LDH释放法检测肿瘤患者PBMC和CIK细胞的细胞毒活性

目的建立检测细胞毒活性的乳酸脱氢酶（LDH）测定法，了解肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMC）和细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的抗肿瘤活性，为肿瘤的免疫细胞治疗提供参考。方法采集肿瘤患者和健康成人外周血，常规分离PBMC，体外进行CIK的培养，用LDH释放法分别检测PBMC和CIK对肿瘤细胞K562的细胞毒活性。结果肿瘤患者PBMC对K562的杀伤活力比正常人显著降低（P〈0．05）。经多种细胞因子诱导培养7～10d后，健康人和肿瘤患者的CIK对K562的杀伤活力都有显著提高（P〈0．01），肿瘤患者CIK杀伤活力接近于健康人。结论肿瘤患者PBMC细胞毒活性显著降低，但经诱导培养成CIK后则显著提高。用LDH释放法检测肿瘤病人CIK细胞毒活力，有助于CIK疗法适应病人的选择及个体疗效观察。     

心肺转流术后肝损伤机制的研究进展

心脏病患者接受心肺转流术（CPB）支持下的心脏手术后3～5d内,谷草转氨酶、谷丙转氨酶、胆红素、碱性磷酸酶等肝功能指标出现不同程度的升高,有些患者还出现明显的黄疸,并延时不退.这些症状减缓了术后患者恢复的进程,更有甚者影响患者的预后,已成为CPB后不可忽视的重要并发症之一.遇到的这些情况向人们提出：CPB是否造成肝组织损伤？损伤的机制是什么？作者就这些问题,对目前关于CPB后肝损伤机制的研究作一综述.     

2种欧洲心脏手术风险评估系统评分对冠状动脉旁路移植术风险的预测价值

目的冠状动脉旁路移植术（coronary artery bypass graft,CABG）术前风险评估对手术治疗方案的选择及预后预测有重要指导意义。文中旨在探讨2种欧洲心脏手术风险评估系统（European system for cardiac operative risk evaluation,Eu-roSCORE）评分对CABG术后患者早期死亡率及并发症的预测价值。方法 CABG患者212例,收集整理EuroSCORE全部危险因子的详细数据,进行Additive与logistic评分。按Additive Euro SCORE分值将患者分为高风险组：61例,男51例,女10例,平均年龄为（72.9±6.3）岁;中风险组：90例,男73例,女17例,平均年龄为（68.8±7.5）岁;低风险组：61例,男54例,女7例,平均年龄为（58.4±5.8）岁。统计出患者实际死亡率和主要并发症的发生率,采用受术者特征（receiver operating charac-teristic,ROC）曲线评价2种EuroSCORE的预测价值,logistic回归分析EuroSCORE与术后发生并发症之间的关联。结果观察期（1个月）内共死亡7例患者,实际总死亡率3.3%,预测总死亡率Additive EuroSCORE为4.2%,logistic EuroSCORE为4.3%,高度风险组实际死亡率为8.2%,预测值分别为7.5%和9.1%;中度风险组实际死亡率为2.3%,预测值分别为3.9%和3.1%;低度风险组实际死亡率为0,预测值分别为1.1%和1.3%。Additive EuroSCORE与logistic EuroSCORE的ROC曲线下面积分别为0.837和0.840。logistic回归分析显示,logistic EuroSCORE与术后各系统发生并发症有更好的相关性,较Addi-tive EuroSCORE优越。结论 Additive评分和logistic评分均对CABG患者术后死亡危险具有较好的预测和估计作用,但两者之间在危险程度的判断上无显著差异。同时,logistic评分对于多种并发症具有较好的预测作用,可作为术前准备、手术决策的重要依据。     

n-3多不饱和脂肪酸对心脏移植物血管病变的影响

背景:鱼油中的大量n-3多不饱和脂肪酸能抑制心脏移植物血管病变,延长移植物存活时间,但机制尚不完全清楚.新近研究提示,在体外实验中n-3多不饱和脂肪酸可通过活化过氧化物酶增殖子活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)抑制炎性递质释放.目的:拟证实活化PPARγ否为n-3多不饱和脂肪酸缓解心脏移植物血管病变的新机制之一.方法:随机选取6只Lewis大鼠及18只Fisher344作为心脏供体.抽签法将另外24只Lewis大鼠随机分为4组作为受体,每组6只:同系移植组:Lewis大鼠之间心脏移植,不给予任何药物:低剂量鱼油组:行F344→Lewis异系移植,术后第1天开始按0.03 mL/kg给予鱼油灌胃8周;高剂量鱼油组:行F344→Lewis异系移植,术后第1天开始按0.06 mL/kg给予鱼油灌胃8周:对照组:行F344→Lewis异系移植,给予等体积环孢素A灌胃8周.低、高剂量鱼油组均在移植后开始环孢素A1.5mg/(kg·d)肌注2周.组织学检查评价心脏移植物血管病变,组织匀浆测定核因子kB及PPARγ活性,ELISA测定单核趋化蛋白1、干扰素诱导蛋白10含量,实时定量PT-PCR检测趋化因子受体CCR2及CXCR3表达.结果与结论:所有24只受体Lewis大鼠术后均顺利存活,供心在移植后8周仍有规律搏动.与同系移植组相比,移植8周后对照组心脏移植物发生了严重心脏移植物血管病变.与对照组相比,高、低剂量鱼油组心脏移植物血管病变均显著缓解,PPARγ性显著提高,核因子KB活性显著下降,组织匀浆单核趋化蛋白1及干扰素诱导蛋白10含量显著降低,趋化因子受体CCR2表达亦显著下调(P<0.001,P<0.05),高剂量鱼油组作用更明显(P<0.05).高、低剂量鱼油组及对照组CXCR3表达差异无显著性意义.实验证实,n-3多不饱和脂肪酸可通过活化核蛋白PPARγ制核因子kB活性与趋化因子及其受体表达,呈剂量依赖性缓解近交系大鼠模型心脏移植物血管病变的发生及发展.     

大鼠体外循环肾损伤的实验研究

目的:研究大鼠体外循环(cardio pulmongary bypass,CPB)后的肾脏损伤及其相关机制。方法:30只雄性SD大鼠随机均分为两组(n=15):Sham组和CPB组,Sham组建立CPB模型管道,不进行CPB;CPB组建立CPB后流量逐步调至最大[≥100mL/(kg·min)]转流维持1h。分别于肝素化后转流前(T0)和转流结束后(T1)、术后0.5h(T2)、术后1h(T3)、术后2h(T4)及术后24h(T5)检测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平,术后24h(T5)取肾脏组织,检测组织中TNF-α、IL-1β、IL-6浓度及NF-κBP65基因及蛋白表达水平,并行HE染色观察组织形态改变。结果:在T1至T5各时间点,CPB组血清SCr、BUN及组织中TNF-a、IL-1β、IL-6含量均明显高于Sham组(P<0.05),在T0两组无显著差异;CPB组肾组织NF-κBP65基因及蛋白表达水平均明显高于Sham组(P<0.05);CPB组的肾小管上皮细胞肿胀、胞浆内空泡形成、间质出血等病理学改变(P<0.05)。结论:CPB可导致肾组织NF-κBP65激活,上调TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子表达,引起肾脏损伤。     

促红细胞生成素减轻大鼠体外循环肾损伤的实验研究

目的急性肾损伤是心脏体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)术后常规并发症之一,文中研究促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对于大鼠体外循环肾损伤的保护作用并探讨相关机制。方法 30只雄性SD大鼠随机均分为3组(n=10):Sham组、CPB组、EPO组,Sham组建立CPB模型管道,不进行CPB,其余2组建立CPB,最大流量[≥100ml/(kg.min)]转流维持1 h,EPO组于转流前在预充液中加入3000 U的EPO。分别于肝素化后转流前(T0)和转流结束后(T1)、术后0.5h(T2)、术后1h(T3)、术后2h(T4)以及术后24h(T5)检测血清肌酐(creatinine,CR)、尿素氮(blood urea nitro-gen,BUN)水平,术后24 h取肾组织,检测组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素(inteleukin)-1β、IL-6及核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)P65、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达水平。并行HE染色观察组织形态改变。结果与CPB组相比,在T1至T5各时间点EPO组血清Cr、BUN水平明显下降(P<0.05),而在T0时3组无显著差异;肾组织中TNF-α、IL-1β、IL-6含量EPO组均明显低于CPB组(P<0.05);肾组织中NF-κBp65、ICAM-1 EPO组表达水平亦较CPB组显著下降(P<0.05);组织病理学检查显示EPO组的肾小管上皮细胞肿胀、细胞质内空泡形成、间质出血等病理变化明显减轻。结论 EPO可能通过抑制NF-κB p65的激活,进而下调ICAM-1、TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性因子的表达,显著减轻CPB术后肾损伤。     

体外循环后大鼠肝损伤的研究

目的:研究体外循环(CPB)对大鼠肝脏的损伤,并探讨其可能机制. 方法:选用成年SD大鼠24只,随机分为伪手术组(Sham组)和CPB组.Sham组行类似操作,但不实施CPB.CPB组建立CPB,最大流量≥100ml/(kg·min)转流60min.于肝素化后转流前(T1)和转流结束后(T2)进行动脉血气分析.测T1、T2、术后30min(T3)、术后1 h(T4)、术后2 h(T5)、术后3 h(T6)以及术后24h(T7)的ALT、AST和LDH以及TNF-α.术后24 h取肝组织,测定丙二醛(MDA)、总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原性谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽还原酶(GSSG-R)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),同时行组织学检查. 结果:CPB后大鼠血压、红细胞压积(HCT)、动脉血氧分压PaO<,2>和PH值较Sham组有统计学改变,但仍在可接受范围.CPB组大鼠术后肝功能指标较Sham组均有显著的升高,峰值出现在术后1-2 h.血清TNF-α也呈现明显高于Sham组的趋势,同时CPB组肝MDA浓度,tNOS和iNOS活性也有较大幅度上升,而GSH浓度,SOD、CAT、GSSG-R、GST、GSH-Px活性的变化则相反.24 h肝组织学检查提示心肺转流对肝造成的损伤主要表现为肝细胞坏死,炎性细胞浸润. 结论:CPB对肝有损伤作用,在这一病理生理过程、炎症反应和缺血冉灌注损伤都起着举足轻重的作用,这两种机制相互影响、相互诱导、相互促进,最终导致了严重的肝损伤.     

CIK体外抗癌活性分子机制的探讨

目的:分析细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell, CIK)抗肿瘤活性增强的分子机制.方法:从健康人志愿者和恶性肿瘤患者PBMC培养获得CIK细胞,用LDH释放法分别对PBMC和CIK进行体外杀伤肿瘤细胞的活性测定,用流式细胞术分析PBMC和CIK细胞群中颗粒溶素(granulysin, GNLY)和穿孔素(perforin, PFN)的表达.结果:在效靶比为5∶1时,健康人和肿瘤患者PBMC对肿瘤细胞K562的裂解率分别为6.33%和1.29%,两组CIK细胞对肿瘤细胞K562的裂解率分别为14.7%和14.16%,PBMC与CIK对细胞的裂解率显著提高,P<0.01;GNLY阳性表达细胞百分比由4.43%和1.95%上升到19.15 % 和17.52%,P<0.01.但PFN细胞却由21.91 % 和14.69%降低到4.96%和3.7%,P<0.05.结论:肿瘤患者PBMC抗肿瘤活性下降可能与该细胞中GNLY和PFN表达减少有关;CIK细胞杀伤肿瘤活性的提高可能与GNLY的表达增加相关;PFN表达下降可能是维持CIK细胞在体外大量增殖的调节因素.     

心血管手术后胸骨伤口并发症的外科治疗

目的 心血管手术后胸骨伤口并发症严重影响患者的预后,处理较棘手.文章分析其发病率、危险因素,总结外科治疗经验和结果. 方法 分析南京军区南京总医院2006年1月至2016年1月心血管手术后出现胸骨伤口并发症21例患者的临床资料,其中男14例,女7例.年龄38~78岁,平均(66.3±10.1)岁.单纯冠状动脉旁路移植术(CABG)13例,CABG合并瓣膜病1例,单纯瓣膜手术5例,大血管手术2例.胸骨伤口裂开者立即重新钢丝固定.深部胸骨伤口感染确诊后即开放伤口,纱条换药引流,同时经静脉经予广谱抗生素,待伤口创面干净、肉芽新鲜结合患者全身情况再行清创术或肌瓣转移修复术. 结果 胸骨伤口裂开5例,深部胸骨伤口感染16例,伤口愈合时间分别为(15.4±11.0)d和(73.8±50.5)d,总住院时间分别为(29.0±9.4)d和(86.3±59.4)d,伤口愈合时间和总住院时间在深部胸骨伤口感染组明显延长(P<0.05).深部胸骨伤口感染行保守治疗10例,积极治疗6例,伤口愈合时间分别为(94.1±60.3)d和(29.2±8.5)d,总住院时间分别为(106.3±68.1)d和(43.1±11.4)d,采取积极清创后伤口愈合时间和总住院时间均有明显下降(P<0.05). 痊愈19例(90.5%),死亡2例(9.5%).随访感染无复发. 结论 心血管术后胸骨伤口并发症是严重的手术并发症,应根据伤情种类、患者全身情况综合考虑治疗方案,重点预防和早期发现加上充分引流和彻底清创对减少该并发症提高治愈率有重要意义.     

非体外循环不停跳冠脉旁路移植治疗左主干重度狭窄临床分析

目的 探讨非体外循环不停跳冠状动脉旁路移植术(OPCAB)治疗冠状动脉左主干(LMCA)重度狭窄的临床疗效.方法 回顾性分析LMCA重度狭窄行冠状动脉旁路移植术(CABG)患者163例临床资料,其中96例实施OPCAB(OPCAB组),67例实施常规体外循环冠状动脉旁路移植术(CCAB组).结果 OPCAB组冠脉造影-手术间隔时间、术后呼吸机使用时间、正性肌力药物使用比例均明显少于CCAB组,急诊比例、术后24-h引流量高于CCAB组.结论 OPCAB治疗LMCA重度狭窄是安全有效的.