)%、(28.8±0.4)%、(52.2±0.3)%、(75.4±0.4)%,抑制率与siRNA浓度相关(r=0.928).同时,siRNA转染后细胞Akt蛋白的磷酸化被明显抑制.结论 VEGF基因在胰腺癌BxPC3细胞耐药中起着重要的作用,其机制可能与Akt蛋白磷酸化有关.     

基于 Oncomine数据库探讨METTL3在胃癌中的意义

目的 探讨METTL3在胃癌中的表达及意义。方法 收集Oncomine数据库中关于METTL3的数据信息,对其在胃癌中的作用进行统计分析。利用Kaplan-Meier Plotter进行患者生存周期分析。结果 经过筛选,涉及mRNA METTL3在正常胃组织和胃癌组织表达差异的研究共4项(其中按照病理分为9项,共包含346例组织样本),与对照组相比,METTL3在346例胃癌组织中高表达(P<0.05)。METTL3表达量与胃癌总体生存呈负相关,METTL3表达水平越高则患者总体生存率越低(P<0.05)。根据胃癌Lauren分型探讨,发现肠型胃癌以及混合型胃癌中METTL3的表达情况与生存时间之间关系不大(P>0.05)。弥漫型胃癌中,METTL3的表达水平与预后具有相关性,且METTL3表达水平高的患者生存更获益(P<0.05)。针对HER2阳性的胃癌,METTL3的表达水平与胃癌患者预后呈负相关(P<0.05)。结论 mRNA METTL3在胃癌组织中高表达,且与胃癌预后有关,可能为肿瘤药物的开发提供重要理论依据,但需要更多的研究进行探讨。     

关注方法指导拓展数学思维——小学数学拓展课程建设的研究实践

近几年来在小学数学的教学课堂中,拓展课程已经开始占有一定的主导地位,它改变了原有的教学模式,使课堂学习更加贴近生活实际,提高了学生的学习积极性,对于小学生的综合能力素质的提高有着非常重要的实际意义.     

RNA干扰下调midkine基因表达对人乳腺癌细胞粘附和侵袭力的影响

目的探讨中期因子（midkine,MK）基因siRNA对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法培养人乳腺癌Bcap-37、LCC1、MCF-7、MDA—MB-231、MDA—MB-435、MDA—MB-468及ZR75—1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测MK基因mRNA表达;筛选出MK表达最高者。采用MK siRNA转染乳腺癌细胞株,分别以荧光实时定量RT—PCR和免疫荧光方法观察MK基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝（MTT）比色法检测细胞粘附性,以Boyden小室方法检测癌细胞侵袭能力。结果7株乳腺癌细胞中,MK均有不同程度的表达,以MCF-7细胞最高;以MKsiRNA转染乳腺癌MCF-7细胞后,癌细胞MK基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;siRNA转染组细胞粘附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降,均呈浓度依赖性（P〈0．01;P〈0．01）。结论MK基因在乳腺癌细胞粘附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染乳腺癌细胞,可抑制乳腺癌细胞粘附和侵袭能力。     

人源化抗ROR1抗体及其AGAP偶联物对卵巢癌生物学特性的影响

目的：制备酪氨酸激酶样孤儿受体1（tyrosine?kinase?like orphan receptor1,ROR1）的全分子抗体（ROR1?IgG1）及其与东亚钳蝎镇痛抗肿瘤多肽的融合蛋白的全分子抗体（fusion protein of ROR1 and Buthus martensii Karsch analgesic anti?tumor polypeptide IgG1,IgG1?AGAP）,检测ROR1?IgG1和IgG1?AGAP对卵巢癌细胞生物学特性的影响,探讨ROR1在卵巢癌中的作用机制。方法：以本实验室筛选并保存的ROR1Fab载体为模板,构建ROR1?IgG1和IgG1?AGAP真核表达载体,并转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO?S）,收集上清并纯化。利用酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、Biacore X100、免疫荧光、流式细胞术（fluorescence?activated cell sorting,FACS）等评估IgG1?AGAP和 ROR1? IgG1的免疫学活性。通过CCK?8法、划痕实验、Transwell侵袭实验等比较两者对卵巢癌细胞HO8910生物学特性的影响。用蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮细胞?间充质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）相关标志物的表达,评估ROR1?IgG1和IgG1?AGAP对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果：成功制备出ROR1?IgG1和IgG1?AGAP,且能够与ROR1蛋白特异性结合;IgG1?AGAP与ROR1?IgG1均可抑制ROR1阳性卵巢癌细胞HO8910的增殖、迁移、侵袭,且IgG1?AGAP组的抑制作用显著高于ROR1?IgG1组,而未观察到对ROR1阴性人正常卵巢上皮细胞IOSE386的抑制作用。Western blot结果表明,在空白对照组、ROR1?IgG1组和IgG1?AGAP组中,Snail的表达量呈现递减趋势,而E?cadherin表达量递增,提示 ROR1?IgG1和IgG1?AGAP可通过调控 Snail和E?cadherin而抑制HO8910细胞发生 EMT,进而抑制其迁移和侵袭能力。结论：IgG1?AGAP可有效靶向表达ROR1的卵巢癌细胞,并具有显著的抗肿瘤活性,IgG1?AGAP可作为ROR1阳性肿瘤患者的潜在候选药物。     

TROP-2基因小干扰RNA转染对前列腺癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的观察肿瘤相关钙信号转导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA(siRNA)转染对前列腺癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响。方法以TROP-2基因siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞后,分别用实时荧光定量PCR和Western blot法检测细胞TROP-2 mRNA和蛋白,用MTT法检测PC-3细胞吸光度值(以此判断细胞黏附力),以Tr-answell小室实验观察细胞的迁移、侵袭情况。结果与空载对照组相比,TROP-2 siRNA组TROP-2 mRNA的表达明显下降(P均<0.01)并呈浓度和时间依赖性(P均<0.01);与空白对照组及空载对照组相比,TROP-2 siRNA组TROP-2蛋白的表达明显下降(P均<0.01)并呈浓度和时间依赖性(P均<0.01);与空白对照组相比,TROP-2 siR-NA组细胞黏附力下降(P<0.01)并呈浓度、时间依赖性(P均<0.05);与空白对照组及空载对照组相比,TROP-2siRNA组细胞迁移、侵袭数明显减少(P均<0.01)并呈浓度依赖性(P均<0.01)。结论 TROP-2基因siRNA转染可抑制前列腺癌PC-3细胞黏附、迁移和侵袭。     

RNA干扰下调midkine基因表达对人乳腺癌细胞粘附和侵袭力的影响

目的 探讨中期因子(midkine,MK)基因siRNA对乳腺癌细胞生物学行为的影响.方法 培养人乳腺癌Bcap-37、LCCI、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435、MDA-MB-468及ZR75-1细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测MK基因mRNA表达;筛选出MK表达最高者.采用MK siRNA...