线粒体能量代谢和DNA复制对小鼠卵子体外成熟、受精及发育的影响

目的 探讨胞质线粒体的氧化磷酸化（OXPHOS）活性或线粒体DNA复制在卵子成熟、受精和胚胎发育过程中的作用。方法 通过在小鼠体外成熟培养液中引入不同浓度的羰基氰4-(三氟甲氧基)苯腙 (FCCP, 10 nmol/L和100nmol/L)或2′,3′-双脱氧胞苷(ddC,10μmol/L和100μmol/L),抑制线粒体OXPHOS活性或线粒体DNA复制,统计分析各组卵子的体外生发泡破裂（GVBD）率、核成熟率、受精率及囊胚形成率,以分析线粒体功能抑制对卵子成熟、受精和胚胎发育的影响。 结果 线粒体OXPHOS活性和DNA复制功能在卵子和胚胎中所发挥的作用并不完全相同。FCCP抑制线粒体OXPHOS活性可显著降低卵子的核成熟率和囊胚形成率;但对卵子的GVBD的发生率和受精率无显著影响。而ddC抑制线粒体DNA复制不影响卵子的体外成熟和受精,但可显著抑制囊胚的形成。 结论 OXPHOS活性主要影响卵子成熟及胚胎发育;线粒体DNA复制则主要影响胚胎发育;而线粒体功能抑制不影响卵子的成熟启动和体外受精。     

抑制线粒体氧化磷酸化活性对卵子体外成熟、受精及发育的影响

目的:通过建立氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OXPHOS)活性抑制模型,分析线粒体能量代谢在卵子成熟、受精和胚胎发育过程中的作用。方法:卵子体外成熟培养液中引入10和100 nmol/L羰基氰4-(三氟甲氧基)苯腙[carbonyl cyanide p-(tri-fluromethoxy)phenyl-hydrazone,FCCP],以特异性抑制线粒体OXPHOS活性,分析卵子线粒体膜电位强度、三磷酸腺苷含量以及线粒体DNA拷贝数,以验证FCCP效应;检测卵子的活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量、纺缍体和染色体结构完整性,并统计分析卵子体外生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)率、核成熟率、受精率及囊胚形成率。结果:FCCP(10和100 nmol/L)处理组与对照组相比,卵子的核成熟率(55.8%和47.3%,vs.62.9%)、纺锤体/染色体结构完整率(37.9%和34.7%,vs.61.9%)、ROS水平(0.67和0.59,vs.0.94)和囊胚形成率(57.9%和41.8%,vs.68.3%)均有显著降低(P<0.05);而FCCP处理对卵子的GVBD发生率和体外受精率均没有显著影响(P>0.05)。结论:线粒体能量缺乏显著降低卵子的核成熟率、ROS生成、纺锤体/染色体结构完整率和囊胚形成率,但对卵子的GVBD发生率和受精率没有显著改变。     

Ü卵子体外成熟对胞质线粒体DNA拷贝和功能的影响

目的 研究卵子体外成熟（IVM）过程对胞质内线粒体的数目、功能及卵子质量的影响,进而探讨IVM卵子低发育潜能的可能机制。方法 实验小鼠随机分为IVM组和体内成熟（IVO）组;应用Real-time-PCR、免疫荧光和荧光-荧光素酶测定法,分别检测IVM和IVO来源卵子的线粒体DNA（mtDNA）拷贝数、线粒体膜电位强度、ATP含量、线粒体分布、胞质ROS水平、卵子骨架和染色体结构。 结果 相对于IVO卵子,IVM卵子的mtDNA拷贝数显著降低;而胞质ROS生成和纺锤体及染色体结构异常率则显著增加。胞质线粒体分布模型和氧化磷酸化活性在IVM和IVO卵子间差异无显著意义。结论 非生理性IVM过程显著抑制了胞质mtDNA的复制,并增加了ROS生成和纺锤体和染色体结构异常,继而可能影响卵子细胞质的成熟进程,这可部分解释IVM卵子低发育潜能的机制。     

不同营养素伍配对大鼠铅神经毒性抑制作用

目的探讨不同营养素对铅神经毒性的干预作用。方法大鼠经醋酸铅饮水染毒4周,采用7因素2水平正交设计用牛磺酸、维生素B1等7种营养素以不同配伍进行干预,4周后测定大鼠学习记忆能力、海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)水平。结果营养素干预组定位航行测试第2,3d平均潜伏期分别为(21.41±14.14),(19.35±10.89)s,低于阳性对照组(34.42±11.49),(32.48±15.06)s(P0.05);某些营养素配伍可明显改善铅对海马SOD,NOS和NO的影响(P0.01);牛磺酸对SOD、NOS、NO的升高影响最为明显(P0.01),极差分别为85.30,0.82,31.24。结论营养素可改善铅对大鼠脑海马的损害,多营养素合用可提高染铅大鼠学习记忆能力。     

剖宫产仔鼠行为认知能力与nNOS表达变化

目的探讨剖宫产出生仔鼠行为认知能力和脑型一氧化氮合酶(neural nitric oxide synthase,nNOS)表达变化。方法妊娠大鼠随机分为2组:阴道产和剖宫产组;剖宫产组于孕21 d剖宫取仔鼠。对生后30和115 d的仔鼠先行Morris水迷宫行为学测试,并分别于出生7、30和115 d后处死仔鼠,免疫组化检测额叶皮质、海马和纹状体中nNOS表达。结果行为学测试:出生115 d成年鼠的逃避潜伏期阴道产组为(19.36±10.51)s,低于剖宫产组的(30.51±14.11)s(P<0.05);免疫组化结果显示:出生30 d幼鼠额叶皮质的nNOS阳性细胞剖宫产组(3.60±2.07)高于阴道产组(1.20±0.45)(P<0.05),海马中剖宫产组(5.80±1.79)明显高于阴道产组(1.20±0.45)(P<0.001),纹状体中阴道产组(0)明显少于剖宫产组(21.4±9.13)(P<0.001);出生115 d成年鼠海马中的nNOS阳性细胞阴道产组(2.00±0.71)低于剖宫产组(3.80±1.48)(P<0.05)。结论剖宫产仔鼠幼年皮质、纹状体nNOS表达上调在成年后恢复正常,但在海马中则持续到成年后,并引起行为认知能力异常,提示剖宫产对仔鼠海马区造成影响可能更持久,并使与海马相关的空间记忆和学习能力受到损害。     

两种不同胚胎培养模式对体外胚胎发育和妊娠结局的影响

目的:比较2种胚胎培养模式对胚胎质量和妊娠结局的影响。方法:收集首次行IVF-ET治疗、年龄38岁、采用长方案促排卵、常规IVF授精、正常受精卵数3枚且第3日有新鲜胚胎移植的518个周期的临床资料,根据正常受精卵采用的培养模式分成单胚胎培养组(n=254)和胚胎群组培养组(n=264)。分析患者的基本资料、胚胎发育情况以及妊娠结局。结果:患者的年龄、不孕年限、基础卵泡刺激素(FSH)、Gn用量、h CG注射日内膜厚度以及各种不孕因素的比例等参数组间差异均无统计学意义(P0.05);平均获卵数、成熟率、2PN率等指标组间也均无统计学差异(P0.05),但胚胎群组培养组的卵裂率、第3日优质胚胎率、剩余胚胎可利用囊胚形成率均明显高于单胚胎培养组,差异有统计学意义(P0.05);胚胎群组培养组的种植率和临床妊娠率高于单胚胎培养组,但差异无统计学意义(P0.05)。结论:采用胚胎群组培养模式可以得到更多的优质胚胎和更高的囊胚形成率,推荐可用于日常IVF治疗周期中的胚胎培养。     

供精体外受精胚胎移植69例不同临床结局影响因素的探讨

辅助生殖技术(ART)采用冷冻供精已广泛用于治疗男性无精子症[1].对于男性不可逆的无精子症、严重的少、弱、畸型精子症及男方有不宜生育的严重遗传性疾病,同时女方合并盆腔输卵管异常等因素的夫妇,或多次行供精人工授精(AID)助孕未孕的夫妇,临床上可行供精体外受精-胚胎移植(IVF-ET)或供精卵胞浆内单精子注射(ICSI-D)辅助生育.使用供精的特殊性在于完全排除了男性因素的干扰,为探讨排除男性因素后单纯女性因素在ART中对妊娠率的影响,以及各年龄段妊娠率、检测指标的变化,本文对本生殖中心使用供精IVF-ET治疗69例不育夫妇共75个新鲜周期及其影响临床结局的因素进行回顾性分析.     

非选择性单胚胎移植的周期结局分析

目的探讨非选择性单胚胎移植(non-elective single embryo transfer,non-e SET)的妊娠结局和相关因素对妊娠结局的影响。方法回顾性分析2008年1月~2013年5月在笔者中心实施的体外受精-胚胎移植周期中行非选择性单胚胎移植的181个周期,分析不同的体外受精方式、胚胎质量和促排卵方案对非选择性单胚胎移植妊娠结局的影响。结果非选择性单胚胎移植的临床妊娠率为12.71%。单精子胞质内注射(ICSI)组的正常受精率(2PN率)显著高于常规体外受精(IVF)组(75.48%vs 56.46%,P<0.05),但是临床妊娠率(16.36%vs 11.11%,P>0.05)差异无统计学意义;A级胚胎组的临床妊娠率(28.26%)显著高于B级胚胎组(9.52%)、C级胚胎组(6.89%)、D级胚胎组(6.25%)的各组临床妊娠率,差异有统计学意义(P<0.05)。长方案组的临床妊娠率与微刺激组相比差异无统计学意义(16.39%vs 14.29%,P>0.05),因此采用微刺激方案实施治疗可能具有更高的性价比。结论非选择性单胚胎移植的临床妊娠率与胚胎质量相关。     

辛伐他汀在血管紧张素II诱导心肌损伤过程中对ACE2的影响

【】 目的 探讨分析辛伐他汀在血管紧张素II诱导心肌损伤过程中对ACE2的影响。方法 通过将AngII加入大鼠心肌细胞制成心肌细胞损伤模型,试验分为空白对照组,ANGII组,小剂量SIM+ANGII组(预防给药),中剂量SIM组+ANGII组(预防给药),高剂量SIM组+ANGII组(预防给药),小剂量SIM组+ANGII组(治疗给药),中剂量SIM组+ANGII组(治疗给药),高剂量SIM组+ANGII组(治疗给药)。应用western blot、PCR技术检测各组的ACE2蛋白和基因表达情况。结果 和对照组相比心肌损伤模型ACE2蛋白和基因表达下降,差异显著。分别与对照组及AngII组相比各辛伐他汀治疗给药组、各辛伐他汀预防给药组ACE2蛋白和基因表达升高,且差异显著,且各辛伐他汀组之间ACE2蛋白和基因表达随着辛伐他汀浓度的升高而上升,各组差异显著。。结论 AngII刺激心肌细胞致ACE2蛋白、ACE2基因表达下降,而辛伐他汀治疗给药、预防给药使AngII损伤心肌细胞ACE2蛋白、ACE2基因表达升高,且随药物浓度升高而明显。